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文档简介

谷氨酸发酵条件控制-

谷氨酸棒杆菌摇瓶种子无菌检测

一、谷氨酸棒杆菌一级种子质量要求种龄：12h，pH值：6.4±0.1光密度：净增OD值0.5以上残糖：0.5％以下无菌检查：(-)噬菌体检查：(-)镜检：菌体生长均匀、粗壮，排列整齐革兰氏阳性反应。二、种子质量检查种子质量的最终指标是考察其在发酵罐中所表现出来的生产能力。因此首先必须保证生产菌种的稳定性，其次是提供种子培养的适宜环境保证无杂菌侵入，以获得优良种子。因此在生产过程中通常进行以下两项检查：（1）菌种稳定性的检查（2）无（杂菌）检查种子无杂菌检查的意义：发酵过程通常是微生物纯种培养过程，培养过程中只允许特定的微生物生长，一旦发酵过程有其他微生物存在，就视为染菌，染菌严重会影响目的菌的生长，导致发酵失败。无杂菌检查方法：显微镜检查法平板划线培养检查法肉汤培养检查法

1、显微镜观察法

对于细菌，通常用革兰氏染色法，染色后在高倍显微镜下观察。对于霉菌、酵母发酵，先用低倍镜观察生产菌的特征，然后再用高倍镜观察有否杂菌存在。优点：简便、快速，能及时发现杂菌缺点：不易检查早期杂菌2、平板划线检查法操作过程:倒平板→空培养→待测样品划线→培养观察优点：能检出更少的杂菌，即灵敏度高缺点：需要较长时间的培养（一般要过夜），操作较繁琐。3、酚红肉汤培养检查法操作步骤：无菌肉汤培养基空培养→接入种子→培养过夜优点：能检出更少的杂菌，即结果较为准确缺点：需要较长时间的培养（一般要过夜），操作较繁琐。请阅读引导文，并回答以下问题：1、革兰氏染色原理？2、革兰氏染色的操作步骤？革兰氏染色的原理：革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易着色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上番红的颜色，因此呈现红色。

革兰氏染色步骤：初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。1）涂片固定。2）草酸铵结晶紫染1分钟。3）自来水冲洗。4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。5）水洗，用吸水纸吸去水分。6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进

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