差示紫外分光光度法测定诺氟沙星排泄率

差示紫外分光光度法测定诺氟沙星排泄率

诺氟沙星也被称为氟酸，其化学名为1-烷基-6-氟1、4-二羟基-4-氧-7-（1-）基-3-硝基溶胶酸。诺氟沙星抗菌谱广,抗菌作用强,临床上主要用于尿路感染、呼吸道感染、胃肠道感染等。口服后吸收迅速,口服剂量的1/3以原型药物随尿排泄。诺氟沙星在尿中的测定方法,主要有微生物法、紫外分光光度法、荧光分光光度法和高效液相色谱法。作者利用差示紫外分光光度法进行测定,可直接消除尿样中其他物质的干扰,准确,重现性好,对实验条件要求低,为临床检验提供了一个可行的分析方法。1实验部分1.1诺氟沙星胶囊UV—265FW分光光度计(日本岛津),WFZ800—D2紫外分光光度计(北京第二光学仪器厂),电光分析天平(上海天平仪器厂),诺氟沙星标准品(中国药品生物制品检定所,批号:450—9807),诺氟沙星胶囊(辽宁省锦州市生物化学制药厂,批号:96004273;200mg/粒),盐酸和氢氧化钠均为分析纯试剂。1.2试验条件的选择1.2.1诺氟沙星的吸收光谱和光谱特征精密称取诺氟沙星标准品约30mg,置250mL容量瓶中,以HCl(0.01mol/L)溶液溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取2等份,每份5.0mL,置100mL容量瓶中,分别以HCl(0.01mol/L)和NaOH(0.01mol/L)稀释至刻度,摇匀。以水为空白,分别在波长200～400nm扫描。结果为:诺氟沙星的吸收光谱因pH值不同有明显的差异,并在波长276～300nm有最大的吸收度差值(ΔA),且酸液的吸收度大于碱液的吸收度。再以酸液为样品,以碱液为参比,在波长276～300nm,测定吸收度差值(ΔA),其结果为:276.6nm/0.149、283nm/0.312、285nm/0.325、285.5nm/0.324、286nm/0.318、287nm/0.303。测定数据表明:波长285nm下测得的ΔA最大,故选择285nm为测定波长。1.2.2盐酸吸收度的测定以氢氧化钠(0.01mol/L)为参比溶液,以各种不同酸度(0.005、0.01、0.02、0.05、0.1mol/L)的盐酸溶液为样品液,于285nm测定吸收度差值(ΔA)分别为0.325、0.325、0.339、0.338、0.337。结果表明采用0.02mol/L盐酸时ΔA最大。故选择盐酸浓度为0.02mol/L。1.2.3模拟碱吸收度差值以盐酸(0.02mol/L)为样品液,以各种不同碱度(0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50mol/L)的氢氧化钠溶液为参比液,于285nm测定吸收度差值(ΔA)分别为0.062、0.382、0.380、0.363、0.371、0.361。结果表明采用0.02mol/L氢氧化钠时ΔA最大。故选择氢氧化钠浓度为0.02mol/L。1.2.4吸收度的测定精密称取诺氟沙星约15mg,置100mL容量瓶中,加盐酸(0.02mol/L)溶液溶解定容。精密量取2等份,每份5mL,各置100mL容量瓶中,分别用盐酸(0.02mol/L)和氢氧化钠(0.02mol/L)稀释至刻度,以碱液为参比液,以酸液为样品液,在波长285nm,分别在0、1、2、3、4、6、8h测定其吸收度差值(ΔA),结果为0.396、0.406、0.398、0.404、0.386、0.391、0.336,表明样品在6h内稳定。1.3分析的效率指标的确定1.3.14%盐酸/钠标准品溶液精密称取诺氟沙星约40mg,置100mL容量瓶中,加盐酸(0.02mol/L)溶液溶解定容,摇匀。精密量取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.5mL上述溶液各2份,置于100mL容量瓶中,加空白尿2mL,分别以盐酸(0.02mol/L)和氢氧化钠(0.02mol/L)稀释定容,摇匀。以酸液为样品液,以碱液为参比液,于波长285nm测定吸收度差值(ΔA),线性回归后得回归方程为ΔA=0.0447C+0.0808(r=0.9971),诺氟沙星尿药浓度在2～12μg/mL呈线性。1.3.2检测多lm的a配制诺氟沙星浓度为4、6、8μg/mL的酸碱溶液各6份,按“3.1标准曲线的绘制”项下操作,求得ΔA值的日内RSD分别为1.9%、0.8%和0.9%(n=6),日间RSD分别为3.4%、4.2%、1.5%(n=6)。1.3.3吸光度测定配制诺氟沙星浓度为4、6、8μg/mL的酸碱溶液各2份,按“3.1标准曲线的绘制”项下操作。于285nm测定吸收度差值(ΔA)。计算回收率为97.6%,RSD为4.7%(n=6)。1.4尿量的测定4名男性健康受试者,实验前1周禁药,服药前禁食10h。早晨排尿后,用200mL温水送服诺氟沙星胶囊1粒(200mg),收集1、2、4、6、8、12、24h的尿液,准确记录尿量,过滤。精密量取滤液1mL各2份,分别置于50mL量瓶中,依法测定尿液中诺氟沙星浓度,计算累积排泄量和排泄率(见表1)。2紫外分光光度法a.诺氟沙星主要以原形药物经尿排泄,24h后尿药排泄率为30.49%～31.96%,与文