粮食中淀粉的测定

粮食中淀粉的测定

由于第5514-1985年gb和t的定义缺陷，试验结果相对较低。GB/T5514—2008标准的发布和实施对其进行了较大的修改,主要变化为:要求样品的粉碎粒度全部通过孔径0.45mm筛;酸处理的水解温度改为沸水浴回流1h;使用试剂淀粉酶替代自制淀粉酶;要求实验用水应符合GB/T6682—2008《分析实验室用水规格》中三级水的要求;修改了试样称量精度;修改了对重复性的要求;样品经淀粉酶、盐酸水解后,按GB/T5009.7—2008《食品中还原糖的测定》部分内容进行操作。依据新的检验标准进行测定,样品的前期处理比较容易掌握,关键是样品处理并稀释至一定体积后的测定步骤(还原糖测定)。下面将测定粮食中淀粉的主要测定步骤,以及测定中遇到的问题进行分析。1还原性淀粉的测定试样经除去脂肪及可溶性糖类后,其中α-淀粉经淀粉酶水解成双糖,双糖再用盐酸水解成具有还原性的单糖,最后按还原糖测定,并折算成淀粉。试样的制备、处理、水分测定按GB/T5514—2008执行,同时量取50mL水及与试样处理时相同量的α-淀粉酶溶液,按同一方法作试剂空白试验。2还原糖量的测定样品经按GB/T5514—2008处理后,在加热条件下,以亚甲基蓝作指示剂,滴定标定过的碱性酒石酸铜液(用还原糖标准溶液标定),根据样品液消耗体积计算还原糖量。2.1b工作原理即在氧指数和溶剂配制(1)碱性酒石酸铜(甲液)称取15g硫酸铜(CuSO4·5H2O)及0.05g亚甲基蓝,溶于水中并稀释至1000mL。(2)碱性酒石酸铜(乙液)称取50g酒石酸钾钠,75g氢氧化钠,溶于水中,再加入4g亚铁氰化钾,完全溶解后,用水稀释1000mL,贮存于橡胶塞玻璃瓶内。(3)葡萄糖标准溶液准确称取1g(精确至0.0001g)经过98~100℃干燥2h的纯葡萄糖,加水溶解后加入5mL盐酸,并以水稀释至1000mL,此溶液每毫升相当于1.0mg葡萄糖。2.2测量步骤2.2.1葡萄糖标准溶液总体积的测定吸取5.0mL碱性酒石酸铜(甲液)及5.0mL碱性酒石酸铜(乙液),置于150mL锥形瓶中。加水10mL,加入玻璃珠两粒,从滴定管滴加约9mL葡萄糖标准溶液,控制在2min内加热至沸,趁热以每一滴2s的速度继续滴加葡萄糖标准溶液,直至溶液蓝色刚好褪去为终点,记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。同时平行操作3份,取其平均值,计算每10mL(甲、乙液各5mL)碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量(mg),也可按上述方法标定4~20mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)来适应试样中还原糖的浓度变化。2.2.2还原糖标准溶液体积测定吸取5.0mL碱性酒石酸铜(甲液)及5.0mL碱性酒石酸铜(乙液),置于150mL锥形瓶中。加水10mL,加入玻璃珠两粒,控制在2min内加热至沸,保持沸腾以先快后慢的速度,从滴定管中滴加试样溶液,并保持溶液沸腾状态,待溶液颜色变浅时,以每一滴2s的速度滴定,直至溶液蓝色刚好褪去为终点,记录样液消耗体积。当样液中还原糖浓度过高时,应适当稀释后,再进行正式测定,使每次滴定消耗样液的体积控制在与标定碱性酒石酸铜溶液时所消耗的还原糖标准溶液的体积相近,约在10mL左右。当浓度过低时则采取直接加入10mL样品液,免去加水10mL,再用还原糖标准溶液滴定至终点,记录消耗的体积与标定时消耗的还原糖标准溶液体积之差相当于10mL样液中所含还原糖的量。2.2.3消耗体积测定吸取5.0mL碱性酒石酸铜(甲液)及5.0mL碱性酒石酸铜(乙液),置于150mL锥形瓶中。加水10mL,加入玻璃珠两粒,从滴定管滴加比预测体积少1mL的试样溶液至锥形瓶中,使在2min内加热至沸,保持沸腾继续以每一滴2s速度滴定,直至蓝色刚好褪去为终点,记录样液消耗体积。同法平行操作3份,得出平均消耗体积。3分析和建议对糖测定的问题3.1测定条件的控制根据测定步骤,首先要标定碱性酒石酸铜溶液(2.2.1),可是依照操作方法,实验不能观察到溶液蓝色褪去的现象。因为其中“趁热以每一滴2s的滴定速度继续滴加葡萄糖标准溶液”中的“趁热”两字,广义上可以理解低于沸腾,高于室温就应当满足反应条件。但由于还原糖和碱性酒石酸铜试剂反应速度较慢,以及还原糖和亚甲基蓝反应的可逆性,“趁热”继续滴加葡萄糖标准溶液,永远不会显示到达终点。那么实验必须满足反应条件,即:在加热至沸条件下继续滴定(同2.2.2试样溶液预测、2.2.3试样溶液测定条件一致),应将“趁热”改为“趁沸”(保持沸腾),这样才能体现标准的严谨(测定条件的统一)。在此特别强调,滴定时一定不要离开热源,必须使溶液保持“沸腾”,除加快反应速度,也是让上升的蒸汽阻止空气浸入到溶液中,避免无色亚甲基蓝和空气中的氧结合又变为蓝色,使结果偏低。3.2测定还原糖浓度(1)标定碱性酒石酸铜溶液、试样溶液预测、试样溶液测定,三者滴定操作条件应保持一致。对每一次滴定使用的锥型瓶的规格质量、加热电炉功率(可采用800W电炉)、滴定速度、滴定消耗的大致体积、终点观察方法(液面半边变透明为滴定终点)等都应尽量一致,以减少误差。(2)样品溶液的测定样品液中还原糖浓度应在0.1%左右,与标准葡萄糖溶液相近,继续滴定至终点的体积应控制在0.5~1.0mL以内,以保证在1min内完成继续滴定的工作。(3)加热至沸时间要相同,否则蒸发量不同,反应液的碱度也不同,从而影响反应的速度、反应进行的程度及最终测定的结果。(4)测定试剂空白中还原糖浓度,采取直接加入10mL空白液,免去10mL加水,再用还原糖标准溶液滴定至终点(先预测)。纪录消耗的体积与标定时消耗的还原糖标准溶液的体积之差相当于10mL空白液中所含还原糖的量。(5)由于整个滴定过程必须在沸腾条件下进行,为防止烧伤及便于滴定操作,可于滴定管尖部加接一弯形尖管,弯形尖管规格及安装如图1所示(标准要求用酸式滴定管,但不好掌握,可