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文档简介
重组人胰岛素类似物的研究应用进展ContentsContnts21胰岛素的发展2人胰岛素的制备3重组人胰岛素类似物的研究4甘精胰岛素及其应用5z展望HotTip1胰岛素的发展
921年Banting等首先从家畜胰脏中提取得到一种较纯的降血糖物质,命名为胰岛素(insulin),1922年用于临床,1926年Abel制得结晶。我国1941年由上海杨氏化学治疗研究所首先研制并投产。以猪胰为原料,刨碎后,经酸醇提取、碱化、酸化除去蛋白质、减压浓缩、去脂质、盐析等得到粗品,再除去杂蛋白、结晶、洗涤、干燥而成,为白色或类白色结晶粉末HotTip982年EliLilly公司应用重组DNA技术生产重组人胰岛素称为Humulin;1991年NovoNordisk生产重组人胰岛素称为Novolin;1997年HoechstAG公司生产的重组人胰岛素称为Insuman;1996年EliLilly公司生产胰岛素类似物名为Humalog;1997年EliLilly公司生产胰岛素类似物名为Liprolog;1999年NovoNordisk生产了重组人胰岛素类似物名为NovoRapid;2000年Aventis公司生产的重组人胰岛素类似物为长效胰岛素名为Lantus,即甘精胰岛素,其与人胰岛素不同之处是Asp21被甘氨酸(Gly)取代,在B键C端增加了2个精氨酸Arg)残基。21世纪以来重组人胰岛素类似物更有较大发展。2人胰岛素的制备1酶促修饰法YourTextHereYourTextHereYourTextHereYourTextHereDescriptionofthecontentsClicktoaddText无色杆菌()蛋白酶ClicktoaddTextClicktoaddTextClicktoaddText2重组DNA技术微生物合成法AB链合成法反转录酶法重组DNAContentsHotTip
AB链合成法分别用化学方法合成人胰岛素A链和B链基因,分别插入克隆载体质粒所携带的β-半乳糖苷酶基因中,再将重组质粒导入大肠杆菌,发酵产生的细胞总蛋白质中,约有0%是β-gla-A和β-gla-B融合蛋白。收集后破碎、离心得粗包涵体。再溶解包涵体,溴化氰化学切割,磺基化处理,空气中氧化生成活性胰岛素,最后纯化,即得。HotTip反转录酶法从猪胰脏细胞中,提取mRNA混混合物,此混合物中含有丰富的胰岛素原mRNA,逆转录、复制生成双链dcDNA。用限制酶PstI进行片段处理与用PstI同样处理的PBR322质粒DNA连接,并转化到大肠杆菌细胞中,发酵,产物纯化,胰蛋白酶部分水解,再用胰蛋白酶和羧肽酶B进一步水解。水解产物纯化即得较高纯度
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