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文档简介

模块九微生物的菌种保藏技术Microbialculturepreservationtechnology内容导入菌种保藏主要是根据微生物生理生化特点，人工创造条件，使微生物代谢处于不活泼、生长繁殖受抑制的休眠状态，即采取低温、干燥、缺氧3个条件，使菌种暂时处于休眠状态。任务内容菌种保藏目的及原理常用菌种的保藏方法一、菌种保藏目的及原理目的使菌种不生长不死亡不污染不降低或不丧失其优良性以尽量延长使用时间原理：创造不利于菌种生长的一切条件，使其代谢处于休眠状态。不利条件干燥无氧缺营养低温保藏注意1、用保种培养基2、及时保藏（菌丝占斜面2/3）3、最好换胶塞4、用时活化5、严防棉塞受潮基本原则1、挑选典型菌种的优良纯种。2、尽量使用分生孢子、芽孢等休眠体3、创造有利于休眠的保藏环境（如干燥、低温）。4、尽可能多的采用不同的手段保藏一些比较重要的微生物菌株。二、常用菌种的保藏方法以母种形式保藏1.斜面低温法

斜面菌种置4~6℃冰箱中（3~6个月）特点简便

保藏时间短

易污染及退化

不适于草菇等菌类2.矿油保藏法斜面或半固体培养基穿刺培养物上加灭菌石蜡（约1cm高），保存时间1-2年。用途：用于霉菌、酵母菌、放线菌、好氧性细菌等的保存矿油处理注入种管无菌检验？口堵胶塞灭菌：121℃、30min

去水：40~50℃烘至无色透明

淹没斜面约1cm用时转管再转管3.自然基质保藏法基质的处理麦粒浸透、煮熟

麸皮拌湿装管灭菌接种培养干燥器去水特点防衰老、保藏时间长

转接后生长旺

易污染，灭菌要彻底4、沙土保藏法特点：干燥、无营养用途：保存比较干燥的微生物孢子或芽孢、放线菌。保存时间数年或数十年5、冷冻真空干燥法原理：在极低温度下快速的将菌体细胞冻结且保持完整，在减压条件下利用升华现象除去水分，真空条件下熔封管口称为冻干法。特点：干燥、低温、无氧、保护剂，保存时间可达15年以上。保护剂：牛乳血清、糖类、甘油、二甲基亚砜6、液氮冷冻保藏技术原理：将安瓿管置于-70℃冰箱中冷冻4h，然后迅速移入液氮罐中保存。使用时从液氮罐中取出，立即放置在38～40℃水浴中使其溶化，而后直接将其接种到适宜的培养基中即可。特点：此法存活率高，稳定性强，保藏时间长，是长期保藏菌种的最好方法。冷冻保护剂在液氮冷冻保藏中，最常用的冷冻保护剂是二甲亚砜和甘油，最终使用浓度一般为甘油10％、二甲亚砜5％。所使用的甘油—般用高压蒸汽灭菌，而二甲亚砜最好为过滤灭菌。几种常用菌种保藏方法的比较方法名称主要措施适宜菌种保藏期评价冰箱保藏法（斜面）冰箱保藏法（半固体）石蜡油封藏法*沙土保藏法冷冻干燥法低温低温低温、缺氧干燥、无营养干燥、无氧、低温、有保护剂各大类细菌、酵母菌各大类**产孢子微生物各大类3~6月6~12月1~2年1~10年5~15年以上简便简便简便简便有效简便有效1、菌种保藏

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