2021年度选修一必背知识点

选修1

1、在果酒、果醋制作过程中，所用重要菌种分别是：酵母菌、醋酸菌。

2、在果酒、果醋、制作过程中，它们所需温度分别是1作25℃、30~35℃

3、酵母菌是高中阶段明星生物，必修一：关于真核生物原核生物问题，酵母菌

是单细胞真核生物:关于酶本质摸索中，酶本质是蛋白质或RNA；在探究酵母菌

呼吸方式中，酵母菌异化作用方式是兼性厌氧菌。

必修三：培养液中酵母菌计数可以采用抽样检测办法,用固体培养基培养酵母

菌可用活菌计数法（菌落）计数。

选修一：运用酵母菌制作果酒反映式是：

C6Hl2。6-2CzH50H（酒精）+2CO2,固定酵母细胞方式是包

埋法。

4、微生物培养基由于加琼脂而分为固体培养基和液体培养基等。

5、培养基化学成分涉及水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。

6、无菌技术涉及：（1）对实验操作空间、操作者衣着和手进行清洁和消毒;

（2）将培养器皿、接种用品和培养基等器具进行灭菌；

（3）为避免周边微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；

7、制备牛肉膏蛋白陈培养基环节：计算称量f溶化（调PH），灭菌一倒平

板）

8、常用4种消毒办法：煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线消毒法、酒精进行消

毒）

9、常用3种灭菌办法：（灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法）

10、高压蒸汽灭菌法规定气压升至（100）kPa,温度为（121）℃,并维持（15〜

30）min才干达到灭菌规定。

11、微生物接种最惯用办法是平板划线法和稀释涂布平板法。

12、在微生物培养中，培养基有“三倒”，详细是倒放、倒拿、倒培养。

13、平板划线法接种微生物过程中最后灼烧接种环目是防止细菌污染环境和操

作者;稀释涂布平板接种微生物过程中移液管吹吸三次目是：使菌种均匀混合。

14、实验室中微生物筛选原理：当培养基中唯一氮源为尿素时，就可以分离出

分解尿素细菌。培养基中唯一碳源为纤维素时，可以分离出分解纤维素微生物:

15、微生物计数常有两种办法：活菌计数法和显微镜直接计数。活菌计数法普

通选取菌落数在亚迪平板进行计数，在同一稀释度下，至少对3个平板进行

重复计数，然后求出平均值。

16、写出每克样品中菌株数公式？

17、纤维素酶由微生物分泌一种复合酶，涉及C1酶、Cx酶和葡萄糖昔酶,刚

果红能与纤维素形成红色复合物,当纤维素水解后培养基中浮现以菌落为中心

透明圈。

18、写出植物组织培养基本流程：离体器官、组织或细胞一愈伤组织-根芽一

植物体

19、生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化核心激素。

20、植物组织培养最惯用培养基是MS培养基。

21、菊花组织培养材料普通选取未开花植物茎上部新萌生侧枝:

22、果胶酶是分解果胶一类酶总称，涉及多半乳糖醛酸酶、果胶分解酶、果胶

酯酶等三种。

23、举例阐明酶活性测定办法有两种办法？

(1)相对直接测定办法如单位时间内、单位体积中反映物减少量或增长量；(2)

间接测定办法如产生果汁量、果汁澄清度、果汁透光率

24、高中生物实验多次用到红细胞，人红细胞来源于造血干细胞:蛙红细胞进

行分裂方式是无丝分裂:动物细胞膜制备所用细胞材料是哺乳动物成熟红细胞:

DNA粗提取所用血液是鸡血红细胞；血红蛋白提取材料是哺乳动物红细胞。

25、在凝胶柱中分离蛋白质有效办法叫凝胶鱼谱法，分子量大在凝胶柱中运动

速度快，运动途径较短,先从凝胶柱洗脱出来。

26、许多重要生物大分子，如多肽、核酸等还可以用电泳办法分开，依照待分

离样品中分子带电性质差别以及分子自身大小,形状不同,使带电分子产生不

同迁移速度，从而实现样品中各种分子分离。在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中，

只依照分子带电荷大小就可待分离物质分开。

27、蛋白质提取和分离普通分为四步：样品解决f粗分离一纯化纯度鉴定,

透析除去分子较小杂质。

专项一老式发酵技术应用

课题一果酒和果醋制作

1、发酵：通过微生物技术培养来生产大量代谢产物过程。

2、有氧发酵：醋酸发酵谷氨酸发酵•无氧发酵：酒精发酵乳酸发酵

3、酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌•酵母菌生殖方式：出芽生殖（重要）分裂

生殖抱子生殖

4、在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。C6H12O6+6O2+

6H2O-682+I2H2O+能量

5、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。C6H12O6->2C2H5OH+2CO2+

能量

6、20C左右最适当酵母菌繁殖酒精发酵时普通将温度控制在18℃-25℃

7、在葡萄酒自然发酵过程中，起重要作用是附着在葡萄皮表面野生型酵母菌.在发

酵过程中，随着酒精浓度提高，红葡萄皮色素也进入发酵液，使葡萄酒呈现深红色.

在缺氧呈酸性发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其她微生物都因无法

适应这一环境而受到制约。

8、醋酸菌是单细胞细菌（原核生物），代谢类型是异养需氧型，生殖方式为二分裂

9、当氧气、糖源都充分时，醋酸菌将葡萄汁中糖分解成醋酸；当缺少糖源时，

醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。C6H12O6+

2O2—2cH3COOH+2co2+2H2O

C2H5OH+O2-CH3COOH+H2O

10、控制发酵条件作用①醋酸菌对氧气含量特别敏感，当进行深层发酵时，虽然

只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最适生长温度为

32℃,控制好发酵温度，使发酵时间缩短，又减少杂菌污染机会。③有两条途径

生成醋酸：直接氧化和以酒精为底物氧化。

11、实验流程：挑选葡萄一冲洗一榨汁一酒精发酵一果酒（一醋酸发酵一果醋）

12、酒精检查：果汁发酵后与否有酒精产生，可以用重铭酸钾来检查。在酸性条

件下，重铭酸钾与酒精反映呈现灰绿色。先在试管中加入发酵液2mL,再滴入

物质量浓度为3moi/LH2s043滴，振荡混匀，最后滴加常温下饱和重格酸钾溶液

3滴，振荡试管，观测颜色

13、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用；排气口是在酒精发酵时用来

排出二氧化碳；出料口是用来取样。排气口要通过一种长而弯曲胶管与瓶身相连

接，其目是防止空气中微生物污染。开口向下目是有助于二氧化碳排出。使用该

装置制酒时，应当关闭充气口；制醋时，应当充气口连接气泵，输入氧气。

疑难解答

（1）你以为应当先冲洗葡萄还是先除去枝梗？为什么？

应当先冲洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗时引起葡萄破损，增长被杂菌污

染机会。

（2）你以为应当从哪些方面防止发酵液被污染？

如：要先冲洗葡萄，再除去枝梗；榨汁机、发酵装置要清洗干净，并进行酒精消

毒；每次排气时只需拧松瓶盖，不要完全揭开瓶盖等。

(3)制葡萄酒时，为什么要将温度控制在18〜25℃?制葡萄醋时，为什么要将

温度控制在30〜35℃?

温度是酵母菌生长和发酵重要条件。20℃左右最适合酵母菌繁殖。因而需要将温

度控制在其最适温度范畴内。而醋酸菌是嗜温菌，最适生长温度为32C,因而

要将温度控制在30〜35℃。

专项二微生物培养与应用

课题一微生物实验室培养

•培养基：人们按照微生物对营养物质不同需求，配制出供其生长繁殖营养基质，

是进行微生物培养物质基本。

・培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。在液体培

养基中加入凝固剂琼脂(是从红藻中提取一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂)

后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见菌

落。依照菌落特性可以判断是哪一种菌。液体培养基应用于工业或生活生产，固

体培养基应用于微生物分离和鉴定，半固体培养基则惯用于观测微生物运动及菌

种保藏等。

•按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。合成培养基是用成分已

知化学物质配制而成，其中成分种类比例明确，惯用于微生物分离鉴定。天然培

养基是用化学成分不明天然物质配制而成，惯用于实际工业生产。

•按照培养基用途，可将培养基分为选取培养基和鉴定培养基。选取培养基是指

在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要微生物生长，增进所需要微生物生

长。鉴别培养基是依照微生物特点，在培养基中加入某种批示剂或化学药物配制

而成，用以鉴别不同类别微生物。

•培养基化学成分涉及水、无机盐、碳源、氮源（生长因子）等。

•碳源：能为微生物代谢提供碳元素物质。如CO2、NaHC03等无机碳源；糖类、

石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能运用有机碳源。单质碳不能作为碳

源。

•氮源：能为微生物代谢提供氮元素物质。如N2、NH3、N03\NH4+（无机氮源）

蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白陈（有机氮源）等。只有固氮微生物才干

运用N2O

•培养基还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气规定。例如，培养乳

酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基pH调至酸性，培

养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧条

件

・无菌技术•获得纯净培养物核心是防止外来杂菌入侵，要注意如下几种方面：

①对实验操作空间、操作者衣着和手，进行清洁和消毒。

②将用于微生物培养器皿、接种用品和培养基等器具进行灭菌。

③为避免周边环境中微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。

④实验操作时应避免已经灭菌解决材料用品与周边物品相接触。

无菌技术除了用来防止实验室培养物被其她外来微生物污染外，尚有什么目？

答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。

•消毒与灭菌区别

消毒指使用较为温和物理或化学办法仅杀死物体表面或内部一某些对人体有害

微生物（不涉及芽抱和泡子）。消毒办法惯用煮沸消毒法，巴氏消毒法（对于某

些不耐高温液体）尚有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒。

灭菌则是指使用强烈理化因素杀死物体内外所有微生物，涉及芽抱和抱子。灭菌

办法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。

灭菌办法：

①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；

②玻璃器皿、金属用品等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；

③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。

④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。

比较项理化因素作用强度消灭微生物数量芽抱和抱子能否被消

灭

消毒较为温和某些生活状态微生物不能

灭菌强烈所有微生物能

制作牛肉膏蛋白陈固体培养基

(1)办法环节：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。

(2)倒平板操作环节：

①将灭过菌培养皿放在火焰旁桌面上，右手拿装有培养基锥形瓶,左手拔出棉塞。

②右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰。

③用左手拇指和食指将培养皿打开一条稍不不大于瓶口缝隙，右手将锥形瓶中培

养基(约10〜20mL)倒入培养皿，左手及时盖上培养皿皿盖。

④等待平板冷却凝固，大概需5〜lOmin。然后，将平板倒过来放置，使培养皿

盖在下、皿底在上。

・倒平板操作讨论

1.培养基灭菌后，需要冷却到50C左右时，才干用来倒平板。你用什么办法来预

计培养基温度？

提示：可以用手触摸盛有培养基锥形瓶，感觉锥形瓶温度下降到刚刚不烫手时，

就可以进行倒平板了。

2.为什么需要使锥形瓶瓶口通过火焰？

答：通过灼烧灭菌，防止瓶口微生物污染培养基。

3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止培养基表面水

分过度地挥发，又可以防止皿盖上水珠落入培养基，导致污染。

4.在倒平板过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还

能用来培养微生物吗？为什么？

答：空气中微生物也许在皿盖与皿底之间培养基上滋生，因而最佳不要用这个平

板培养微生物。

纯化大肠杆菌

（1）微生物接种办法最惯用是平板划线法和稀释涂布平板法。

（2）平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面持续划线操作。将汇集菌

种逐渐稀释分散到培养基表面。在多次划线后培养，可以分离到由一种细胞繁殖

而来肉眼可见子细胞群体，这就是菌落。

（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度菌液分

别涂布到琼脂固体培养基表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两

步。

（4）用平板划线法和稀释涂布平板法接种目是：使汇集在一起微生物分散成单

个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落，以便于纯化菌种。

（5）平板划线法操作环节：

①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。②在火焰旁冷却接种环，并打开

棉塞。

③将试管口通过火焰。④将已冷却接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。

⑤将试管通过火焰，并塞上棉塞。⑥左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种

接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养皿。

⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线末端开始往第二区域内划线。重复

以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区划线与第一区相连。

⑧将平板倒置放入培养箱中培养。

•平板划线操作讨论

1.为什么在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，

依然需要灼烧接种环吗？为什么？

答：操作第一步灼烧接种环是为了避免接种环上也许存在微生物污染培养物；

每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留菌种，使下

一次划线时，接种环上菌种直接来源于上次划线末端，从而通过划线次数增长,

使每次划线时菌种数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能

及时杀死接种环上残留菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。

2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？

答：以免接种环温度太高，杀死菌种。

3.在作第二次以及其后划线操作时，为什么总是从上一次划线末端开始划线？

答：划线后，线条末端细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线末端开

始，能使细菌数目随着划线次数增长而逐渐减少，最后能得到由单个细菌繁殖

而来菌落。

（6）涂布平板操作环节：

①将涂布器浸在盛有酒精烧杯中。②取少量菌液，滴加到培养基表面。

③将沾有少量酒精涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8〜10s。

④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。

涂布平板操作讨论

涂布平板所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释无菌操作规

定，想一想，第2步应如何进行无菌操作？

提示：应从操作各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿距离要适当、吸管

头不要接触任何其她物体、吸管要在酒精灯火焰周边；等等。

菌种保存

(1)对于频繁使用菌种，可以采用暂时保藏办法。

①暂时保藏办法

将菌种接种到试管固体斜面培养基上，在适当温度下培养。当菌落长成后，将试

管放入4c冰箱中保藏。后来每3〜6个月，都要重新将菌种从旧培养基上转移

到新鲜培养基上。

②缺陷：这种办法保存时间不长，菌种容易被污染或产生变异。

(2)对于需要长期保存菌种，可以采用甘油管藏办法。

在3mL甘油瓶中，装入1mL甘油后灭菌。将1mL培养菌液转移到甘油瓶中，

与甘油充分混匀后，放在一20C冷冻箱中保存。

疑难解答

(1)生物营养

营养是指生物摄取、运用营养物质过程。营养物质是指维持机体生命活动，保证

发育、生殖所需外源物质。

人及动物营养物质：水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类。

植物营养物质：矿质元素、水、二氧化碳等三类。

微生物营养物质：水、无机盐、碳源、氮源及特殊营养物质五类。

（2）拟定培养基制作与否合格办法

将未接种培养基在恒温箱中保温1〜2天，无菌落生长，阐明培养基制备是成功,

否则需要重新制备。

课题二土壤中分解尿素细菌分离与计数

尿素是一种重要农业氮肥，尿素并不能直接被农作物吸取。只有当土壤中细

菌将尿素分解成氨之后，才干被植物运用。土壤中细菌之因此能分解尿素，是由

于她们能合成胭酶

尿素最初是从人尿液中发现

筛选菌株

(1)实验室中微生物筛选应用原理

人为提供有助于目菌株生长条件(涉及营养、温度、pH等)，同步抑制或制止

其她微生物生长。

(2)选取性培养基

在微生物学中，将容许特定种类微生物生长，同步抑制或制止其她种类微生物生

长培养基，称作选取培养基。

(3)配制选取培养基根据

依照选取培养菌种生理代谢特点加入某种物质以达到选取目。例如，培养基中不

加入有机物可以选取培养自养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选取培养

能固氮微生物；加入高浓度食盐可选取培养金黄色葡萄球菌等。

记录菌落数目

(1)测定微生物数量惯用办法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。

(2)稀释涂布平板法记录样品中活菌数目原理

当样品稀释度足够高时，培养基表面生长一种菌落，来源于样品稀释液中一种活

菌。通过记录平板上菌落数，就能推测出样品中大概具有多少活细菌。为了保证

成果精确，普通设立3〜5个平板，选取菌落数在30〜300平板进行计数，并取

平均值。记录菌落数往往比活菌实际数目低，因而，记录成果普通用菌落数而不

是活菌数来表达。

采用此办法注意事项：1.普通选用菌落数在30-300之间平板进行计数

2.为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入TTC（在计数琼脂中加入适

量TTC（0.5%TTC1ML力口至1J100ML琼脂中），细菌菌落长成红颜色,对去除食品本

底颗粒物干扰非常故意义）.

3.本法仅限于形成菌落微生物

设立对照

设立对照重要目是排除实验组中非测试因素对实验成果影响，提高实验成果可信

度。对照实验是指除了被测试条件以外，其她条件都相似实验，其作用是比照实

验组，排除任何其她也许因素干扰，证明的确是所测试条件引起相应成果。

实验设计

实验设计涉及实验方案，所需仪器、材料、用品和药物，详细实行环节以及时间

安排等综合考虑和安排。

（1）土壤取样：同其她生物环境相比，土壤中微生物，数量最大，种类最多。

在富具有机质土壤表层，有更多微生物生长。从富具有机物、潮湿、pHM土壤

中取样。铲去表层土，在距地表约3〜8cm土壤层取样。

（2）样品稀释：样品稀释限度将直接影响平板上生长菌落数目。在实际操作中，

普通选用一定稀释范畴样品液进行培养，以保证获得菌落数在30~300之间、适

于计数平板。

测定土壤中细菌数量，普通选用104105106

测定放线菌数量，普通选用1（）3io4105

测定真菌数量，普通选用IO?1（）3104

(3)微生物培养与观测

不同种类微生物，往往需要不同培养温度和培养时间。细菌30~37cl~2天

放线菌25~28℃5~7天霉菌25~28℃3~4天

每隔24小时记录一次菌落数目，选用菌落数目稳定期记录作为成果，这样可以

防止因培养时间局限性而导致一楼菌落数目。普通来说，在一定培养条件下(相

似培养基、温度及培养时间)，同种微生物体现出稳定菌落特性。形状、大小、

隆起限度、颜色

疑难解答

(1)如何从平板上菌落数推测出每克样品中菌落数？

记录某一稀释度下平板上菌落数，最佳能记录3个平板，计算出平板菌落数平均

值

每克样品中菌落数=(C/V)*M其中，C代表某一稀释度下平板上生长平均菌落

数，V代表涂布平板时所用稀释液体积(ml),M代表稀释倍数

植物细胞工程

具备某种生物全套遗传信息任何一种活细胞,都具备发育成完整个体能力,即每

个生物细胞都具备全能性。但在生物体生长发育过程中并不体现出来，这是由于

在特定期间和空间条件下，通过基因选取性表达，构成不同组织和器官。

植物组织培养技术应用有：实现优良品种迅速繁殖;哺育脱毒作物;制作人工种

子；哺育作物新品种以及细胞产物工厂化生产等。

•细胞分化是一种持久性变化，它有什么生理意义？

使多细胞生物体中细胞构造和功能趋向专门化，有助于提高各种生理功能效率。

比较根尖分生组织和愈伤组织异同

组织类型细胞来源细胞形态细胞构造细胞排列细胞去向

根尖分化成各种

受精卵正方形无液泡紧密

分生组织细胞组织

愈伤组织高度分化细胞无定形高度液泡化疏松再分化成新个体

相似点都通过有丝分裂进行细）也增殖

影响植物组织培养条件

材料：不同植物组织，培养难易限度差别很大。植物材料选取直接关系到实验成

败。植物种类、材料年龄和保存时间长短等都会影响实验成果。菊花组织培养普

通选取未开花植物茎上部新萌生侧枝作材料。普通来说，容易进行无性繁殖植

物容易进行组织培养。选用生长旺盛嫩枝进行组培是嫩枝生理状态好，容易诱导

脱分化和再分化。

营养：离体植物组织和细胞，对营养、环境等条件规定相对特殊，需要配制适当

培养基。惯用培养基是MS培养基，其中具有大量元素是N、P、S、K、Ca、

Mg,微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co,有机物有甘氨酸、烟酸、

肌醇、维生素、蔗糖等。

激素：植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化核心性

激素。在生长素存在状况下，细胞分裂素作用呈现加强趋势。在培养基中需要添

加生长素和细胞分裂素等植物激素，其浓度、使用先后顺序、用量比例等都影响

成果。

使用顺序实验成果

先生长素，

有助于分裂但不分

化

后细胞分裂素

先细胞分裂素，

细胞既分裂也分化

后生长素

同步使用分化频率提高

生长素/细胞分裂素比值与成果

促根分化，

比值高时

抑芽形成

促芽分化，

比值低时

抑根形成

比值适中增进愈伤组织生长

环境条件：PH、温度、光等环境条件。

不同植物对各种条件规定往往不同。进行菊花组织培养，普通将pH控制在5.8

左右，温度控制在18~22℃,并且每日用日光灯照射12h.

4、操作流程

配制MS固体培养基：配制各种母液：将各种成分按配方比例配制成浓缩液（培

养基母液）。

•使用时依照母液浓缩倍数，计算用量，并加蒸储水稀释。

•配制培养基：应加入物质有琼脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有机物和植物

激素母液，并用蒸储水定容到1000毫升。

•在菊花组织培养中，可以不添加植物激素

因素是菊花茎段组织培养比较容易。•灭菌：采用灭菌办法是高压蒸汽灭菌。

•MS培养基中各种营养物质作用是什么？与肉汤培养基相比，MS培养基有哪些

特点？

大量元素和微量元素提供植物细胞所必须无机盐；蔗糖提供碳源，维持细胞渗入

压；甘氨酸、维生素等物质重要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一

定影响后所产生特殊营养需求。

微生物培养基以有机营养为主，MS培养基则需提供大量无机营养。

外植体消毒外植体：用于离体培养植物器官或组织片段。选用菊花茎段时，要

取生长旺盛嫩枝。菊花茎段用流水冲洗后可加少量洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷

洗后在流水下冲洗20min左右。用无菌吸水纸吸干外植体表面水分，放入体积分

数为70%酒精中摇动2~3次，持续6~7s,及时将外植体取出，在无菌水中清洗。

取出后仍用无菌吸水纸吸干外植体表面水分，放入质量分数为0.1%氯化汞溶液

中l~2min。取出后，在无菌水中至少清洗3次，漂洗消毒液。

注意：对外植体进行表面消毒时，就要考虑药剂消毒效果，又要考虑植物耐受能

力。

接种：接种过程中插入外植体时形态学上端朝上，每个锥形瓶接种7〜8个外植

体。外植体接种与细菌接种相似，操作环节相似，并且都规定无菌操作。

培养：应当放在无菌箱中进行，并定期进行消毒，保持适当温度(18~22℃)和

光照(12h)

移栽：栽前应先打开培养瓶封口膜，让其在培养间生长几日，然后用流水清洗根

部培养基。然后将幼苗移植到消过毒蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间，进行

壮苗。最后进行露天栽培。

栽培

外植体在培养过程中也许会被污染，因素有外植体消毒不彻底；培养基灭菌不彻

底；接种中被杂菌污染；锥形瓶密封性差等。

专项4酶研究与应用知识点

课题1果胶酶在果汁生产中作用

由水果制作果汁要解决两个重要问题：一是果肉出汁率低，耗时长；二是榨取

果汁浑浊、黏度高，容易发生沉淀。

1、植物细胞壁以及胞间层重要构成成分有纤维素和果胶。并且两者不溶于

水，在果汁加工中，既影响出汁率，又使果汁浑浊。

2、果胶是植物细胞壁以及胞间层重要构成成分之一，它是由半乳糖醛酸聚合

而成一种高分子化合物，不溶于水。在果汁加工中，果胶不但会影响出汁率，还

会使果汁浑浊。果胶酶作用是可以将果胶分解成可溶性半乳醛酸,崩溃植物细

胞壁及胞间层，并且使果汁变得澄清。

3、果胶酶是一类酶总称，涉及果胶分解酶、多聚半乳糖醛酸酶、果胶酯酶

一等。

4、酶活性是指酶催化一定化学反映能力。酶活性高低可以用在一定条件下，

酶所催化某一化学反映反映速度来表达。在科学研究与工业生产中，酶反映速

度用单位时间内、单位体积中反映物减小量或产物增长量来表达。

5、影响酶活性因素涉及：温度、PH、酶抑制剂等。

（二）.实验设计

（设计一）探究温度对酶活性影响

当酶处在最适温度或最适pH时，酶活性最高；若温度过高、过酸或过碱，则

导致酶变性失活。在一定范畴内，果肉出汁率和果汁澄清度与果胶酶活性成正

比。

此实验自变量是温度一；依照单一变量原则，你应保证各实验组相似变量有型

底物浓度底物量实验器材酶用量等等。

（设计二）探究PH对酶活性影响

探究pH对果胶酶活性影响，只须将温度梯度改成pH梯度，并选定一种适当温

度进行水浴加热。反映液中pH可以通过体积分数为0.1%氢氧化钠或盐酸溶液进

行调节。

（设计三）探究果胶酶用量

探究果胶酶用量是建立在探究最适温度和pH对果胶酶活性影响基本之上。此时,

研究变量是果胶酶用量，其她因素都应保持不变。实验时可以配制不同浓度果胶

酶溶液，也可以只配制一种浓度果胶酶溶液，然后使用不同体积即可。需要注意

是，反映液pH必要相似，否则将影响实验成果准

旁栏思考题

1.为什么在混合苹果泥和果胶酶之前，要将果泥和果胶酶分装在不同试管中恒

温解决？

提示：将果泥和果胶酶分装在不同试管中恒温解决，可以保证底物和酶在混合时

温度是相似，避免了果泥和果胶酶混合时影响混合物温度，从而影响果胶酶活性

问题。

2.在探究温度或pH影响时，与否需要设立对照？如果需要，又应当如何设立？

为什么？

提示：需要设立对照实验，不同温度梯度之间或不同pH梯度之间就可以作为对

照，这种对照称为互相对照。

3.A同窗将哪个因素作为变量，控制哪些因素不变？为什么要作这样解决？B

同窗呢？

提示：A同窗将温度或pH作为变量，控制不变量有苹果泥用量、果胶酶用量、

反映时间和过滤时间等。只有在实验中保证一种自变量，实验成果才干阐明问题。

B同窗对于变量解决应当与A同窗相似，只是观测因变量角度不同。

4.想一想，为什么可以通过测定滤出苹果汁体积大小来判断果胶酶活性高低？

提示：果胶酶将果胶分解为小分子物质，小分子物质可以通过滤纸，因而苹果汁

体积大小反映了果胶酶催化分解果胶能力。在不同温度和pH下，果胶酶活性越

大，苹果汁体积就越大。

5.当探究温度对果胶酶活性影响时，哪个因素是变量，哪些因素应当保持不变？

提示：温度是变量，应控制果泥量、果胶酶浓度和用量、水浴时间和混合物pH

等所有其她条件不变。只有这样才干保证只有温度一种变量对果胶酶活性产生影

响。

实验变量与反映变量（如表）

实验变量（自变量）反映变量（因变量）

含义实验中实验者所操纵因素或条件由于实验变量变化而引起变化和成果

实例温度或pH果汁量

联系实验变量为因素，反映变量是成果，两者是因果关系

课题二胡萝卜素提取

胡萝卜素性质：橘黄色结晶，化学性质比较稳定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶

于石油酸等有机溶剂。

根据碳碳双键数目划分为a、y三类。

其中最重要构成成分为快胡萝卜素。

作用：①治疗夜盲症、幼儿生长发育不良、干皮症等疾病；②惯用于食品色素；

③使癌变细胞恢复成正常细胞。

提取B—胡萝卜素办法重要有三种：①从植物中提取②从大面积养殖岩藻中获得

③运用微生物发酵生产

实验环节①粉碎：使原料与有机溶剂充分接触，增大溶解度。②干燥：脱水温度

太高，干燥时间太长会导致胡萝卜素分解。③萃取

I、萃取剂选取水溶性：乙醇、丙酮

水不溶性：石油酸、乙酸乙酯、乙醛、苯、四氯化碳等

选取：具备较高沸点，可以充分溶解胡萝卜素，并且不与水混溶。

II、影响萃取因素

重要因素：萃取剂性质和使用量

次要因素：原料颗粒大小、紧密限度、含水量、萃取温度和时间等

普通来说，原料颗粒