人类外周血淋巴细胞的培养及染色体标本制备_第1页
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文档简介

细胞与遗传学教研室人类染色体标本的制作一、实验目的1.掌握人类染色体标本的制作方法2.了解人类染色体形态结构特征二、实验原理外周血中的淋巴细胞几乎都是处在G0期或G1期，一般情况下是不分裂的。当在培养基中加入植物凝集素（PHA）时，小淋巴细胞受到刺激后转化为淋巴母细胞，并开始进行有丝分裂。经过短期培养后，用秋水仙素处理、低渗、固定、滴片和染色，就可获得大量中期分裂相的细胞，制片后可以清楚地对染色体进行观察.这种培养方法是Moorhead于1960年建立的。PHA37℃68h秋水仙素至72h外周血淋巴细胞G0期或G1期三、实验用品1.材料：人体外周血2.器材：培养箱、培养瓶、离心机、刻度离心管、吸管、恒温水浴锅等3.试剂：培养基、秋水仙素（12.5μg∕ml）、植物凝集素（PHA）、肝素、0.075Mkcl低渗液、甲醇、冰乙酸、PH6.8磷酸缓冲液、Giemsa原液。四、实验方法1.外周血细胞培养（1）采血：无菌，肝素抗凝。用无菌注射器抽取肝素0.2ml,润湿针筒,推出多余肝素.消毒后,抽取受试者静脉血2ml。）（2）接种培养：每培养瓶加入0.3～0.5ml（10滴）,

接种于装有5ml培养基的培养瓶中，摇匀，

37℃培养箱中培养68小时。

（20滴）

（3）秋水仙素处理：0.05～0.4μg∕ml培养基，轻摇混匀后，继续培养至72小时。

实验方法2.染色体的制备（1）收获细胞：用吸管吸取培养物，移至离心管中，以1500转/分离心10分钟，弃去上清液，留下沉淀物约0.3ml。

（2）低渗处理：加入预温37℃的低渗液至8ml，用吸管轻吹打混匀，置于37℃恒温水浴锅中低渗20分钟。低渗后吹打要轻,以防细胞破裂.（3）预固定：缓缓加入1ml新配制的固定液（甲醇：冰乙酸=3:1），立即用吸管轻吹打混匀。以1500转/分离心10分钟，弃上清液，留约0.3ml沉淀物。

（4）固定：加入新鲜固定液至8ml，吸管吹打混匀，室温固定

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