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文档简介

第一讲鸡胚成纤维单层细胞的制备与培养

——预防兽医微生物组实验目的

1.掌握无菌操作技术

2.掌握细胞培养所需的仪器、设备3.了解细胞培养的相关理论

4.掌握鸡胚成纤维细胞的原代培养技术

实验背景

原代细胞培养因具有细胞刚刚离体，生物性状尚未发生很大变化，具备二倍体的遗传性、来源方便等优点而广泛应用于病毒学、细胞分化、药物测试等试验。在禽类原代细胞培养中，鸡胚成纤维细胞(chickenembryofibroblast，CEF)得到普遍应用。CEF的培养是在一定的条件下，在体外模拟体内生理环境，使从体内取出的成纤维组织细胞生存、生长和传代，并维持原有组织细胞的结构和功能特性。与其他细胞相比，CEF相对容易获得，而且增殖能力强，适应性强，具有良好的耐受性，性状比较稳定，不易发生转化，所以被广泛地应用于分子和细胞生物学研究，以及疫苗的生产。实验材料预加10%FCS和双抗的1640培养液；消化液(0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA溶液)；D-Hanks平衡盐溶液；灭菌培养皿、青瓶、细胞培养瓶各1个；巴氏吸管若干支、纱布若干；眼科镊1把，剪刀1把；碘酒，75％酒精棉球；酒精灯1台；废液缸。实验设备（1）37℃-CO2培养箱（2）倒置显微镜（3）超净台实验步骤1.取胚

选择9-11日龄鸡胚于蛋架上，先后用碘酒和75%酒精消毒气室部外壳。用无菌眼科镊子击破该部位的蛋壳和卵膜，撕破尿囊膜和羊膜，并轻轻夹住鸡胚颈部取出鸡胚，放入无菌平皿中。

1气室2卵壳3卵黄囊4卵白5尿囊腔6绒毛尿囊7胚胎8羊水腔9胚胎外腔2.剪碎

用灭菌剪刀剪去鸡胚头部、腿部、翅膀和内脏，留下躯干组织。用D-Hanks液冲洗，除去血液后移入灭菌青瓶中，用灭菌剪刀尽量剪碎（1mm3小块），再用D-Hanks冲洗2次直至组织发白为止，然后将洗液上清吸弃。

3.酶消化

根据鸡胚组织块的多少，加入大约4倍量的胰酶(5-6mL)，于37℃温箱内消化15-20min，视其组织

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