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文档简介
1免疫学诊断、沉淀反应2实验室安全-门窗、水、电、火源实验结束后关闭门窗、水、电、火源酒精灯和易燃物的使用注意事项;棉塞着火须报告老师电源-空气开关水的使用实验室安全-生物安全白大褂的穿着要求不得将实验无关物品带入实验室不得在实验室内饮食不得擅自开UV灯污染及潜在污染物品须进行消毒处理实验室规则-要点3实验课要求遵守上述规则必备物品:实验指导、实验报告、红蓝铅笔、白大褂注意保护自己、爱惜实验室仪器和设施按照实验要求,认真完成实验并如实记录实验报告实验结束后整理本组的台面实验废弃物分类(污染/潜在污染物、普通废弃物)放置;在确认普通废弃物没有着火隐患后,倒入垃圾桶实验室规则-要点4值日生的职责:检查实验台面的整理整理实验室及垃圾关闭所有非必需的电器和电源逐一检查并确认水槽水龙头的关闭关闭窗、门最后离开实验室实验室规则-要点5单向免疫扩散(讲解)双向免疫扩散试验(操作)3.对流免疫电泳(看示教结果)本次实验内容6在半固体琼脂中进行:★单向免疫扩散★双向免疫扩散★对流免疫电泳沉淀反应(原理):
可溶性抗原(血清蛋白质、细胞裂解液、组织浸液、微生物蛋白等)与相应的可溶性抗体,在一定的抗原抗体比例下,在一定离子浓度的缓冲体系中,发生反应,出现沉淀物,称沉淀反应。在液体中进行:★免疫比浊法:浊度仪(分光光度仪/酶标仪)73.可见性:
--取决于抗原-抗体的浓度和比例;(1)足够的浓度:(2)适宜的比例:
最大的抗原-抗体复合物的出现(白色沉淀)2.可逆性:非共价键;温度、酸碱度、离子强度;(见后)1.特异性:抗原表位---抗体可变区,特异性越强---亲和力越强抗原抗体反应的特点4.抗原抗体反应的二个阶段:
i:特异性结合阶段:快ii:可见反应阶段:数分钟---数日8(三)影响抗原抗体反应的因素1.温度:
a:分子热运动,温度越高,反应越快;
b:非共价键;蛋白质变性
c:一般最适温度为37℃d:4℃,过夜2.电解质:a:蛋白质,两性分子
b:离子强度,盐析
c:常用0.85%生理盐水
3.pH:a:一般最适pH6-8
b:假阳性:等电点时,电荷为零,沉淀/凝积9(1)单向免疫扩散
定量分析方法:
(1)琼脂42-50℃溶化,加入已知浓度的抗体,混匀,倒板,冷却,凝固,打孔
(2)孔中加待测抗原,(3)37℃,扩散;
比例合适时,出现白色沉淀环,(4)测定沉淀环直径。(5)根据标准曲线(方程),计数待测抗原的浓度。已知浓度的抗体琼脂中含有制作标准曲线:已知的不同浓度的抗原y=k.x+b赵x钱x孙x李x周x郑x*制作标准曲线:5μM10μM2
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