微生物的菌种保藏技术-微生物育种技术

模块九菌种的自然选育（二）NaturalBreedingofBacteria(2)菌种的筛选流程初筛文献调研设计实验方案较优化3-5株单株纯种培养复筛采样增殖培养平皿分离菌种鉴定一、采样1、采样对象以采集土壤为主，也可以是植物、腐败物品和某些水域等。

一般园田土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌为主；富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一些野果生长区和果园内。2、采土方式选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。为了使土样中微生物的数量和类型尽少变化，应便及时分离。二、增殖培养指利用不同微生物间生命活动特点的不同，人为地提供一些特定的环境条件，使特定微生物旺盛生长，使其在数量上占优势，更利于分离出该特定微生物，称为增殖培养也叫富集培养。方法：1、控制一定的养分；如：为目的菌株提供唯一氮源或碳源2、控制一定的培养条件。如：控制PH●细菌和放线菌要求pH7.0～7.5●霉菌和酵母菌要求pH4.5～6三、培养分离尽管通过增殖培养效果显著，但还是处于微生物的混杂生长状态，因此还必须分离纯化。在这—步，增殖培养的选择性控制条件还应进一步应用，而且控制得细一点。纯种分离的方法有稀释分离法、划线分离法。1.稀释平皿分离法a.倾注平皿分离法b.涂布平皿分离法2.平皿划线分离法a.分区划线分离法b.连续划线分离法2、控制培养基的酸碱度如：要分离耐高渗透压酵母菌，在采用含40%葡萄糖的培养基时，PH控制2.0~4.0，几乎分离出的酵母菌全都是耐高渗透压的。纯种分离时培养条件的控制措施：1、营养成分的控制如：若要分离产淀粉酶的微生物，可以用淀粉作唯一碳源。3、添加抑制剂如分离放线菌时，加10%的酚，可抑制细菌和霉菌4、热处理根据芽孢对热的耐性而淘汰不产芽孢的细菌和其他微生物。6、通气条件的控制5、控制培养温度纯种分离时培养条件的控制措施：四、生产能力的检测筛选分初筛和复筛。初筛以迅速筛出大量的达到初步要求的分离菌落为目的，以量为主。复筛则是精选，以质为主，也就是以精确度为主。因此在具体方法上就有差异.1、初筛平板筛选如，水解酶产生菌的筛选：将酶的作用底物加在培养基中，接种后适温培养，根据菌落周围是否产生水解圈筛选出水解酶产生菌。初筛可以在平皿上直接以菌落的代谢产物与某些染料或基质的作用形成的变色圈或透明圈的大小来挑取参加复筛者，而将大量的菌落淘汰。用刚果红染色法鉴定筛选降解纤维素的菌株，羧甲基纤维素钠作培养物2、复筛采用与生产相近的培养基和培养条件，通过三角瓶进行小型发酵试验，以求得适合于工业生产用菌种。摇床复筛五、毒性试验自然界的一些微生物是在一定条件下产毒的，将其作为生产菌种应当十分当心，尤其与食品工业有关的菌种，更应慎重。要根据国家规定，进行毒性试验。六、菌种鉴定经典分类鉴定方法形态特征、生理生化特征、血清学试验等。现代分类鉴定方法遗传特性、细胞化学组分、计算机数值分析。增殖培养的概念采样的特点纯种培养时培养条件的控制要点初筛与复筛的区别小结请设计淀粉酶生产菌的筛选方案。作业项目九菌种的自然选育（一）NaturalBreedingofBacteria课程目标菌种选育种子培养发酵生产产物分离纯化成品培养基的优化灭菌课程目标工业菌种的育种是运用遗传学原理和技术对某个用于特定生物技术目的的菌株进行的多方位的改造。通过改造，可使现存的优良性状强化，或去除不良性状或增加新的性状。菌种选育改良的具体目标

•改变生物代谢途径，提高目标产物的产量•提高目标产物的纯度，减少副产物微生物与人类关系经验育种定向育种提问：生产菌从来源分为哪几类？野生型菌种、突变菌、基因工程菌微生物与人类关系诱变育种自然选育菌种选育基因工程育种杂交育种定向育种经验育种微生物与人类关系一、野生型菌株的来源非人工诱变1.从大自然中分离筛选的菌种2.从自发突变的菌种中筛选的菌种。菌种的自发突变的两种可能：菌种衰退，生产性能下降；菌种代谢更加旺盛，生产性能提高。自然选育：不经过人工诱变处理，而直接进行筛选的育种方法微生物与人类关系二、分离的原则原则：依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地筛选出目的菌种。如，在筛选分泌某种特定成分的微生物时，根据所需物质的特性和微生物的性质制定筛选方案实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分离纯化。微生物与人类关系三、新菌分离的步骤1.案例筛选能降解石油的菌株时，方法是在受石油污染的土壤或水域中取样，配置以石油为唯一碳源的合成培养基，筛选出仍能快速生长的菌株，获得性能优异的单菌落。2.请根据上述案例归纳菌种筛选的步骤微生物与人类关系平板分离确定采集样品的生态环境（有针对性的采集样品）确定特定的增殖条件确定特殊的选择培养基及可能的定性或半定量检出法调查研究及查阅充分的资料设计实验方案采样增殖培养人为地通过控制养分或培养条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。微生物与人类关系较优化3-5株原种斜面筛选