动物的克隆课件

第三节动物的克隆机械消化或者胰酶消化一、动物细胞、组织培养1、什么方法取得离体的单个动物细胞？2、离体的动物细胞能否正常的生活、表现出正常的生命活动？〔胰蛋白酶〕〔1〕贴壁生长：悬浮液中分散的细胞紧贴培养瓶内壁才能生长。〔2〕接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到外表相互接触时，细胞就会停止分裂。〔3〕正常的生命活动：生长、分裂、有规律的衰老、死亡等现象。2、适宜的环境条件无菌、无毒环境：加抗生素，定期更换培养液适宜的温度和pH值：〔如人体细胞培养〕温度：36.5±0.5℃pH值：适宜的气体环境：O2和CO2〔95%空气和5%CO2〕〔一〕培养条件三、动物细胞培养过程成分：无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等1、含全部营养物质的培养液原代培养传代培养…………原代培养物细胞系：可连续传代的细胞原代培养物在首次传代时就成为细胞系。能连续培养的

连续细胞系不能连续培养的

有限细胞系四、细胞系、细胞株〔二倍体细胞〕〔异倍体核型细胞〕〔1〕恶性细胞系，异体致瘤性〔2〕保存接触抑制，不致癌〔遗传物质改变，不死性〕2、细胞株：

通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞系。如：单抗细胞株

细胞株一般具有恒定的染色体组型、同工酶类型、病毒敏感性和生化特性等。遗传物质未改变。连续细胞株：可连续屡次传代的细胞株。有限细胞株：传代次数有限的细胞株细胞系：泛指可传代的细胞。细胞株:具有特殊性质的细胞系。五、克隆培养法〔细胞克隆〕1、概念：把一个单细胞从群体中别离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术。2、特点：遗传性状均一、表现的性状相似，便于研究异质性细胞系克隆培养纯系〔克隆〕3、最根本要求:保证所建成的克隆来源于单个细胞4、适合于克隆的细胞：

对环境有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞5、提高细胞克隆形成率的措施：选择适宜的培养基添加血清〔胎牛血清〕(能促进细胞的生长、增殖和贴附)以滋养细胞支持生长〔经射线照射的小鼠成纤维细胞〕激素刺激〔胰岛素等〕使用CO2培养箱，调节PH

群体细胞>单细胞无限细胞系、转化或肿瘤细胞>原代细胞、有限细胞系6、细胞克隆的主要用途：从普通细胞系中别离出缺乏特殊基因的突变细胞系。用于研究细胞的遗传规律和生理特性。动物的细胞融合技术及其应用一、细胞融合与细胞杂交

1、定义

指用自然或人工方法,使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。不同基因型的细胞之间的融合就是细胞杂交。2、诱导方法动物免疫别离B淋巴细胞细胞融合——淋巴细胞杂交瘤的制备杂交瘤细胞的筛选杂交瘤细胞的克隆单克隆抗体的提取二、单抗的制备过程单克隆抗体筛选杂交细胞杂交瘤细胞体外或体内细胞培养筛选骨髓瘤细胞诱导细胞融合特异性杂交瘤细胞杂交瘤细胞系提取经过免疫的B淋巴细胞动物细胞融合技术动物细胞培养技术单克隆抗体的制备过程：特点：既能产生专一抗体又能大量繁殖特点：特异性强灵敏度高可大量制备注射抗原免疫动物的克隆繁殖一、动物细胞全能性的表现程度桑椹胚八分裂球受精卵二分裂球四分裂球囊胚原肠胚幼体组织、器官1、动物的受精卵，卵裂球含有2-8个细胞时，每个细胞具有全能性。2、随着胚胎发育的继续，有的细胞只具有分化出各种组织细胞的潜能，这样的细胞叫多能细胞。3、有的细胞只能分化为一种细胞，叫单能细胞。受精卵>胚胎细胞>多能细胞>单能细胞>体细胞2、低等动物细胞：全能性一般容易表达。1、高等动物细胞3、癌细胞：仍能逆转为正常细胞。无论分化还是癌变，变化的都是表现型，基因组成的完整性可以保存。一、动物细胞全能性的表现程度为什么动物细胞很难表现出全能性？二、动物难以克隆的根本原因：☆基因表达的调控使得细胞中合成了专一的蛋白质。一类基因是维持生存的，在各种细胞中都处于活动状态〔如呼吸氧化酶基因等〕；另一类基因随着组织器官和发育阶段不同而选择性表达〔如胰岛素基因、血红蛋白基因等〕。☆研究说明，各种特化细胞的细胞核中物种基因组完整，具有全能性。☆但是分化后的动物细胞基因组基因的活动不完全三、核移植和动物的克隆繁殖去核注核重组细胞1、核移植：利用一个细胞的细胞核〔供体核〕,来取代另一细胞中的细胞核，形成一个重建的“合子〞〔重组细胞〕，使发育成一个新的个体。胚胎细胞核移植成功率远高于成体细胞核移植。

胚胎细胞克隆：使用的供体核来自胚胎

体细胞克隆：使用的供体核来自体细胞1952年，罗伯特.布里格斯：

豹蛙→囊胚细胞核+去核的卵母细胞→发育成个体1978年，童第周：

黑斑蛙→成体红细胞核→去核的卵细胞中→发育成蝌蚪2、动物克隆繁殖：多莉的培育用到了哪些技术?核移植、动物细胞培养、胚胎移植1.阅读课本P39-37，找出体细胞羊的克隆成功的证明了什么？克隆羊成功的部分原因克隆动植物的应用2.在体细胞核移植过程中选择卵细胞作为受体细胞的原因：卵细胞大易操作，细胞质中缺少阻止核基因表达的调节蛋白2.在体细胞核移植过程中选择卵细胞作为受体细胞的原因：细胞质中具有有效调控细胞核发育的蛋白因子，卵细胞大易操作，营养丰富体细胞克隆羊的培育成功，证明了什么？高度分化细胞经一定技术处理，也可回复到类似受精卵时期的功能。在胚胎和个体发育中，细胞质具有调控细胞核〔包括异源的细胞核〕发育的作用。

同时也证明了动物的细胞核具有全能性体细胞克隆羊成功的分子细胞生物学机理：1、核移植前对乳腺细胞的营养限制性培养〔调节牛血清浓度〕和电脉冲细胞融合技术，有利于核的变化和细胞融合后基因表达分子开关启动。2、重组卵细胞最初分裂时，转录并未开始。3、重组卵细胞的供体核DNA丧失了来源于乳腺细胞的阻止核基因表达的调节蛋白。4、开始第三次分裂时，原乳腺细胞的调节蛋白全部被卵细胞质中的蛋白因子替换了，核DNA被重新编排，胚细胞开始表达自己的基因。动物克隆的应用：〔1〕有利于遗传疾病的治疗，优良品种的培育〔2〕对物种的优化、濒危动物的保护和转基因动物的扩群有重要意义〔3〕丰富人们的物质生活，降低畜牧业的本钱，缩短育种年限，提高生产效率在体细胞核移植过程中选择卵细胞作为受体细胞的原因：细胞质中具有有效调控细胞核发育的蛋白因子，卵细胞大易操作，营养丰富体细胞核移植技术存在的问题：

许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。3、动物克隆成功的条件：〔1〕具有包含本物种完整基因组的细胞核的活细胞如：乳腺上皮细胞；〔2〕能有效调控细胞核发育的细胞质物质如：去核卵的细胞质；〔3〕完成胚胎发育的必要的环境条件如：诱导重组细胞生长、分化的实验条件和怀胎母体的子宫环境1、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞〔〕

A、容易产生各种变异B、具有更强的全能性C、取材十分方便D、分裂增殖的能力强D2、以下为有关动物细胞培养的表达，其中不正确的选项是A．用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织B．将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞C．在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液D．动物细胞培养只能传50代左右，所培养的细胞全部衰老死亡D2、用动、植物成体的体细胞进行离体培养，以下表达正确的选项是A．都需用CO2培养箱B．都须用液体培养基C．都要在无菌条件下进行D．都可表达细胞的全能性3、动物细胞克隆是指A．一个单细胞培养成一个新的细胞群的技术B．一个重组细胞经分裂、分化发育成一个动物个体的技术C．几个同种动物的细胞培养成一个新的细胞群的技术D．一个卵裂球经胚胎分割发育成四个细胞群的技术CA4、某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行动物细胞培养。以下说法正确的选项是()A.在利用两种肝组织块制备肝细胞悬液时，也可用胃蛋白酶处理B.细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是刺激细胞的呼吸C.甲、乙细胞在持续的原代培养过程中，乙会出现停止增殖的现象D.仅用该培养液也能用来培养乙肝病毒C5.以下关于动物细胞培养的表达，正确的选项是()A.培养中的人效应T细胞能产生单克隆抗体B.培养中的人B细胞能够无限地增殖C.人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株D.用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞D世界上第一只克隆绵羊“多莉〞的培育等程序如下图。请仔细看图后答复以下问题：b⑴图中ａ过程为。通过ａ过程形成的重组细胞核遗传物质与质遗传物质各来自哪里？⑵实施ａ时，所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是：。⑶b过程细胞分裂的方式是，此过程是否进行细胞分化？〔答“有〞或“无〞〕⑷图中c所指过程为，图中d指的是克隆绵羊“多莉〞经过在母体子宫内后。⑸“多莉〞面部的毛色和性别与绵羊相同，请根据遗传学原理说明判断依据：。⑹假设不考虑环境因素影响，多莉的性状是否全部像以上绵羊？为什么？〔7〕植物组织培养之后，克隆绵羊培育成功，证明动物。黑面绵羊去核卵细胞白面绵羊卵腺细胞核重组细胞早期胚胎另一头母绵羊子宫克隆绵羊多莉abcd细胞核移植具有调控细胞核发育的细胞质物质有丝分裂有胚胎移植妊娠出生白面“多莉〞绵羊的核基因和性染色体全部来自白面绵羊细胞核也具有全能性卵细胞细胞质的遗传物质也能控制某些性状6、假设不考虑环境因素影响，克隆羊的性状全部像白面绵羊吗？原因是？右图技术具有多种用途，但是不能〔〕A.有选择地繁殖某一性别的家畜B.繁殖家畜中的优良个体C.用于保存物种D.改变动物的核基因在现有技术条件下，还