舒乳消痛口服液澄清工艺研究

舒乳消痛口服液澄清工艺研究

舒乳止痛口服由鸡血藤、白芍、丹参、当归、王不留行、土黄酮、三棱、白术和莪术组成。这个处方是汤剂。该处方经过多年的临床应用，对乳痛和乳房增生有迅速有效的治疗作用。为了临床服用方便,减少服用量,根据本方特点,将汤剂改为口服液,并对传统的水提醇沉工艺进行了优选(另文报道),但水醇法生产成本高,安全性差,甲壳素类澄清剂是近年来出现的新型絮凝剂,用于中药制剂的除杂已有报道[1.2],因其资源丰富,成本低,应用方便,越来越受到人们的重视。现将壳聚糖作为澄清剂对舒乳消痛口服液的除杂工艺进行研究,从有效成份入手,选择总固型物、正丁醇浸出物、芍药苷含量为指标进行了全面考查,并与优选过的醇沉工艺进行了比较。1药材、药品与试剂岛津LC-10A高效液相色谱仪(日本);WDL-95色谱工作站(中科院大连化学物理研究所);梅特勒-托利多AB204-N电子天平;药材购自甘肃省医药公司,经鉴定符合中国药典2000年版一部规定;芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号:0736-9811);壳聚糖(甘肃省药品检验所提供);甲醇(色谱纯,天津市化学试剂二厂);正丁醇(分析纯,天津市化学试剂一厂)。2方法和结果2.1药渣和药渣合并按5副处方量称取当归、白术、莪术等6味药提取挥发油,按5副处方量称取其余药材与提取挥发油后药渣合并,加水4000ml浸泡0.5h,煎煮1h,过滤,药渣再加3200ml水,煎煮1h,滤液合并,放置过夜,过滤,药液待用。2.2壳聚糖澄清剂的加入量取相当于药材180g的药液4份,分别浓缩至药材:药液为1∶1,1∶2,1∶3,1∶4,再分别均分为6份,水浴至70℃以上,按表1加入1%壳聚糖醋酸溶液(用1%的醋酸溶液浸泡壳聚糖使成胶体溶液),保温20min,同时搅拌,放置过夜。以醇沉上清液为阳性对照,水煎液为阴性对照。从结果可见,壳聚糖澄清剂在药液中的加入量与药液所含的药材量有关,且随着药液的密度减小,需加入的壳聚糖量有增大的趋势。将判断为“+”的样品过滤,浓缩定容至50ml待测。2.3乙醇浓缩定容液取相当于30g药材的药液1份,浓缩至药材∶药液为1∶1.5时,加入乙醇,使含醇量达到70%,冷藏24h,滤过,回收乙醇,浓缩定容至50ml。2.4蒸发金属的制备精密吸取定容后的药液15ml,置干燥至恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,烘箱105℃恒温1.5h,置干燥器中冷却20min,迅速称重,计算总固型物。2.5正丁醇浸出物的制备精取定容后的药液20ml,用正丁醇(20,20,15,15ml)萃取4次,合并正丁醇液,置干燥至恒重的蒸发皿中,水浴挥干,烘箱105℃恒温1.5h,置干燥器中冷却20min,迅速称重,计算正丁醇浸出物。2.6方法的线性范围与准确度(1)HPLC色谱条件Shim-packCLC?ODS柱;流动相:甲醇?水(45∶55);流速:1ml·min-1;紫外检测波长:230nm;检测灵敏度0.1AUFS;柱温:室温;理论塔板数按芍药苷峰计算不低于3500。(2)线性关系取芍药苷对照品,加甲醇制成320μg·ml-1的对照品溶液,再分别精密吸取0.5,0.75,1,1.5,2ml至10ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度。取10μl进样,记录峰面积,以峰面积Y对芍药苷浓度X作线性回归,得回归方程Y=2590X-10249,r=0.9995,表明浓度在16～64μg·ml-1范围内线性关系良好。(3)回收率取已知含量的样品溶液2ml(n=5),分别精密加入适量对照品,用蒸馏水定容至5ml,按下述(5)测定方法中同法处理,测定,平均回收率为101.2%,RSD1.91%。(4)精密度同一对照品溶液重复测定,计算芍药苷峰面积的RSD,日内RSD为0.25%(n=5),日间RSD为2.46%(n=5)。(5)测定方法取上述定容后的药液5ml,正丁醇萃取4次,合并正丁醇液,水浴挥去溶剂,残渣加甲醇溶解,滤入25ml容量瓶中,定容至刻度,摇匀,再精密量取1ml于5ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,进样10μl。2.7不同浓缩比例的药材中药结果见表2。将表2结果进行统计分析,总固型物、正丁醇浸出物、芍药苷含量与药液的浓缩比例有显著的统计学关系,方程如下:Y1=0.1273lnX+0.8605,r=0.933;Y2=0.007X+0.088,r=0.720;Y3=86.188lnX+501.71,r=0.864。其中X为药液的浓缩比例,为便于计算,取药液∶药材值分别为1,2,3,4;Y1为总固型物,Y2为正丁醇浸出物,Y3为芍药苷含量。从其相关系数看,总固型物的保留量与X的关系最显著、芍药苷含量次之,正丁醇浸出物再次之,但均通过了0.01的信度检验,呈显著的正相关。即随着X的增大(药液密度的降低),三指标成份的保留量增加,反之,减少。在同一药材∶药液下,能使药液澄清的最大壳聚糖加入量与最小量比较,使总固型物平均损失5.50%,正丁醇浸出物平均降低10.29%,芍药苷含量平均减少6.86%。因此,选择药材∶药液为1∶4,壳聚糖加入量占药材总量的0.6%(W/W)时,能使药液澄清,又使有效成份的保留量相对最大,为最佳絮凝工艺。3壳聚糖除杂与安全性的比较从以上的实验结果,确定舒乳消痛口服液的最佳絮凝工艺为将按2.1制备工艺制得的药液浓缩至药材∶药液为1∶4,在70℃以上,按药材重量的0.6%(以壳聚糖计),加入已泡好的1%的壳聚糖醋酸溶液,边加边搅拌,保温20min,放置24h后,进行过滤、浓缩处理。使用壳聚糖澄清剂用于舒乳消痛口服液的除杂工艺,可使水浸提液澄清,去除杂质,保留有效成份;而且具有缩短生产周期,降低成本,安全性高的特点。与醇沉工艺比较,各有效成份的保留比例存在一定的差别,总固型物量高于醇沉,正丁醇浸出物又较之略低,而水溶性相对较大的芍药苷含量指标差别不大。文献报道壳聚糖除杂较醇沉能明显提高多糖和有机酸的含量,但对水溶性较小的成份有所影响。因此,对舒乳消痛口服液使用壳聚糖澄清剂能提高有效成份的总保留量,但对一些水溶性较小的皂苷成份可能损失较醇沉略大。哪种更有利于临床治疗效果的提高,尚有待于更进一步的试验说明。舒乳消痛口服液水浸提液的pH为4.4,适