马铃薯脱毒试管薯苗的快速繁殖及移栽实验报告

.z......资料...本科学生综合性实验报告**114120***￥*学院生命科学学院专业、班级11应用生物教育？班实验课程名称植物组织培养实验教师及职称龙维彪〔讲师〕开课学期2013至2014学年下学期填报时间2014年6月10日师大学教务处编印一．实验设计方案实验序号二实验名称马铃薯脱毒试管薯苗的快速繁殖与移栽实验时间2014.4.14——实验室睿智楼3幢325实验容：2-1马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制2-2马铃薯脱毒试管苗的快速繁殖2-3马铃薯试管薯苗的移栽1．实验目的：1)、通过本次实验，使学生掌握配制培养基的步骤，能熟练准确配制培养基，并能根据实验目的设计适合的培养基配方；2〕、通过本次实验，掌握马铃薯脱毒试管苗快速繁殖的根本技术；了解马铃薯脱毒种薯生产的过程，为马铃薯脱毒种薯的生产提供必要的根底苗；3〕、通过本次实验，掌握马铃薯试管薯诱导的方法和技术。2．实验原理、实验流程或装置示意图实验原理1〕、将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再参加琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符合要求的培养基。2〕、利用适宜的培养基，诱导带有腋芽的马铃薯单节茎段进展芽生长和根再生形成单苗，从而到达快速繁殖的目的。3〕、在培养马铃薯脱毒试管苗的培养容器中〔试管苗培养4-6周〕，参加液体的马铃薯试管薯诱导培养基，置于全黑暗条件下即可诱导马铃薯试管苗结薯[1]。实验流程Ⅰ、马铃薯脱毒种薯的生产程序①脱毒苗的培育；a.植物材料的选取；b.材料的处理；c.茎尖剥离；d.培养；e.病毒检测；f.无病毒苗的扩繁。②原原种的生产；③原种生产；④一级种薯生产；⑤二级种薯生产。Ⅱ、马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制流程〔1〕、药品及用具的准备；〔2〕、培养基配制〔3〕、调节培养基的酸碱性至pH6.2；〔4〕、培养基的分装；〔5〕培养基的灭菌。Ⅲ、马铃薯脱毒试管苗的快速繁殖〔1〕准备工作；〔2〕无菌操作Ⅳ、马铃薯试管薯苗的移栽3．实验设备及材料1〕实验用具和仪器冰箱、普通天平、果酱瓶、移液管、量筒、烧杯、玻璃棒、医用口杯、精细pH试纸〔pH5.4~7.0〕、药勺、称量纸、酒精棉球、小块纱布、已灭菌滤纸、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、封口膜、橡皮筋/棉线、电炉/电磁炉、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台等。2〕药品和试剂：MS培养基母液、琼脂、蔗糖、蒸馏水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH、马铃薯快速繁殖培养基、75%消毒酒精、95％酒精。3)材料：马铃薯脱毒试管苗、培养4-6周的马铃薯脱毒试管苗。4．实验方法步骤及考前须知实验步骤：Ⅰ、马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配方设计及配制体积培养基配方设计：〔1〕根据培养的目的选择一种培养基为根本培养基。〔2〕确定培养基中各种激素的浓度及相比照例。配方：MS根本培养基＋0.7％琼脂＋3％蔗糖[2]配制体积：每小组配制0.5L，用果酱瓶分装成10瓶，每人2瓶。马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制流程〔1〕药品及用具的准备；〔2〕培养基配制；〔3〕调节培养基的酸碱性至pH6.2；〔4〕培养基的分装；〔5〕培养基的灭菌。Ⅱ、马铃薯脱毒试管苗的快速繁殖〔1〕准备工作①接种室的清洁和消毒；②超净工作台的开机和消毒；③剪刀、镊子、已灭菌培养皿、酒精棉球、酒精灯、待用培养基等的准备；④实验材料的准备。〔2〕无菌操作①实验操作前，操作人员洗手及手和小臂消毒；②使用的镊子、剪刀等用95％酒精浸泡，之后放在酒精灯上灼烧灭菌，再放在灭菌后的培养皿中冷却后使用；③培养瓶外壁的消毒；④将马铃薯试管苗剪为单节茎段后接种到培养基中，在植入材料的前后，培养瓶的瓶口须在酒精灯火焰上烧烤灭菌[3]；⑤封口、标记、将培养瓶置于培养架上，在温度20-25℃，光照强度2000-3000l*[4]Ⅲ、马铃薯试管薯苗的移栽〔1〕、把培养4-6周的马铃薯脱毒试管苗从果酱瓶中取出后用清水清洗干净培养基[5]，以防止移栽后培养基为细菌、真菌等提供良好的生活环境，抑制马铃薯脱毒苗的生长。〔2〕、翻地移栽，浇好水后盖上遮阴网，注意浇水管理。考前须知〔1〕、在进展实验前要进展认真的消毒，在实验过程中注意无菌操作的要点。〔2〕、扦插的无菌马铃薯苗要适当的深度，不要过深也不要过浅。〔3〕、在单节茎段繁殖过程采用的是光照培养，在微型薯的诱导是在黑暗条件下培养的。〔4〕、接种时注意倾斜瓶口，以免带入病菌，引起污染。〔5〕、单节茎插在培养基中应保证固定，接种时切勿倒插马铃薯的单节茎[6]，假设不小心倒插，单节茎短期虽不会死亡，但因违背了植物的生理性极性，因此不会生根。〔6〕、每瓶单节茎的数目与控制一定的数目约10-20个不要过多或过少。〔7〕、在马铃薯脱毒试管苗的快速繁殖，在选取枝条时必须注意每个枝条要留一个芽，这样才能正常进展生长；〔8〕、从果酱瓶上去下的封口膜要正确的放置，封口时也要靠近酒精灯，不要离开无菌操作台，放置被污染；5．实验数据处理方法：采用记录原数据以及课本资料提供数据进展配制及使用。6．参考文献：[1].浚明，朱登云.植物组织培养〔第3版〕.中国农业大学.2005,2.[2].静三，桂耀林.植物细胞工程实验技术.：科学，1995.[3].王连清主编.植物组织培养.：中国农业，2002.[4].瑞炽主编.植物组织培养〔第三版〕.：高等教育，2003.[5].郭勇，堂兵，秀帧编著.植物细胞培养与应用.：科学，2004.[6].孜义，国编.实用植物组织培养技术教程.：科学技术，2001.二．实验报告1、实验现象与结果〔1〕、马铃薯脱毒试管薯苗的快速繁殖1〕、实验现象马铃薯试管薯单节繁殖诱导共得到马铃薯微型薯2瓶，两瓶均无污染。两瓶中的试管薯苗长势不错，但马铃薯苗的叶子有局部发黄。经过培养之后，每瓶中各有9棵马铃薯苗，其中第一瓶中有8个马铃薯苗，第二瓶中有马铃薯苗8个。马铃薯苗根分生多，白色，粗短，且有结节状膨大。苗茎瘦弱，分支情况差。生长平均株高有6厘米左右，茎节较长有0.8至1.2厘米左右，叶片相对较小。有一两株苗叶子边缘有枯槁现象。2〕、实验结果马铃薯试管苗培养情况〔已培养5周〕：实验结果记录表总接种瓶数2瓶总接种茎段数每瓶中各有9棵马铃薯苗污染瓶数0瓶未污染瓶数2瓶生长情况根分生多，白色，粗短，且有结节状膨大。局部苗茎瘦弱，分支情况差，有叶片枯黄。马铃薯脱毒试管薯苗的快速繁殖〔条件培养基培养5周〕共得到马铃薯微型薯2瓶，两瓶均无污染。马铃薯脱毒试管薯苗根分生多，白色，粗短，且有结节状膨大。苗茎瘦弱，分支情况差，有叶片枯黄。〔2〕、马铃薯脱毒试管薯苗的移栽1〕、实验现象马铃薯脱毒试管薯苗的快速繁殖5周后移栽。生长一个多星期后，马铃薯脱毒苗大局部长势较好，有新的芽和叶子长出，生长旺盛，呈现出生机盎然的气息。有1株马铃薯脱毒苗在地里被虫咬过，只剩下马铃薯杆，叶子没了。有几株被雨点淋过以后，显现出婆娑的姿态。2〕、实验结果马铃薯脱毒试管薯苗快速繁殖得到的2瓶共18株马铃薯苗种下后，长势较好，有新的芽和叶子长出，少局部被虫要过，有的被雨点淋过以后由于植株不是十分强健，呈现出倒伏的样子。具体情况如下列图：2、对实验现象、实验结果的分析及其结论〔1〕、马铃薯脱毒试管薯苗的快速繁殖1〕、实验中共进展两瓶马铃薯快繁，长势均良好，说明实验的操作过程没有出现污染问题，培养基的营养素搭配得当；两瓶快繁苗中培养基量均明显减少，原因为其中的水分和营养物质被植株所消耗。2〕、马铃薯苗有的叶子发黄，可能是长时间的培养后，培养基中的营养成分缺乏，也会造成微型薯营养不良。3〕、光照对苗的快繁影响较大。中期观察发现，苗未直立生长，且整体向一个方向倾斜，有较明显的向光生长趋势。后期对培养瓶移位，改变捕光方向和位置后，有明显改善。这是由于培养架各处光照不均匀，以至偏向角落的苗向光生长。4〕、马铃薯试管苗快繁过程中发现，有的苗始终不长高，且不生根。这是由于扦插时，违背了其形态学特性，故不生根。〔2〕、马铃薯脱毒试管薯苗的移栽1〕移栽前清洗干净培养基，马铃薯苗没有受到菌类的滋生。总体来看，长势较好，并有新的芽和叶长出。2〕、移栽过程中浇透定根水，使马铃薯苗能够强健的生长，全部成活了，只是有几株苗长势较为弱小，可能是营养缺乏导致的。3〕、移栽后初期罩上遮阴网，防止太阳直晒。同时，也有效的适当控制温度，使植株有一个较好的生长环境。4〕、有1株马铃薯苗被虫咬过，只剩下马铃薯杆了，这是由于在移栽后的管理过程中没有对马铃薯喷洒农药防止病虫害导致的。5〕、由于移栽后不久下过一场雨，并且刚移栽的马铃薯苗还不十分强健，经不起雨淋，局部马铃薯苗呈现出倒伏的现状。3、实验讨论〔1〕、马铃薯脱毒试管薯苗的快速繁殖首先，按照要求运用增殖培养基将马铃薯茎节培养扩繁，在此过程中采用的是扦插法将马铃薯茎段进展扦插，虽然在最终得到了结果，但是效果不是十分理想，长势不是很好，总结原因如下：

①茎段扦插多采用斜插如培养基，长出的培养苗不是十分强健，可能是由于茎段与培养基的接触面积小，对营养的需求相对较少，所以茎节长的不是十分强健。

②一些茎段扦插的太深，有一苗直接是下节腋芽直接进入培养基当中，导致长势不是太好。

③果酱瓶的空间很大，仅仅只有9苗植株生长空间有些浪费，可以再接着扦插入几苗，充分利用空间。

通过实验总结，得到以下个人实验改良总结：

①茎段扦插应垂直插入，以使茎段的对培养基的吸收到达最大。

②扦插的深度不宜过深，尽量不要将带有腋芽局部插入培养基当中。③果酱瓶的空间应充分利用起来，适量扦插茎段。

〔2〕、马铃薯脱毒试管薯苗的移栽1〕、移栽苗成活的必要条件是空气湿度高，土壤通气好，太阳勿直照，温度要适宜。2〕、要是植株容易成活，移栽前要清洗干净培养基，防止菌类滋生。并且基质消毒并浇透定根水。3〕、移栽后初期要通过喷雾或罩上透明塑料。在塑料罩上打孔、剪掉小植株的局部叶片，减少植株蒸腾作用。还要逐渐降低空气相对湿度，保证植株正常生长。4〕、移栽小植株还应注意光、温控制。4、实验总结1〕、整个实验成败的关键是无菌操作，由于之前做了很屡次，所以本次实验没有一点污染。

还有就是实验中一定要注意各个细节操作，组培实验是一个相当精细的活，每一步都需要认真仔细地做。2〕、植物组织培养实验一般历时较长，要将实验过程中的每一局部的操作容记录下来，假设出现问题方便排查问题所在。3〕、在本次实验中了解并能够掌握马铃薯试管薯的诱导实验的一般流程。掌握了马铃薯脱毒试管苗的快速繁殖根本技术，对以后的生产生活有相当大的帮助。