【课件】基因工程的基本操作程序课件高二下学期生物人教版选择性必修3

第2节基因工程的基本操作程序（2）思考1：获取Bt基因后能否直接将它导入棉花细胞内？二、基因表达载体的构建游离的DNA片段进入受体细胞，一般会直接被分解，且游离的DNA片段不能稳定遗传。构建基因表达载体思考2：如何构建基因表达载体？二、基因表达载体的构建——核心步骤？二、基因表达载体的构建活动一

：利用单酶切材料，小组合作构建基因表达载体1.在质粒和外源DNA片段上找到EcoRI限制酶的识别序列，用剪刀模拟EcoRI限制酶对质粒和外源DNA片段进行切割，小组合作构建基因表达载体.EcoRⅠ……G-A-A-T-T-C…………C-T-T-A-A-G……3.利用EcoRI限制酶切开的质粒和目的基因片段为材料，小组合作探究，除了目的基因和质粒能拼接，还有哪些拼接方式？2.如果把目的基因片段旋转180度，能否与质粒拼接？比较正接和反接得到的重组质粒一样吗？二、基因表达载体的构建活动一

：利用双酶切材料，小组合作构建基因表达载体EcoRⅠ……G-A-A-T-T-C…………C-T-T-A-A-G……HindⅢ……A-A-G-C-T-T…………T-T-C-G-A-A……4.模拟探究双酶切过程有几种拼接方式？与单酶切相比有什么优点？【说明】有时为了满足应用需要，会在载体上人工构建诱导型启动子，当诱导物存在时，可以激活或抑制目的基因的表达。启动子上游RNA聚合酶转录终止子下游RNA聚合酶转录标记目的基因二、基因表达载体的构建

基因表达载体的组成及作用思考3：“启动子与终止子”和“起始密码子与终止密码子”有什么区别？现学现用：限制酶的选择方法总结：1.选目的基因两端和运载体都有的酶切位点；2.所选择的限制酶不要破坏目的基因、标记基因、启动子、终止子、复制原点等各个结构.三.将目的基因导入受体细胞——1.花粉管通道法（我国科学家独创）②植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊，将外源DNA片段整合到受体基因组中。①用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中，外源DNA进入受精卵。子房注射花柱滴加三、将目的基因导入受体细胞——2.农杆菌转化法活动二

：请同学们阅读课本P81，思考与讨论完成下列问题：1.什么叫转化？2.农杆菌具有什么特点？3.该过程经过几次拼接，几次导入，是否都是人工操作的？4.农杆菌转化法中，目的基因只能进入植物的一个体细胞，但基因工程最终要的是一个转基因植株，如何实现这一目标？将目的基因导入受体细胞的方法将目的基因导入植物细胞将目的基因导入动物细胞将目的基因导入微生物细胞农杆菌转化法花粉管通道法——Ca2+转化法——显微注射法

使用Ca2+处理农杆菌等可使细胞处于一种能吸收周围环境中的DNA分子的生理状态，然后再将重组的基因表达载体导入其中一般受体细胞为动物受精卵Bt基因mRNABt抗虫蛋白抗虫棉PCR等技术检测抗原—抗体杂交技术分子水平抗虫鉴定（个体水平）四、目的基因的检测与鉴定采摘抗虫棉叶片饲喂棉铃虫观察棉铃虫存活情况个体水平的检测——抗虫棉是否具有抗虫性状四、目的基因的检测与鉴定小结：培育转基因抗虫棉的简要过程苏云金杆菌与载体拼接普通棉花（无抗虫特性）棉花细胞抗虫棉提取导入抗虫基因

（Bt抗虫蛋白基因）重组DNA分子1.目的基因的筛选与获取（前提）2.基因表达载体的构建