分子诊断学：第七章 重组DNA技术试题

第七章重组DNA技术试题一、选择题1、下列有关重组DNA技术的叙述，正确的是（）A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体B．所有的限制酶都只能识别一种特定的核苷酸序列C．选细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快D．只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达2、下列不属于获取目的基因的方法是（）A．“鸟枪法”B．转录法C．反转录法D．根据已知氨基酸序列合成法3、作为基因的运输工具-运载体，必须具备的条件之一及理由是（）A．能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因B．具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达C．具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件D．能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选4、基因治疗是把健康的外源基因导入（）A．有基因缺陷的DNA分子中B．有基因缺陷的染色体中C．有基因缺陷的细胞器中D．有基因缺陷的细胞中5、应用重组DNA技术诊断疾病的过程中必须使用基因探针才能达到检测疾病的目的。这里的基因探针是指（）A．用于检测疾病的医疗器械B．用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子C．合成β-球蛋白的DNAD．合成苯丙羟化酶的DNA片段6、基因工程的操作步骤：①使目的基因与运载体结合②将目的基因导入受体细胞③检测目的基因的表达④提取目的基因。正确的顺序是（）A．③②④①B．②④①③C．④①②③D．③④①②二、名词解释限制性核酸内切酶2、载体3、黏粒4、转化5、转染6、转导三、问答题简述质粒的概念和特性，常用的质粒载体有哪几种？简述重组DNA技术的原理及技术。简述黏性末端DNA重组体的构建过程。举例说出重组DNA技术在医药领域的应用。答案一、选择题1．B2．B3．A4．A5．B6．C二、名词解释1、限制性核酸内切酶简称限制酶，是一类能识别双链DNA分子中某特定的核苷酸序列，并在识别序列内或附近切割DNA双链结构的核酸内切酶。它是一类专一性很强的核酸内切酶，在基因的分离、DNA结构的分析、载体的改造以及体外重组中均有重要作用。2、是指能携带目的基因进入宿主细胞进行扩增和表达的一类DNA分子。载体按照基本组成元件的来源不同，可分为质粒载体、噬菌体载体、噬菌粒载体、粘粒载体、人工染色体载体等。按功能可分为克隆载体和表达载体。3、黏粒又称柯斯质粒，是一种λ噬菌体以为基础，专门为克隆大片段而设计并和质粒共同构建的杂合载体。它由λ噬菌体DNA的cos位点序列和质粒的复制子构建而成。把带有目的基因的重组质粒DNA引入受体细胞的过程成为转化。将重组噬菌体DNA直接引入受体细胞的过程则称为转染。若重组噬菌体DNA被包装到噬菌体头部成为有感染力的噬菌体颗粒，再以此噬菌体为运载体，将头部重组DNA导入受体细胞中，这一过程成为转导，通常成为感染。三、问答题1、质粒为细菌染色体外一些双链、共价闭合环状DNA分子，是能够进行独立复制并保持稳定遗传的复制子。质粒具有复制和控制机构，能够在细胞质中独立自主的进行自身复制，并使子代细胞保持它们恒定的拷贝数。质粒一般具有以下特性：①自主复制性，它能独立于宿主细胞的染色体DNA而自主复制；②质粒不相容性；③可扩增性；④可转移性。理想质粒载体应具备①具有松弛型复制子；②在复制子外存在几个单一的酶切位点；③具有插入失活的筛选标记；④分子量相对较小，有较高的拷贝数。常见的质粒载体有：pBR322质粒、pUC质粒载体、pGEM系列载体等。2、重组DNA是在体外利用限制性内切酶，将不同来源的DNA分子进行特异的切割，获得的目的基因或DNA片段与载体连接，从而组成一个新的DNA分子。重组的DNA分子能够通过一定的方式进入相应的宿主细胞，并在宿主细胞中进行无性繁殖，获得大量的目的基因或DNA片段。经重组的DNA分子能在宿主细胞中进行表达，获得相应的蛋白质。大致步骤包括：=1\*GB3①目的基因的获取；=2\*GB3②载体的选择；=3\*GB3③目的基因与运载体连接成重组DNA；=4\*GB3④重组DNA导入受种细胞；=5\*GB3⑤重组体的筛选。3、目的基因和载体可由同一种限制酶切割后产生，或由不同的限制酶切割形成互补黏性末端，经退火，彼此间很容易按碱基配对原则形成氢键。然后由DNA连接酶催化连接接头处的缺口，形成重组质粒。载体DNA在限制酶切割后，用碱性磷酸酶处理，除去5’端磷酸基，以避免载体DNA自身环化。4、可以利用重组DNA技术探明致病基因的结构和功能，了解其致病机制；开发基因工程药物和疫苗用于临床；建立基因诊断、治疗技术，为疾病的预防、治疗提供新方法、新技术。具体可用于基因诊断：基因诊断是从基因水平上检测人类遗传性疾病的基因缺陷；基因治疗：是指将人的正常基因或有治疗作用的基因通过载体导入人体靶细胞取代靶细胞中的缺陷基因，从而达到治疗疾病目的的方