妊娠后期母兔内分泌对生殖性能的影响

妊娠后期母兔内分泌对生殖性能的影响

如何提高仔猪和幼兔子的出生重量、出生后生长速度和死亡率一直是国内外兔子制造商关注的中心。其它家畜的研究表明,个体的初生重对畜禽早期的生长速度有显著影响,初生重大,其抗病力强、死亡率低、生长速度快、饲料报酬高,即胎儿生长发育与其出生后生长速度有密切关系。妊娠母畜后期胎儿生长与胎儿营养供给、母体环境、内分泌等有关。从母体内分泌看,雌二醇(E2)是胎盘生长的抑制剂。在妊娠后期,母体E2水平上升而胎儿生长速度却下降。研究表明,给予妊娠母体外源E2使母体血液E2水平上升,造成胎儿和胎盘重下降,即胎盘的大小和重量在妊娠后期与胎儿生长密切相关。从胎儿内分泌看,甲状腺素缺乏会引起胎儿器官发育延迟、生长停滞。有报道,胎儿时期甲状腺素(TH)水平决定其出生后的反应特性,故这一时期TH不足会引起动物成年后T3和T4降低,而影响动物的生长速度。围产期胎儿胰岛素(Insulin)缺乏会引起生长停滞,而胰岛素分泌增多会增加初生重,出生后生长速度加快。皖系长毛兔是安徽省农科院畜牧兽医研究所协同有关单位,采用杂交育种的方法,通过德系安哥拉兔、新西兰白兔两品种间杂交以及20余年的系统选育而成的中型粗毛型长毛兔。目前,该品种长毛兔已顺利通过国家畜禽新品种审定。本试验以皖系长毛兔为试验动物,应用TH、E2制剂研究长毛兔妊娠内分泌对胎儿及仔兔生长发育的影响,旨在探讨影响长毛兔胎儿及仔兔生长发育的内分泌机制,以寻求促进胎儿生长发育和提高仔幼兔初生重和生长速度的途径。1材料和方法1.1动物和小组将13只妊娠16d的皖系长毛兔分成3组,试验1组5只,试验2组4只,对照组4只。1.2肌肉注射给予大鼠三组试验兔均在妊娠的16～18d作以下处理:试验1组:用0.1mg/只T4溶于1mL0.9%生理盐水中进行肌肉注射,1次/d,连续3d。试验2组:用1mg/mL苯甲酸雌二醇注射液稀释后肌肉注射0.1mg,1次/d,连续3d。对照组:肌肉注射1mL0.9%生理盐水,1次/d,连续3d。1.3仔兔颈动脉血样的采集妊娠16d母兔处理前、处理后妊娠20d时,各兔再采血3mL,所采血样注入等量的生理盐水,并用肝素钠(1∶500)抗凝,3000r/min离心分离血浆15min,-20℃保存备用。在分娩后12h内,对每窝仔兔分别称重记录,并每窝随机取两只仔兔颈动脉放血,采集血样;并在第1周、第2周、第3周、第4周、第5周分别从每窝中随机抽取一只仔兔采血3mL,采血后的仔兔终止试验,第6周将余下的仔兔均采血3mL,血样保存方法同上,并每周对试验中余下的仔兔称重一次。1.4elisa测定血浆雌二醇(E2)、三碘甲腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)及胰岛素(Insulin)ELISA试剂盒均购自上海信然生物技术有限公司,测定按试剂盒说明书进行。1.5处理数据试验数据用平均值±标准误表示,SPSS13.0进行差异显著性检验和相关性分析。2结果与分析2.1妊娠期间，四条静脉的出生体重和ob的血浆在两侧、t3和t4之间变化妊娠16d,各组试验前母兔血浆E2、T3、T4水平无显著性差异(P>0.05),见表1。2.1.1母兔血浆民法民法的发展妊娠16d,各组母兔血浆E2水平均较低,且各组间差异不显著(P>0.05)。妊娠20d,各组母兔血浆E2水平均有较大程度的提高,试验1组和对照组间差异不显著(P>0.05),试验2组显著高于对照组和试验1组(P<0.05)。试验表明,母兔肌肉注射甲状腺素T4没有影响母兔血浆E2水平,而注射E2则显著提高了母兔血浆E2水平。2.1.2妊娠20d,特点妊娠16d,母兔血浆T3水平各组间差异不显著(P>0.05)。妊娠20d,试验1组T3水平显著高于试验2组和对照组(P<0.05),试验2组与对照组间无显著差异。表明,T4处理显著影响了母兔血浆T3水平,E2处理则对母兔血浆T3水平无显著影响。2.1.3妊娠20d,特点试验发现妊娠后期母兔血浆T4水平变化类似T3水平变化,即妊娠16d,各组间差异不显著(P>0.05)。妊娠20d,试验1组显著高于试验2组和对照组(P<0.05),试验2组与对照组间无显著差异。表明,T4处理显著影响了母兔血浆T4水平,E2处理则对母兔血浆T4水平无显著影响。2.2采用t4和ob治疗妊娠的母兔子对t3、t4和胰岛素的影响2.2.1组仔兔出生前后,3周、4周、5周和5周时t水平由图1,仔兔初生时,对照组仔兔血浆T3水平为(0.351±0.047)ng/mL,试验1组T3水平为(0.332±0.035)ng/mL,比对照组稍低,但差异不显著(P>0.05);试验2组T3水平没有检出,即T3水平低于最低检测量0.25ng/mL,可以认为,试验2组T3水平显著低于对照组(P<0.05)。仔兔出生后,试验1组仔兔在3周、5周时T3水平显著低于对照组(P<0.05),试验2组仔兔在3周、4周、5周时T3水平显著低于对照组(P<0.05)。从总体上看,仔兔出生后各组T3水平在0～3周时呈上升趋势,在3周时出现峰值,之后T3水平又回落,6周时稳定在0.45～0.65ng/mL之间。2.2.2仔兔出生后t4比较图2显示,仔兔初生时,对照组仔兔血浆T4水平为(4.4±0.3)ng/mL,试验1组T4水平为(3.2±0.4)ng/mL,比对照组低,但差异不显著(P>0.05);试验2组T4水平为(2.0±0.3)ng/mL,与对照组相比,差异极显著(P<0.01)。仔兔出生后,试验1组仔兔在3周、5周时T4水平显著低于对照组(P<0.05),与试验2组相比差异不显著;试验2组仔兔在3周、4周、5周时T4水平显著低于对照组(P<0.05),与试验1组相比在4周时差异显著(P<0.05)。从总体看,仔兔初生时T4水平较低,1～3周T4水平呈上升趋势,在3周时出现T4峰值,之后略有下降后再缓慢回升,6周时稳定在35.0～45.0ng/mL之间。2.2.3仔兔出生后4周和6周各组大鼠输注后的胰岛素水平仔兔血浆胰岛素水平变化见图3。由图3可知,仔兔初生时,试验1组胰岛素水平略高于对照组,但差异不显著(P>0.05),试验2组胰岛素水平低于对照组和试验1组,差异极显著(P<0.01)。仔兔出生后,试验1组在6周时胰岛素水平显著高于对照组(P<0.05),在3周、5周时胰岛素也高于对照组,但差异不显著(P>0.05)。试验2组在整个试验期间的胰岛素水平均低于对照组和试验1组,1周、4周和6周时差异显著(P<0.05),其他时间差异不显著(P>0.05)。从总体看,胰岛素水平初生时很高,1、2周时水平下降,3周时上升,之后又略有回落,6周时稳定在10.0～25.0uu/mL之间。2.3测年试验组仔兔体重,增重情况由表2知,初生重,试验1组比对照组略高,但差异不显著(P>0.05);试验2组极显著低于对照组和试验1组(P<0.01)。仔兔出生后,试验1组仔兔体重一直高于对照组,但差异均不显著(P>0.05)。4周龄时体重比对照组高出11.4%,在6周龄时高出23.7%。试验2组仔兔体重在5周龄前都极显著低于对照组和试验1组(P<0.01),6周龄时与两组差异显著(P<0.05)。增重情况,试验组在试验期间均高于对照组,但差异不显著(P>0.05),试验2组仔兔在0～7d时增重极显著低于对照组和试验1组(P<0.01),在7～14d、14～21d、21～28d和28～35d时增重显著低于对照组和试验1组(P<0.05)。整个试验期间,试验1组仔兔的增重均极显著或显著高于对照组和试验2组。由此可见,试验1组仔兔生长速度显著比对照组和试验1组快,详见图4。2.4一些指标之间的相关分析2.4.1相关系数的分析相关性分析表明,妊娠20d母兔血浆E2水平与仔兔初生时T4、胰岛素水平呈负相关,相关系数分别为-0.724(P<0.05),-0.927(P<0.01)。妊娠20d母兔血浆T4水平与仔兔初生时胰岛素水平呈正相关,相关系数为0.866(P<0.05),与仔兔初生时T3、T4水平不相关。2.4.2仔兔二周龄重、t4和in作为仔兔的相关因素妊娠20d母兔E2水平与仔兔初生重、4周龄重、6周龄重呈强负相关(P<0.01),T4水平与仔兔6周龄重呈强正相关(P<0.05)。仔兔初生时insulin水平与4周龄、6周龄重呈强正相关(P<0.01)。具体相关系数见表3。3讨论3.1妊娠和妊娠中思想变化对仔兔代谢和胰岛素水平的影响本试验中,给妊娠后期皖系长毛兔肌肉注射T4显著提高了母兔血浆的T3、T4水平,但对仔兔初生时及出生后1～6周的T3、T4水平无显著影响,且T3、T4水平均低于对照组,与Pracyk在小鼠上做的结果类似。但也有学者的研究不支持类似结果。Jeremy认为,这是由于种间成熟时间不同或是因为种间胎盘对TH的通透性不一致造成的。从本试验结果看,试验组母兔血浆中T3、T4水平显著高于对照组,但试验组仔兔初生时T3、T4水平均比对照组低,说明长毛兔胎盘对TH的通透性较差。出生后仔兔甲状腺是在胎儿自身垂体支配下摄取碘,并合成甲状腺素。仔兔体内甲状腺素高低取决于下丘脑-垂体-甲状腺轴的完整性和成熟性及是否有足够的甲状腺素合成所需的营养物质。脑发育决定着下丘脑-垂体-甲状腺轴的完整性和成熟性。Slebodizinski等把出生后不同日龄新生仔兔的下丘脑移植到鸡胚,而后检查鸡胚的甲状腺,结果证实家兔下丘脑促甲状腺激素释放激素活性在仔兔出生后14d才开始出现,说明下丘脑-垂体-甲状腺轴系在仔兔出生后(约2周后)方开始活动。本试验也显示,各组仔兔胰岛素水平在3周后达到一个较高的水平,且妊娠后期20d时母体胰岛素水平又与仔兔初生时胰岛素水平呈正相关。甲状腺素可直接作用于脂肪组织,加速脂肪氧化分解,使糖原分解加强,血糖浓度增加,加强了细胞对葡萄糖的吸收和利用。Baird及Farguhar发现,糖尿病孕妇的胎儿在形态学特征上表现为伴有嗜酸性细胞浸润的胰岛肥大,此种肥大被认为是高血糖所致,并能使胰岛充分分泌胰岛素。本试验中妊娠20d母体胰岛素水平增高引起仔兔初生时胰岛素的增加,是否因母体血液成分的改变引起胰岛肥大,胰岛素分泌增加,尚需做进一步研究。本试验中,妊娠16d肌肉注射苯甲酸雌二醇引起妊娠20d母兔血浆E2水平显著提高,导致仔兔初生时T3、T4、insulin水平显著降低,与Kuhn等在小鼠上试验结果类似。Abul-Karim研究表明,仔兔E2水平增高,造成流向胎盘血流减少,流向子宫肌层血流增多,故妊娠后期E2水平上升可能引起胎儿营养供给减少,胰岛素和胰岛素合成原料减少,或腺体发育受抑制,造成胎儿初生时T4和胰岛素水平下降,以及出生后一段时间内T4和胰岛素分泌不足。3.2妊娠合并心脏病新生儿正常生长本试验中,妊娠20d母兔血浆E2水平升高,引起仔兔初生时TH及insulin水平下降,初生重降低。Pracyk等在小鼠上及Santiago等在兔上的研究结果类似。在人上研究发现,胎儿甲状腺素不足没有引起胎儿生长的变化,而KarlLjungvall等在波尔山羊上试验表明,胎儿甲状腺不足引起胎儿生长停滞。表明,妊娠后期TH对胎儿的影响有种间特异性。Wagner等报道,胎儿甲状腺不足,将引起中枢神经系统发育障碍。相反,甲状腺素过剩,可促使大鼠睁眼时间提前,耳翼发育提前。甲状腺素对器官组织发育有多种作用,而组织器官的成熟性,尤其是肌肉组织、肾组织成熟性提高,与动物生长速度加快有密切关系。Spencer等降低妊娠后期绵羊E2水平观察到,试验组胎儿组织中DNA含量增加,认为这为出生后羔羊生长提供了潜在的有利条件,即在肌肉组织中细胞数量增多,分化程度高,肌肉生长就可能只须进行细胞大小的变化等。动物生长曲线为logistic曲线,呈S型。该曲线的拐点意味着动物生长速度最快的时间。组织成熟性较高的个体拐点早于正常动物,组织成熟性较低的个体拐点较晚。本试验中得到了与此类似的三条曲线,可以推测,对妊娠20d母兔T4及E2处理可能影响到仔兔体组织成熟性,从而引起仔兔生长速度不同。3.3妊娠和妊娠后期胎儿生长和出生后生长速度的变化综上所述,妊娠后期母体E2及TH对仔兔影响的机理推测如下:第一,妊娠后期母体E2水平上升(非正常生理)、引起胎儿T3、T4水