EB病毒相关性传染性单核细胞增多症儿童T淋巴细胞亚群临床意义分析

EB病毒相关性传染性单核细胞增多症儿童T淋巴细胞亚群临床意义分析摘要目的：总结保定儿童医院感染内科EB病毒相关性传染性单核细胞增多症（infectiousmononucleosis,IM）住院儿童急性期T淋巴细胞亚群的变化，提高对传单儿童TB淋巴细胞亚群的认识，为临床诊断IM提供辅助诊断依据。方法：选择保定市儿童医院感染内科2018年4月—2018年6月住院的36例IM儿童急性期T淋巴细胞亚群资料，与40例对照组相比较，对比其T淋巴细胞亚群变化。并探讨IM儿童流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群与手工制片显微镜观察检测异型淋巴细胞的灵敏度。结果：IM组较对照组患儿T淋巴细胞亚群CD8+比例明显升高，CD4+、CD4+/CD8+比例明显下降。IM组T淋巴细胞亚群的灵敏度明显高于异型淋巴细胞（异淋）。结论：IM儿童可引起T细胞免疫功能异常，比末梢血异型淋巴细胞灵敏度高，可以协助儿科临床医生诊断IM。关键词：T淋巴细胞亚群；异型淋巴细胞；EB病毒相关性传染性单核细胞增多症ClinicalsignificanceofTlymphocytesubsetsininfectiousmononucleosisinchildrenKeywords：Tlymphocytesubsets；atypicallymphocyte；infectiousmononucleosisEB病毒相关性传染性单核细胞增多症（infectiousmononucleosis,IM）是儿科常见病，多发病。典型表现为临床“三联症”：发热、咽峡炎、颈部淋巴结肿大。可出现肝、脾、心肌、肺、肾、中枢神经等多脏器多系统受累，病情变化多样、轻重相差悬殊，尤其在中国不典型病例多、幼儿期病例多，给诊断造成一定困难。EB病毒（EBV）作为一种免疫启动因子，主要感染B细胞，继之引起T细胞的免疫反应[1]，故IM与细胞免疫功能密切相关。本研究回顾性分析保定市儿童医院感染内科2018年住院儿童共36例儿童的T淋巴细胞亚群的变化规律，并与异淋灵敏度相比较，目的以协助临床诊断。材料与方法1资料与方法1.1研究对象对象来源：选自保定市儿童医院感染内科2018年4月—2018年6月住院的36例IM儿童T淋巴细胞亚群资料，并搜集患儿末梢血检测异型淋巴细胞资料，对照组40例为健康体检的正常儿童，患儿诊断标准参照《诸福棠实用儿科学》第8版提出的IM的诊断标准[1]。排除标准：筛选排除传单诊断依据不充足的儿童，筛选排除并存细菌感染、支原体感染、噬血细胞综合征、免疫缺陷的传单儿童。1.2方法由医护人员无菌操作下抽取急性期患儿静脉血2ml（不许溶血/血凝），由专人立即送检检验科用流式细胞仪检测TB淋巴细胞亚群。并同时采集末梢血，由专业检验技师进行涂片，手工分类计数异型淋巴细胞百分比。对照组同样进行上述处理。回顾性分析36例IM儿童急性期T淋巴细胞亚群的变化，与40例对照组相比较，对比T淋巴细胞亚群变化规律。并探讨IM儿童，流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群与末梢血检测异型淋巴细胞的灵敏度。1.3TB淋巴细胞亚群的检测应用的TB淋巴细胞亚群的检测仪器为美国BECKMANCOULTER公司提供的CVTOMICSFS500型流式细胞仪。TB淋巴细胞亚群的检测8个项目：淋巴细胞占有核细胞（CD45+）12.5(%)，T淋巴细胞(CD3+)%，辅助/诱导性T细胞(CD3+CD4+)%，抑制/细胞毒T细胞(CD3+CD8+)%，CD4+/CD8+，CD3+CD4-CD8-，B淋巴细胞(CD3-CD19+)%，NK细胞(CD3-CD16+CD56+)%；其中T细胞亚群的3个项目变化最明显，以此T细胞亚群的3个项目为研究项目：辅助/诱导性T细胞(CD3+CD4+)%（CD4+）；抑制/细胞毒T细胞(CD3+CD8+)%（CD8+）；CD4+/CD8+比值。1.4末梢血异型淋巴细胞检测：专业检验技师进行涂片，手工制片、染色、显微镜观察检测异型淋巴细胞百分比，以>10%为检验标准。1.5统计学处理采用SPSS20.0统计软件包进行统计学处理，计数资料以例数和构成比表示，组间差异比较采用2检验；计量资料符合正态分布数据检测结果求出均值±标准差，组间比较采用t检验。计量资料不符合正态分布数据检测结果，检测结果用中位数表示，组间比较采用Mann-WhitneyY检验，检测结果P<0.05为差异性有统计学意义，P>0.05无差异性,不具有统计学意义。结果1结果1.1发病年龄与性别IM组儿童共36例，其中男27例，女9例，男女比为3：1，年龄从1岁3月～9岁不等，中位年龄4.0岁。对照组40例，其中男25例，女15例，男女比为1.67：1，中位数年龄3.0岁；从46天～11岁不等。两组性别经卡方检验差异无统计学意义。具有可比性。（2=1.37，P=0.242，P>0.05）两组年龄经正态检验不符合正态分布，故经Mann-WhitneyY检验差异无统计学意义（Z=-1.315，P=0.188，P>0.05），具有可比性。1.2IM组与对照组T淋巴细胞亚群水平比较：对急性期IM组与对照组两组CD4+水平比较，符合正态分布，急性期IM组CD4+水平（17.97±7.69）%明显低于对照组（35.61±8.09）%，差异有统计学意义（T=-9.717，P=0.000，P<0.05）。对急性期IM组与对照组两组CD8+水平比较，不符合正态分布，故经Mann-WhitneyY检验（Z=-7.314，P=0.000，P<0.05），差异具有统计学意义。对急性期IM组与对照组两组CD4+/CD8+比值水平比较，不符合正态分布，故经Mann-WhitneyY检验（Z=-7.237，P=0.000，P<0.05），差异具有统计学意义。见表2。由此上述内容可见，CD4+、CD4+/CD8+比值明显低于对照组（P均<0.05），CD8+明显高于对照组（P<0.05），差异有统计学意义。表1IM组CD4+与对照组检测结果（%）组别NCD4+IM组3617.97±7.69对照组4035.61±8.09t值-9.717P值<0.05注：CD4+两组比较显示：T=-9.717，P=0.000，P<0.05，两组数据有差异，具有统计学意义。表2IM组CD8+、CD4+/CD8+与对照组检测结果（%）指标组别N秩均值秩和ZPCD8+IM组3658.032089.00-7.3140.000对照组4020.93837.00CD4+/CD8+IM组3619.25693.00-7.2370.000对照组4055.832233.00注：CD8+两组比较显示：T=-7.314，P=0.000，P<0.05，两组数据有差异，具有统计学意义。CD4+/CD8+两组比较显示：T=-7.237，P=0.000，P<0.05，两组数据有差异，具有统计学意义。1.3IM儿童的T淋巴细胞亚群变化与末梢血异型淋巴细胞的阳性率。36例IM患儿中T淋巴细胞亚群存在图1所述变化规律者33例占91.67%。末梢血异型淋巴细胞>10%者21例占58.33%，对照组未发现异型淋巴细胞>10%者。将上述IM组T细胞亚群与末梢血异型淋巴细胞灵敏度（组内自身比较）进行卡方检验显示：2=10.667，P=0.001<0.05，IM病人在T淋巴细胞亚群和末梢血异型淋巴细胞之间灵敏度有差异，具有统计学意义。讨论IM主要与疱疹病毒群的EB病毒（EBV）原发感染有关，我国是EBV感染高流行国家[2]，无症状排毒者为感染源。EB病毒很不稳定，外界环境中从未发现该病毒存在[3]。唾液传播为主要途径，在儿科感染中具有普遍性，感染后终生潜伏于体内，不能被机体免疫系统彻底清除，所以被称为“无处不在的成功病毒”。儿童对EBV易感，可出现多脏器多系统受累，并与多种肿瘤的发生、发展相关，如儿童急性淋巴细胞性白血病、淋巴瘤等。严重威胁儿童健康。从发病机制上讲，EBV多种并发症的发生与人体细胞免疫异常有着非常密切关系。本研究以符合IM诊断标准者36例为研究对象，分析IM的T淋巴细胞亚群的变化规律，并与末梢血涂片的异型淋巴细胞进行比较分析。以协助临床早期诊断，早期治疗。减少并发症的发生发展。国外资料显示，IM的发病年龄多数在青少年及年轻成人，而我国与之不同，发病高峰年龄为4-6岁[4]，本研究对象：36例IM病人中位数年龄为4.0岁，位于我国发病年龄特点正常低值。有学者研究发现，发病年龄低于国外原因是此年龄段儿童免疫功能相对较低有关。另外，4-6岁年龄儿童常居于幼托机构及家庭，经唾液传播发病可能性大[5，6]。经过对IM组和对照组的T淋巴细胞亚群结果进行t检验发现，CD4+、CD4+/CD8+较对照组下降，CD8+上升，T淋巴细胞亚群是反应T淋巴细胞免疫功能的一组指标。CD4+、CD8+的改变及其比值降低说明IM患儿存在T细胞免疫功能过度抑制。探究其原因，病毒入侵口咽部上皮细胞，再入血刺激B淋巴细胞增殖，表达病毒特异性抗原[7]，诱导免疫应答反应，所以临床抽血检验发现EB病毒抗体阳性、EB病毒载量增高。继而活化T细胞和NK细胞。T细胞活化后出现辅助性T淋巴细胞（CD4+）被消耗、抑制性/杀伤性T淋巴细胞（CD8+）大量增殖以抑制B细胞增殖直至清除B细胞。所以临床流式细胞仪检测结果出现CD4+、CD4+/CD8+下降，CD8+上升表现。CD8+强大的细胞毒作用同时释放过量细胞因子导致IM患儿出现淋巴结肿大、肝脾肿大等单核-巨噬细胞系统急性增生性临床表现[8]。如果T细胞功能低下甚至缺陷时，受EB病毒感染的B细胞不能被清除，故而会转成慢性活动性EB病毒感染甚至出现巨噬细胞过度活化转化为噬血细胞、B细胞转化为恶性肿瘤细胞。所以T细胞亚群在IM发病过程中起到重要作用，对于IM疾病演变及转归都有临床意义。IM组：T淋巴细胞亚群变化与末梢血涂片查找异型淋巴细胞结果相比较，经卡方检验，T淋巴细胞亚群变化比末梢血异型淋巴细胞变化有意义。有研究认为，末梢血异型淋巴细胞多数是细胞毒性T淋巴细胞（CD8+）[9，10]，CD8+是T细胞表面的一种标记物，是T细胞的免疫表型。研究它的变化规律可以弥补末梢血灵敏度低和形态学上的不足，弥补检验员对异型淋巴细胞识别的熟练度的主观差异，使得对异型淋巴细胞的识别变得标准化。所以在中国发病年龄段偏小、临床非特异性表现为主、临检证据不足时，行T细胞亚群检测可协助IM诊断。综上所述，EB病毒相关性传染性单核细胞增多症儿童TB淋巴细胞亚群的变化是有规律的，在我院检测的T淋巴细胞亚群的3个项目中，与具有相关性，即CD4+下降，CD8+上升，CD4+/CD8+降低。T淋巴细胞亚群比末梢血查异型淋巴细胞灵敏度高，可作为诊断IM的依据，但特异性低，需要结合临床、EBV抗体和PCR病毒载量检测综合指标进行诊断。本组数据样本量较小，今后可进行大样本多中心结果进行统计更有意义。参考文献江载芳,申坤玲,沈颖等《诸福棠实用儿科学》[M].北京:人民卫生出版社,2015,916.高立伟.儿童EB病毒相关性传染性单核细胞增多症[J].国际儿科学杂志,2010,37(5):481-484.申昆玲.儿内科疾病临床诊疗思维[M].人民卫生出版社,2009.155.CengizAB,Cultu-KantarogluO,SecmeerG,etal.InfectiousmonlnucleosisinTurkishchildren[J].TurkJPediatr,2010,52(3):245-254.GaoLW,XieZD,LiuYY,etal.EpidemiologicandclinicalcharacteristicsofinfectionsmononucleosisassociatedwithEpstain-BarrnirusinfectioninchildreninBeijing,黄穗，陈福雄，陈德辉，等，儿童EB病毒感染及传染性单核细胞增多症临床特点和实验室检查分析[J].中国实用儿科杂志，2013,28(3):200-203.徐斌,周剑峰.EB病毒相关淋巴增殖性疾病的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