几种杀菌剂对隐地疫霉不同发育阶段繁殖体的抑制作用

几种杀菌剂对隐地疫霉不同发育阶段繁殖体的抑制作用

非洲菊花，也被称为福班花，是科当植物的一种多年生草本植物。它是世界上最重要的花之一，也是一种重要的盆栽花卉。上海市非洲菊的栽培面积超过400hm2,组培苗年生产量近千万株,是上海地区四大主产花卉之一,具有很高的经济价值。随着非洲菊种植面积的扩大,病害问题也日趋严重,由隐地疫霉(Phytophthoracryptogea)引起的非洲菊根腐病已成为非洲菊栽培中主要病害之一。隐地疫霉以卵孢子、厚垣孢子在土壤中越冬,作为田间发病的主要初侵染源,在病害发展中都起着重要的作用。田间条件下,游动孢子、孢子囊以及菌丝体等不同菌体形式在病害的传播和再侵染过程中都起着重要的作用。谢为龙等研究了新万生、杀毒矾、代森锰锌、百菌清对隐地疫霉菌菌丝生长的抑制作用,但对非洲菊根腐病的隐地疫霉的毒力研究尚不深入,尤其对该病菌不同发育阶段毒力研究尚未见报道。本试验选用7种生产中常用的杀菌剂,系统研究不同杀菌剂对隐地疫霉不同发育阶段的毒力差异,为筛选针对非洲菊根腐病的高效杀菌剂奠定基础。1材料和方法1.1试验材料1.1.1试验中的蘑菇隐地疫霉菌株ND014,分离自上海市非洲菊组培苗生产苗圃。1.1.2试剂与药剂50%烯酰吗啉可湿性粉剂(Dimethomorph,安克),德国巴斯夫股份有限公司生产;52.5%恶唑菌酮·霜脲氰可分散粒剂(Famoxadone&Cymoxanil,抑快净)生产,美国杜邦公司生产;68%精甲霜灵·代森锰锌水分散粒剂(Mefenoxam&Mancozeb,金雷),瑞士先正达作物保护有限公司生产;70%代森锰锌可湿性粉剂(Mancozeb),四川国光农化有限公司生产;64%恶霜灵·代森锰锌可湿性粉剂(Oxadixyl&Mancozeb,杀毒矾)生产,瑞士先正达作物保护有限公司生产;75%百菌清可湿性粉剂(Chlorthalonil),上海升联化工有限公司生产;72.2%霜霉威盐酸盐水剂(Propamocarbhydrochloride,普力克),德国拜耳作物科学公司生产。1.1.3培养基溶液的制备参照郑小波的方法制备胡萝卜培养基(CA)及10%V8培养液。1.1.4芽孢杆菌从菌片制备栽培将隐地疫霉菌种接种在CA培养基上,25℃暗培养3d后,用打孔器沿菌落边缘打取菌龄一致的菌片(直径5mm),菌块面朝上置于培养皿中,每皿4块,加入10%V8培养液至刚好淹没菌片,3d后倒掉培养液加入无菌水,每12h换水1次,48h后即可产生大量孢子囊。将其置于4℃冰箱中处理30min后移至室温放置,15～30min后游动孢子释放。双层纱布过滤即可得到游动孢子悬浮液,用微量进样器法测定游动孢子浓度。1.2测试方法1.2.1抑菌活性测定将隐地疫霉菌种在CA培养基上25℃暗培养3d后,用打孔器沿菌落边缘打取菌龄一致的菌片(直径5mm),转接到含系列梯度浓度杀菌剂的CA平板培养基中央,以不含药剂的CA培养基作为对照,重复3次。25℃暗培养3d后用十字交叉法测量菌落直径,作出不同药剂的抑菌回归方程,求出EC50和EC95,试验重复2次。菌丝生长抑制率的计算公式如下:生长抑制率(%)=[(对照菌落直径-菌饼直径)-(处理菌落直径-菌饼直径)]/(对照菌落直径-菌饼直径)×1001.2.2不同药剂对药物抑制率的测定将隐地疫霉菌种在CA培养基上25℃暗培养3d后,用打孔器沿菌落边缘打取菌龄一致的菌片(直径5mm),置于培养皿中央,每皿4块,加入10%V8培养液覆盖菌片,3d后倒掉培养液,加入含梯度浓度杀菌剂的无菌水,以不含杀菌剂的无菌水为对照,置于25℃培养箱中暗培养48h,然后在10×10倍显微镜下检查孢子囊的数量,每菌饼随机检查1个视野,重复4次。与对照比较,计算各药剂对孢子囊形成的抑制率,分析比较不同杀菌剂对供试病菌孢子囊形成的影响。试验重复2次。1.2.3对是否适宜休止孢萌发的影响参考尹敬芳等的方法,分别吸取50μl隐地疫霉游动孢子悬浮液(1.5×105个/ml)和60μl梯度浓度杀菌剂于洁净的凹玻片上,以等量无菌水为对照,混匀后室温下放置2～4h,待对照休止孢萌发率超过60%时,在10×10倍显微镜下检测游动孢子休止孢的萌发数,重复4次,每重复随机检测100个休止孢。与对照比较计算各药剂不同浓度对休止孢萌发的抑制率,分析比较不同杀菌剂对供试病菌游动孢子休止孢萌发的影响。试验重复2次。1.3处理数据试验数据采用SAS数据处理系统进行分析处理。2结果与分析2.1金雷、金雷对花粉杆菌生长的影响平板测定了7种供试药剂对隐地疫霉菌丝生长的影响,由表1可以看出,7种药剂都具有不同程度的抑制作用。其中效果最好的是安克,EC50值为0.58μg/ml,EC95值为5.81μg/ml;其次,金雷也效果显著,EC50值为1.46μg/ml,EC95值为10.87μg/ml;另外,杀毒矾、代森锰锌、百菌清对菌丝生长也有一定的抑制作用,EC50值分别为:10.95、17.16、21.53μg/ml;EC50值显示普力克和抑快净在防治时需要的药剂量很大。2.2普内部和下味剂ec50如表2所示,供试杀菌剂对隐地疫霉孢子囊的形成都有不同程度的抑制作用,其中以抑快净和金雷的抑制作用最强,EC50值分别为0.48、0.82μg/ml;其次是普力克和杀毒矾,EC50值分别为1.00、3.61μg/ml;而其他3种药剂均不如这4种药剂的抑菌效果好。就EC95值来看,普力克的EC95值最低,为4.71μg/ml,表明它在极低的浓度下就可以完全抑制隐地疫霉孢子囊的形成,其次是抑快净和金雷。2.3克氏原螯虾生长和抑制作用7种杀菌剂对隐地疫霉游动孢子休止孢萌发抑制作用测试结果如表3所示,普力克和安克对游动孢子休止孢的萌发具有极显著的抑制作用,它们的EC50值分别为0.82、0.89μg/ml;其次是金雷、抑快净和杀毒矾,它们的EC50值分别为1.09、1.60、4.79μg/ml;而其他2种杀菌剂对游动孢子休止孢萌发的抑制作用不明显。3种常用溶剂对子芽孢芽孢杆菌生长和萌发的影响由隐地疫霉引起的非洲菊根腐病是一种典型的土传病害,以病菌直接侵入寄主为主要侵染方式。在疫霉菌不同发育阶段中的繁殖体形成效率对侵染水平有明显影响,因此提高对病菌不同繁殖体抑制效率,进而提高对病害防治效率具有重要意义。室内药剂筛选结果表明,对隐地疫霉菌丝生长抑制效果最好的药剂是安克,其次是金雷,它们的EC50值分别为0.58、1.46μg/ml;对孢子囊形成抑制效果最好的药剂是抑快净,其次是金雷和普力克,它们的EC50值分别为0.48、0.82、1.00μg/ml;而对孢子萌发抑制效果最好的药剂是普力克,其次是安克、金雷和抑快净,它们的EC50值分别为0.82、0.89、1.09、1.60μg/ml。说明不同发育阶段繁殖体对同一种杀菌剂敏感程度不同。因此筛选针对每一发育阶段繁殖体的