影响供精人工授精成功率的因素分析

影响供精人工授精成功率的因素分析

随着人类精子库和辅助生殖技能的快速发展，以精人工教育为辅助遗传技术的一个方面，为人类优秀者开辟了一条新的道路，并为许多病人的家庭提供了祝福。本文通过对98对夫妇131个AID周期和10个供精ICSI周期的结果进行分析,以便为无精子症患者提供最合适的治疗方案。材料和方法一、临床数据1.岁以下可生精子症2000年7月~2001年10月就诊于本生殖中心的98对不孕夫妇,其中男方无精子症94例,近亲结婚2例,严重少弱精子症1例(精子密度为4×106/mL3,快速和慢速前向精子的活动率占8%),出生低智能儿(已出生3个孩子,最大的10岁,最小的4岁)1例。女方年龄23~45岁(平均28.9±4.0岁),不孕年限2~25年(平均4.7±3.6年)。全部患者经输卵管碘油造影证实至少有一侧输卵管通畅。94例患者均经2次以上精液分析,并将精液离心沉淀后,显微镜仍未发现精子。94例患者中有87例行显微外科附睾穿刺或睾丸活检证实为无精子症。所有患者需凭结婚证、身份证、当地镇级以上的计划生育证明书及夫妻双方签署知情同意书后才能获得进行AID的资格。2.精髓的来源精子来源于上海市人类精子库和重庆市人类精子库,要求供者和受者的血型相符合,但不苛求相貌、肤色等。二、方法1.促性腺激素hgm自然周期组:于月经周期的第12天开始行阴道超声监测。克罗米芬(CC)组:于月经第3~5天开始,每日服CC50mg,连续5天,然后行超声监测,若50mg无反应,下周期增加剂量但最多不超过150mg。促性腺激素组:在月经周期的第3~5天开始注射人绝经期促性腺激素(hMG)每日150IU,连续5天,然后根据卵泡发育调整剂量直到成熟后停药。当卵泡直径达14mm时,每日测尿LH峰,当LH峰出现或卵泡直径平均达18mm时,注射hCG(Serono)5000~10000IU,18及42小时或36小时后行AID。第一次AID后24小时超声提示尚未排卵,则再次行AID。确定排卵后予以黄体功能支持,每日注射黄体酮针20mg,连续一周。2.精华洗剂精子洗涤采用Percoll梯度离心法。3.精子悬液的制备类似于宫腔内人工授精,受者取膀胱截石位,暴露宫颈后,用1mL的注射器与特制的无损伤导管连接,吸取经Percoll梯度离心处理后的冷冻精子悬液0.5~1mL,将导管轻轻插入宫腔,于2~3分钟将精子悬液注入后,缓慢取出导管,臀高位仰卧30min。4.icsi流程10个周期的促排卵方案、卵泡的监测及取卵按本中心常规进行,ICSI操作见文献。三、统计处理所有数据输入SPSS8.0软件,采用t检验和χ2检验。结果一、各组生在各期次妊娠率及相关率98对夫妇共行131个AID周期,有20例妊娠,周期妊娠率为15.3%,这20例妊娠均发生在第1~3个AID周期。其中自然周期组20个周期,2例妊娠,周期妊娠率为10%;CC组69个周期,9例妊娠,周期妊娠率为13.4%;hMG组42个周期,9例妊娠,周期妊娠率为20.5%。三组中以hMG组的周期妊娠率最高,但两两间比较差异无显著性(P>0.05)。二、妊娠率与周期授精时间的妊娠率比较131个AID周期中,73个周期每周期授精1次,58个周期授精2次,妊娠率分别为15.1%(11/73)和15.1%(9/58),两组的妊娠率比较无显著性差异(P>0.05)。三、妊娠率高的患者年龄分布妊娠组和非妊娠组的年龄分别为28.1±3.3岁及29.7±4.7岁,两组的年龄比较无显著差异性(P>0.05)。按不同年龄分组后,大于35岁患者的妊娠率仅5.0%,显著低于其它两组。不孕年限妊娠组比非妊娠组短,分别为3.3±2.3年及6.0±4.8年,两组相比有显著性差异(0.01<P<0.02)。当患者的不孕年限超过10年时,妊娠率下降为4.3%,明显低于其它两组。见表1和表2。四、活动率和洗涤剂前后的活动率131个冷冻精液标本采用Percoll梯度离心处理,妊娠组和非妊娠组洗涤前两组精子的活动率分别为(43.8±13.8)%和(44.3±11.8)%,洗涤后分别为(67.9±14.5)%和(60.2±14.8)%,显著高于洗涤前(P=0.000)。洗涤后的精子活动率妊娠组比非妊娠组高,差异有显著性(0.02<P<0.05)。见表1。五、icsi的怀孕结果10例患者行3次以上AID未成功,其中8例改为供精ICSI共10个周期,有5例妊娠,周期妊娠率50.0%。妊娠合并妊娠率无精子症约占男性不育患者的7%~14%,由于导致的病因复杂,治疗上相当困难,但是随着生殖工程技术的兴起和发展,以及对某些不可恢复性或无法治愈的男子不育症的治疗需要,AID正逐渐被不孕夫妇所接受。尽管有些患者经附睾穿刺或睾丸活检找到精子而行ICSI,但因该项技术费用昂贵,故大量的患者仍需行AID,且该技术合乎自然,费用相对低廉,故如何提高AID的成功率是生殖医学者一直所关注的。影响AID成功率的因素较多,如女方年龄、每周期的授精频率及冷冻精子的洗涤方法等。女性年龄是生育力的标志,尽管妊娠组和非妊娠组的年龄比较无显著区别,可能与本研究所选的大多数对象年龄偏轻有关,但女性年龄超过35岁患者的妊娠率显著降低,仅5.0%。不孕年限越长,妊娠率越低,本研究不孕年限大于10年患者的妊娠率仅4.3%,随着不孕时间延长,不仅不孕程度加重,而且不孕原因更加复杂化。有报道夫精宫腔内人工授精(IUI)联合促性腺激素能增加妊娠率,且促性腺激素组的妊娠率显著高于克罗米芬组和未用药组。本研究三组的妊娠率虽以促性腺组最高,但两两间相比无显著差异,可能因无精子症患者其女方条件较好,排卵功能正常,即使不进行促排卵也能获得比较好的妊娠率,也可能与本研究例数不多有关。另有报道每周期授精2次的成功率高于授精1次,差异有极显著性。本研究未发现有显著性差异,可能与密切监测LH峰,适时进行AID有关。因此,我们认为只要准确掌握AID的时机,建议每周期进行1次授精,既节约费用又可获得同样的妊娠率。高质量的精子是AID成功的关键因素,国外许多文献报道,如果冷冻后精子活动率>40%,则与新鲜精子的成功率相似。因此选择高质量的供体及合适的冷冻精子洗涤方法是保证AID高成功率的一个重要因素。Percoll梯度离心法因其具有快速简便,处理后精子质量明显提高,而成为很多生殖中心首选的精子体外处理方法。本研究也采用Percoll梯度离心法,洗涤后的精子活动率显著优于洗涤前,而且在妊娠组显著高于非妊娠组。AID联合促性腺激素促排卵3个以上周期未孕时,建议行体外受精-胚胎移植术(IVF-ET),可获得较高的