鸡细胞免疫在鸡艾美耳球虫病中的作用

鸡细胞免疫在鸡艾美耳球虫病中的作用

1材料和方法1.1试验材料1.1.1民法医学室---纯e.tena卵囊（山西分离植物）由山西农业大学兽医病理室提供。通过健康小公鸡传代,按常规分离、纯化卵囊方法进行分离、纯化,孢子化后置4℃备用。1.1.2自然生物饲养海兰白产蛋母鸡和公雏鸡,来自平遥龙海种鸡场;公雏鸡出壳后运回育雏室,给予连续的人工光照和标准日粮(不含抗球虫药),饲养至10日龄时用于本试验。产蛋母鸡在无球虫环境中照常饲养,待用。1.2免疫组化检测igg生成细胞数E.tenella感染鸡IgG生成细胞和血清IgG动态变化规律测定:将150只公雏鸡于第10日龄时随时分为T组和C组,每组50只鸡,T组鸡口服感染E.tenella成熟卵囊8×104个/只,在感染后第2、3、4、6、7、9、12、16、18、20、22天每次捕杀T组和C组鸡各5只,取材,检测各免疫器官及盲肠中的IgG生成细胞数的动态变化。于第2、3、4、6、7、8、10、12、16、18、20、22、25、27、30天T组和C组各取5只鸡,心脏采血,检测循环血液中特异性IgG含量的动态变化。2试验结果2.1独立测试结果2.1.1特异性试验以灭菌生理盐水分别代替卵囊抗原、被检血清和酶标抗体,进行DOT-ELISA检测,结果表明均为阴性。2.1.2关于可溶性卵囊抗体和酶标抗体的最佳工作条件的确定通过试验比较两者的最佳工作条件分别为1︰40和1︰6000。2.1.3阻断试验以1∶10、1∶40稀释的正常鸡血清均能完全阻断,结果为阴性;1∶80、1∶160可部分阻断,1∶320不能阻断,结果为阳性。2.1.4特异性igg检测雏鸡初次感染E.tenella后,第6天血清中开始检测出特异性IgG,随后抗体水平逐渐升高,于第18天达到峰值,持续4天后,开始下降,第30天时降至感染后第7天的水平。2.2igg是由球虫病鸡产生的2.2.1酶标准承担剂的最佳工作浓度的确定2.2.2igg生成细胞阳性细胞主要位于淋巴滤泡和弥散淋巴组织,特征为细胞核为淡蓝色、细胞浆为棕黄色。T组IgG生成细胞从第3天开始增加,第12天达到峰值。第9、12、16、18、20天与C组相比差异极显著(P<0.01),第22天与C组差异显著(P<0.05)。2.2.3攻毒后两组峰值胸腺中阳性细胞数量很少,主要分布于髓质。在攻毒后的整个过程中,有2个峰值,分别出现在感染后第4天和第18天,整体变化起伏不定,无明显规律。2.2.4特异性试验的结果以灭菌生理盐水代替酶标抗体,染色结果为阴性。2.2.5igg生成细胞阳性细胞主要位于淋巴滤泡和弥散淋巴组织,特征为细胞核为淡蓝色,细胞浆为棕黄色。T组IgG生成细胞从第3天开始增加,第12天达到峰值。第9、12、16、18、20天与C组相比差异极显著(P<0.01),第22天与C组差异显著(P<0.05)。2.2.6脾索内igg的生成脾脏中的阳性细胞主要分布于白髓的淋巴小结、动脉周围淋巴鞘,红髓中的脾索内也含有少量的阳性细胞。IgG生成细胞在感染后第3天开始增加,第12天达到峰值。从第4天开始直到第20天差异极显著(P<0.01),第22天差异显著(P<0.05)。2.2.7igg生成细胞的动态盲肠扁桃体中的阳性细胞主要集中于淋巴滤泡和弥散性淋巴组织。IgG生成细胞在攻毒后的第2天即有显著增加,峰值在第9天,然后逐渐下降,于第18天降至对照组水平,在第4、6、7、9、12天差异极显著(P<0.01)。2.2.8分布密度分布法氏囊中的阳性细胞无论皮质、髓质均分布较多,尤其以髓质部分分布密集。IgG生成细胞从感染后第3天开始即显著增加,差异显著(P<0.05),于第6天开始差异极显著(P<0.01),并一直持续到第22天,峰值位于第16天。3鸡体igg生成细胞的动态变化Dot-ELISA具有敏感性高、特异性强、被检样品用量少、不需特殊仪器、操作简便易行、结果便于长期保存等特点。因此,该试验方法自问世以来,不断应用于抗原抗体的检测。但在检测鸡球虫感染鸡血清中的特异性抗体和在卵黄中检测抗球虫特异性抗体方面,尚未见有报道。本试验利用孢子化卵囊作为抗原,感染球虫鸡血清或卵黄抗体为一级抗体,酶标兔抗鸡IgG为二级抗体,建立了Dot-ELISA,效果良好,适合于球虫病鸡血清和卵黄抗体水平的检测。试验研究结果表明:雏鸡初次感染E.tenella后于第6天即可在循环血液中检测出特异性IgG,随后抗体水平逐渐上升,在第18天达到峰值,第30天时下降至感染后第7天的水平。这个结果与Mockett(1986)、Hasbullvh(1992)等的报道基本一致。揭示了雏鸡感染E.tenella后,鸡体IgG生成细胞的动态变化规律为:主要免疫器官胸腺、法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体和盲肠局部的IgG生成细胞于第2天和第3天开始增殖,并分泌特异性IgG,此时,球虫子孢子已穿过肠上皮细胞,进入肠腺上皮细胞内进行发育,并进入第一代裂殖生殖阶段。此期,子孢子和第一代裂殖子均可刺激细胞产生和分泌IgG,IgG生成细胞数量于攻毒后第9天至第16天先后达到峰值,然后逐渐下降,盲肠扁桃体中的IgG生成细胞在第18天降至对照组水平,盲肠、脾脏和法氏囊中的IgG生成细胞数在第22天仍高于对照组,且差异显著。成熟卵囊被鸡吞食后,在肌胃中受机构作用囊壁破裂,释放出4个孢子囊。孢子囊在十二指肠和小肠中部受胆汁和酶的作用,子孢子逸出,子孢子一逸出,就侵入宿主的肠绒毛部黏膜上皮细胞,然后经巨噬细胞和上皮淋巴细胞进行转移,再进一步发育。在上述过程中,巨噬细胞和上皮间淋巴细胞给辅助性T细胞(TH)提供抗原信息,TH接受抗原信息后,通过释放一些可溶性因子作用于B细胞,使处于休眠状