牛中和抗体制备全流程介绍

牛中和抗体制备全流程介绍

1.什么是中和抗体

中和抗体（NeutralizingAntibody,NAb）是一种特殊的抗体，可与细菌毒素、病原体(如病毒)及其产物特异性结合并发挥中和作用。病原微生物侵入机体时会产生相应的抗体，中和抗体能够与病毒表面的抗原结合，并直接阻止病毒黏附靶细胞受体，防止病毒侵入细胞。也有将能够与特定蛋白质结合，并阻断其功能的抗体称为中和抗体。

2.中和抗体的工作原理中和抗体可以通过影响病原体表面的分子进入体内细胞的方式来阻止病原体感染人体。在包膜病毒（脂质膜内的热敏病毒细胞）中，中和抗体会阻止病毒附着在细胞上以及病毒进入细胞。在无包膜病毒（一种没有脂质膜的耐热病毒细胞）中，中和抗体可以与衣壳蛋白结合，衣壳蛋白是包围病毒细胞内遗传信息的蛋白质外壳。中和抗体还可以使病原体并改变其结构和形状（称为构象变化）以阻止其进入细胞并在细胞内复制。在细菌感染中，中和抗体可以阻止毒素的有害影响。这已被证明发生在白喉药物中，尽管它们不再被推荐用于预防白喉感染。一旦病原体被NAb中和，病原体就会被白细胞降解，脾脏会过滤病原体，然后通过尿液或粪便排出体外。

3.中和抗体的应用中和抗体在医学中的常见用途是被动免疫。在此过程中，对疾病没有免疫力的人从已经对疾病免疫的人那里获得抗体。这种保护不会持续很长时间，但它确实可以立即保护和抵抗感染。在婴儿出生后的头几个月，被动免疫可以通过母乳喂养自然传递。疫苗接种也利用中和抗体，这被称为主动免疫。疫苗旨在通过将病毒或细菌的活性标本或部分病毒或细菌注射到体内来模拟对感染的自然免疫反应。可以触发免疫系统产生中和抗体以响应疫苗中的病毒或细菌，如果人第二次接触病原体，这些抗体将自然识别并抵抗感染。4.中和抗体制备方法目前有多种方法可用于中和抗体制备，包括杂交瘤技术，噬菌体展示技术，抗体人源化等。

5.卡梅德生物可以提供高质量的牛中和抗体制备服务卡梅德生物提供的中和抗体制备服务，只接受病毒样品。以牛中和抗体制备为例，主要实验流程如下：抗原制备，动物免疫，获得牛抗血清，抗体纯化，效价检测，客户交付血清。

5.1抗原信息客户需要提供纯病毒作为免疫源。

5.2牛免疫挑选24个月龄健康牛，通过肌肉注射的方式，按照免疫程序免疫4-5针，5ml/次，按照表1免疫进程表进行免疫。表1牛免疫规划进程表流程时间描述日期阴性血清采集Day0免疫前血清采集10mL2022/08/05一免Day15ml纯病毒VT-101肌肉注射2022/08/05二免Day145ml纯病毒VT-101肌肉注射2022/08/19三免Day285ml纯病毒VT-101肌肉注射2022/09/02三免血清采集Day35采集血清30ml寄送客户2022/09/09四免Day425ml纯病毒VT-101肌肉注射2022/09/16四免血清采集Day49采集检测血清10ml，检测中和效价2022/09/23五免（可选）Day565ml纯病毒VT-101肌肉注射2022/09/30五免血清采集Day63采集检测血清10ml，检测中和效价2022/10/07血清采集Day73满足中和效价1:1024，采集牛血清2.5-3.5L2022/10/175.3获得牛抗血清获得高稳定性抗体血清。

5.4抗体纯化采用多种抗体纯化技术：ProteinA、ProteinG、抗原亲和纯化等方案可供客户选择。

5.5中和效价测定（1）取三免和四免抗体血清，分别用1640培养基将抗体血清稀释8倍，即得测定原液，用1640培养基连续倍比稀释测定原液至2048倍（即稀释至：16倍、32倍、64倍、128倍、256倍、512倍、1024倍、2048倍），包含测定原液共9个待测稀释血清；（2）取100ul不同浓度的稀释血清分别与100ul病毒混合，同时加入800ul细胞培养基，混合后，置37℃水浴作用1h；（3）取血清病毒混合液0.1ml分别加到293T细胞已长成单层的96孔细胞培养板中，每一稀释度接种8孔细胞，同时设8孔正常细胞对照和8孔病毒对照；（4）将96孔细胞培养板置37℃、5%CO2温箱中孵育，每日观察细胞病变情况。（5）无菌处理：将血清12000r/min离心20min，然后用0.45um滤膜过滤，最后超净台内用0.22um无菌滤膜过滤，即得无菌血清。

5.6交付血清可交付大规模达5L牛抗体血清。

中和抗体在抗病毒类药物研发、疫苗生产中发挥着重要作用。尤其自2019年疫情爆发以来，已有多种新冠抗体中和药物