胃癌组织中vegf、cd34、vegf-c和vegfr-3的表达及意义

胃癌组织中vegf、cd34、vegf-c和vegfr-3的表达及意义

肿瘤微血管密度和淋巴管内皮生长因子近年来的研究表明，肿瘤血管和淋巴管的形成与肿瘤的发生发展、袭击和预后密切相关。血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)即VEGF-A被认为是刺激血管内皮细胞增殖最重要的因子之一;肿瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD)检测是胃癌新生血管生成的评价方法,其中CD34抗体用于标记肿瘤血管内皮细胞在微血管中的表达。淋巴管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactorC,VEGF-C)是近期发现的血管内皮生长因子家族的新成员,它通过激活淋巴管内皮细胞膜上VEGFR-3来促进肿瘤淋巴管的增生及肿瘤的淋巴道转移。本研究采用免疫组化PV-9000法检测胃癌组织中CD34、VEGF、VEGF-C、VEGFR-3表达情况,并探讨其与临床病理因素的关系及意义。1材料和方法1.1手术切除肺癌患者年龄分布回顾性分析潍坊医学院附属医院2004年3月至2006年3月间,手术切除并经病理证实的胃癌患者81例,其中男性58例,女性23例,年龄38-77岁,平均年龄60.5岁。另选15例正常胃黏膜组织作为对照。1.2免疫组化检测标本经福尔马林固定、石蜡包埋、4μm连续切片。采用免疫组化PV-9000法,VEGF单克隆抗体(鼠抗人)、CD34单克隆抗体(鼠抗人)、VEGF-C多克隆抗体(兔抗人)、VEGFR-3多克隆抗体(兔抗人)、PV-9000免疫组化检测试剂盒、DAB试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。用已知阳性切片同时在同一条件下染色作为阳性对照,用PBS(PH=7.4)代替一抗作为阴性对照,染色步骤严格按照试剂说明书进行。1.3血管数目的计数肿瘤MVD计数参照Weidner报道的方法进行,结果用3个高倍视野下的血管数目的平均数来表示。VEGF、VEGF-C、VEGFR-3在肿瘤细胞胞浆或(和)胞膜中出现棕黄色颗粒,凡阳性细胞数≥30%者为阳性组,<30%及无着色者为阴性组。1.4统计学方法依据不同的统计学资料、不同的目的采取相应的统计方法:计量资料采用t检验,计数资料采用x2检验,显著标准α为0.05(双侧)。以上统计学分析均使用统计软件SPSS11.5完成。2结果2.1mvd值的表达CD34阳性内皮细胞形成条状及隙状等孤立或簇状结构,呈棕黄染色。VEGF、VEGF-C、VEGFR-3阳性呈棕黄色颗粒状或团状,位于胞浆内。81例胃癌组织中,MVD值为42.95±14.79个/视野,VEGF、VEGF-C、VEGFR-3阳性表达率分别为74.1%(60/81)、64.2%(52/81)、67.9%(55/81)。正常胃黏膜中MVD值为11.23±2.12,VEGF、VEGF-C、VEGFR-3阳性表达率分别为13.3%(2/15)、26.7%(4/15)、26.7%(4/15)。CD34、VEGF、VEGF-C、VEGFR-3在胃癌组织中的阳性表达率明显高于正常胃黏膜(P<0.05)(表1)。2.2d33、vegf-c、fr-3的表达与肿瘤的沉积VEGF的表达与肿瘤的TNM分期、浸润深度、淋巴结转移有关,CD34的表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移有关,VEGF-C的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关,VEGFR-3的表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移有关,见表2。3血管内皮因子胃癌是常见的危害人类健康的恶性肿瘤之一,其浸润和转移是影响预后的主要因素,胃癌的侵袭转移是多步骤、多阶段、多基因的复杂过程,主要步骤包括瘤细胞与原发肿瘤分离并释放到血管或淋巴管;瘤细胞在血循环存活并在靶器官微循环中形成瘤栓;瘤细胞在靶器官内大量繁殖形成转移瘤。目前认为,在肿瘤侵袭转移过程中最关键的是肿瘤微血管和淋巴管的生成,相关研究正成为肿瘤研究的一个热点。血管生成决定于实体瘤生长和转移,其中VEGF发挥着重要作用。当静止的内皮细胞暴露于肿瘤细胞分泌的VEGF时,内皮细胞就会表达某种蛋白酶,降解细胞外基质,发生转移、增殖,并形成新生血管。本研究结果显示胃癌浸润程度愈深,VEGF阳性表达率愈高,表明VEGF表达与胃癌的浸润有关。TNM分期愈高,VEGF阳性表达愈高,与吴泰璜、YamaguchK等报道相一致。淋巴转移的发生也有赖于原发肿瘤新生血管的形成,随着新生血管的生成,肿瘤生长迅速,呈浸润性生长,肿瘤前沿的瘤细胞可侵及肿瘤发生部位组织间质中残留的淋巴管,从而引起癌细胞的淋巴转移。在本实验中淋巴结转移组VEGF阳性表达率显著高于无淋巴结转移组(P<0.01),说明VEGF在促进胃癌血管生成的同时,也促进了胃癌沿血管和淋巴管的侵袭转移。由于肿瘤组织的血管增殖与肿瘤的生物学行为密切相关,血管的定量方法是十分重要的,目前多采用肿瘤MVD检测来衡量肿瘤组织的血管增殖度。ZhangN等的研究发现,肿瘤的生长、浸润、转移均与血管生成密切相关,无论是原发肿瘤还是继发转移瘤在生长扩散过程中都依赖血管的生成。肿瘤内微血管数量和密度与肿瘤转移成正相关,肿瘤内微血管数的增多通常提示预后不良,在一些恶性肿瘤中MVD可作为独立的预后因素。本研究结果显示胃癌组织中的MVD与其组织学类型、浸润深度、TNM分期及淋巴结转移密切相关,与JiaoZY等的研究结果相符。随着肿瘤分化程度的减低、浸润深度的增加、TNM分期的升高,MVD逐渐增加,说明随着胃癌逐渐发展,肿瘤血管增生越活跃,肿瘤的微血管生成有助于肿瘤的生长、浸润,这与Weidner报告相符。Nakazato等的研究表明,血管生成与肿瘤的淋巴结转移有关。肿瘤血管生成能促使癌细胞通过静脉-淋巴管吻合处从血液进入淋巴管;血管生成可能伴随着淋巴管生成,更有利于肿瘤细胞直接浸润淋巴管,促进肿瘤向淋巴结转移,本研究中胃癌淋巴结转移组的MVD亦显著高于淋巴结未转移组。VEGF-C是目前所知最重要的具有淋巴管生成作用的因子,VEGF-C可以特异性的与淋巴管内皮细胞上的血管内皮因子受体VEGFR-3结合。肿瘤细胞VEGF-C蛋白的表达与肿瘤血管生成及淋巴结转移关系密切。本实验结果显示VEGF-C、VEGFR-3蛋白的表达与浸润深度和淋巴结转移有关。VEGF-C的表达与胃癌分化程度有关,而VEGFR-3的表达与肿瘤分化程度的差异没有显著性意义,提示VEGF-C的表达与胃癌的恶性程度有关,恶性程度越高,VEGF-C的表达阳性率越高,其侵袭转移能力越强,这与临床上恶性程度高的肿瘤更易于发生远处转移的现象一致。Fellmer也有类似结论。侵及浆膜层组及淋巴结转移组中VEGF-C、VEGFR-3表达显著高于未侵及浆膜层、无淋巴结转移组,提示VEGF-C、VEGFR-3的表达与胃癌的浸润转移有关。VEGF-C不仅可以与VEGFR-3结合,还可以与VEGFR-2结合诱导新生血管的形成,并促进血管与淋巴管愈合,增加肿瘤与血管的接触面积,增加血管的通透性,有利于肿瘤细胞从血管中穿出到达转移部位。VEGFR-3属跨膜受体,在胃癌细胞胞浆合成后镶嵌于癌细胞胞膜,与其配体结合后能促进癌细胞的增殖、迁移,并赋予癌细胞更高的侵袭性,因而其表达与胃癌浸润深度和淋巴结转移相关,这与Shida的研究结果一致。而与VEGF-C不同的是,VEGFR-3表达还与肿瘤大小相关,这可能因为除VEGF-C外,最近有研究发现VEGF-D