PCR技术在医学检验中应用

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PCR技术在医学检验中应用检验科主要内容：1.PCR的定义；2.PCR的基本原理；3.一、PCR的定义：

PCR（polymerasechainreaction)：聚合酶链式反应，又称体外DNA扩增技术。是近年来发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的新技术。

PCR技术：1985年由美国的KaryMullis首创，可以将微量目的DNA片段扩增一百万倍以上。

优点：敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等，广泛应用于微生物学、考古学、法医学及体育等领域，并已普及到许多普通实验室，大大简化了传统的分子克隆技术，从而比较容易地对目的基因进行分析、鉴定。二、PCR的原理：

用于扩增位于两段已知序列之间的DNA片段，类似于天然DNA的复制过程。

以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5′末端和3′末端互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。

扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异性结合，一个典型的PCR反应包括，“变性-退火-延伸”的多个循环,其一般反应过程为：

1.变性(Denaturation)：

将体系加热至(95℃，30″)使模板DNA互补双链间的氢键断而解离成为两条单链DNA，以便他与引物结合，为下轮反应做准备。

2.退火(复性)(Annealling):

将体系温度突然将温度降至（55℃左右）后寡核苷酸引物与模板DNA单链上的互补序列杂交（按碱基互补配对原则结合）。同时，体系中的部分DNA聚合酶被激活，一旦引物与模板杂交，DNA聚合

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