鸡新城疫抗体水平测定

附件1：一、竞赛内容本项目为鸡新城疫抗体水平测定（微量法），测定办法按《新城疫抗体诊疗技术》（GB/T16550-）原则进行。本赛项不设理论考试，只对技能操作进行综合考核，技能竞赛题为公开试题，见本赛项规程的重要技术规程及规定。二、竞赛方式本赛项为2人小组赛，以院校为单位组队参赛，不得跨校组队。三、竞赛时量比赛时间为3小时。比赛时由参赛队自行拟定分工完毕有关竞赛内容。四、名次拟定方法本赛项满分100分，采用分项计分法。按总分由高到低排序，总分相似按完毕时间先后排序，用时少者列前；若二项均相似，则按抗体滴度报告、西凝实验得分高低依次排序。五、评分原则与评分细则1．评分原则及分值项目技能竞赛评分原则及分值见表1。表1项目技能竞赛评分原则及分值序号考核内容考核要点分值评分原则1实验器材准备（8分）仪器使用与材料准备2仪器对的使用，1分；材料准备到位，1分。物品标记4标记合理，2分；标示清晰，2分。实桌面整洁度2摆放合理,2分；2配制1%鸡红细胞悬液（18分）采血办法采血量6抗凝剂适量，2分；采血办法规范、纯熟，2分；采血量控制在2-4mL之间，2分。离心机使用4离心机使用规范，4分。红细胞悬液配制办法8稀释液倍数对的（离心时原抗凝血的3-4倍稀释，稀释后每管最大不可超出10mL），2分；离心机转数、离心时间对的2分；洗涤次数适宜，2分；压积红细胞吸取对的，2分。3血凝实验（20分）器材使用4微量移液器使用规范，2分；枪头更换操作符合规范，2分。操作程序6及时换枪头，2分；加样次序对的，1分；倍比稀释操作规范，1分；震荡及感作时间得当，2分。成果鉴定精确10生理盐水对照孔的RBC呈明显钮扣状沉到孔底时鉴定成果，4分；对照孔成果对的，能拟定完全凝集的新城疫原则抗原最高稀释倍数，4分；能把完全凝集的病毒的最高稀释倍数作为1个血凝单位，2分。4配制四单位病毒（10分）器材选择4器材选择合理，2分；使用规范、纯熟，2分。配制办法4稀释倍数计算对的，3分；稀释液加入得当、操作规范，2分。配制量适宜2配制量适宜，2分；5血凝克制实验（20分）器材使用4器材使用规范、纯熟，4分；操作程序696孔V型微量反映板各孔加入的稀释剂对的，1分；被检血清、新城疫原则阴性血清对照、原则阳性血清对照加入对的，2分；感作时间适宜（以国标为准，时间不对的扣2分），2分；枪头更换对的，1分。成果鉴定精确10能在生理盐水对照孔红细胞呈明显钮扣状沉淀到孔底时鉴定成果，2分；在对照孔成果对的状况下，能从背侧观察RBC有无呈泪珠样流淌，2分；能把完全不凝集（RBC完全流下）作为被检血清的最高稀释倍数，3分；阴性血清与原则对照的HI滴度不不不大于2log2，阳性血清与原则抗原对照的HI滴度与已知滴度相差1个稀释度范畴内，3分。6抗体滴度报告（24分）抗体滴度报告2抗体滴度报告方式对的，2分；注：若超出10孔，应写成≥10。成果误差20每个样本1分，共20个样本，成果误差±1，得1分；场地整洁度2场地整洁，2分。总分1002．评分细则项目技能竞赛评分细则见表2。表2项目技能竞赛评分细则序号考核内容考核要点分值评分原则细则1实验器材准备（8分）仪器使用与材料准备2仪器使用不对的扣1分；材料准备不到位扣1分。物品标记4不标示不得分；标记不合理，扣2分；注：缺一种器皿未标注，扣0.5分，扣完2分为止。实桌面整洁度2摆放不合理,酌情扣分，最多不超出2分。2配制1%鸡红细胞悬液（18分）采血办法采血量6鸡未保定好，扣1分；采血前未消毒扣1分；血液与抗凝剂比为1:4，差别较小扣1分，差别较大扣2分；采血未一针见血，每多加一针扣0.5分；未用干棉球按压止血，扣1分；采血未成功的，扣6分等。以上细节累加，6分扣完为止。离心机使用4未做好平衡扣2分，平衡时未加套管等，各扣1分，累积扣完4分为止。红细胞悬液配制办法8稀释液倍数有误（离心时原抗凝血的3-4倍稀释，稀释后每管最大超出10mL）扣2分；离心机转数、离心时间(r/m，5-10min)有误，扣2分；洗涤未能达原则次数扣2分；最后配备1%红细胞为10-20mL，每超出10mL扣1分，最多扣2分。3血凝实验（20分）器材使用4加枪头时操作规范，不可用力撞击枪盒，移液枪垂直加样为规范，倾斜角度不要过大，否则酌情扣分，最多不超出4分。操作程序6不及时换枪头扣2分；加样次序有误扣1分；倍比稀释操作欠规范扣1分；震荡及感作时间得不当（能够使用振荡器，以液体不震出来为准），扣2分。成果鉴定精确10生理盐水对照孔的RBC呈明显钮扣状沉到孔底时鉴定成果，4分；对照孔成果有误，不能拟定完全凝集的新城疫原则抗原最高稀释倍数，酌情扣分，最多不超出4分；能把完全凝集的病毒的最高稀释倍数作为1个血凝单位，读数时，有跳孔现象的，每跳1孔扣2分。4配制四单位病毒（10分）器材选择4器材选择不合理，扣2分；使用不规范酌情扣分，最多不超出3分。配制办法4稀释倍数计算对的，3分；稀释液加入得当、操作规范，2分。配制量适宜2配备量10-20mL为适量，每超出10mL扣1分，最多扣2分。5血凝克制实验（20分）器材使用4器材使用不规范、纯熟，酌情扣分，最多不超出4分。操作程序696孔V型微量反映板各孔加入的稀释剂有误1分；被检血清、新城疫原则阴性血清对照、原则阳性血清对照加入对的，得2分，参考国标，每缺一种对照扣1分；感作时间适宜2分；以国标为准，时间不对的扣2分，枪头不及时更换扣1分。成果鉴定精确10能在生理盐水对照孔红细胞呈明显钮扣状沉淀到孔底时鉴定成果，有误酌情扣分，最多不超出2分；在对照孔成果对的状况下，能从背侧观察RBC有无呈泪珠样流淌，有误酌情扣分，最多不超出2分；能把完全不凝集（RBC完全流下）作为被检血清的最高稀释倍数，有误酌情扣分，最多不超出3分；阴性血清与原则对照的HI滴度不不不大于2log2，阳性血清与原则抗原对照的HI滴度与已知滴度相差1个稀释度范畴内，超出的扣3分。6抗体滴度报告（24分）抗体滴度报告2抗体滴度报告方式对的，若超出10孔，应写成≥10。有误酌情扣分；酌情扣分，最多不超出2分。成果误差20每个样本1分，共20个样本，成果误差±1，得1分；误差超出±1，0分。场地整洁度2若移液枪未调到最大量程，其它仪器和器皿未复位；注射器未放入废物缸等，每错1项扣1分，扣完为止。总分100六、赛点提供的设施设备仪器清单仪器设备按《新城疫诊疗技术》（GB/T16550-）原则规定配制，且均为惯用仪器、设备与材料。本赛项所用的仪器、设备与材料见表3。

表3项目竞赛用仪器、设备与材料序号器材或设备名称数量规格1普通托盘天平1台500g2普通离心机1台L6003微型振荡器（MH-2）1台4DRAGON微量移液器1支0.005～0.05mL5DRAGON微量移液器1支0.1～1mL6Thermo微量移液器1支1～10mL7微量移液器吸头150个0.005～0.05mL20个0.1～1mL10个1～10mL8微量移液器吸头盒2个0.005～0.05mL1个0.1～1mL9板式微量移液器架1个1096孔V型血凝反映板5块11烧杯5个50mL2个500mL12禽用采血器2支5mL2支10mL13具盖塑料离心管6支15mL14指型离心管6支1.5mL15试管架1个16指型离心管架1个17细记号笔1支18消毒服2件19生理盐水250mL20柠檬酸钠溶液20mL3.8%21鸡新城疫原则抗原1份22被检血清样本20个23鸡新城疫原则阳性血清1份24鸡新城疫原则阴性血清1份25酒精棉球若干75%26干棉球若干27非免疫公鸡1只28橡胶手套4副29医用防护口罩2只 30实验报告单1张31标签纸若干33A4纸2张34签字笔2支七、选手须知（一）重要技术规程及规定鸡新城疫抗体水平测定（微量法）按《新城疫抗体诊疗技术》（GB/T16550-）原则进行,具体环节及其分值以下：（一）实验器材准备（占总成绩的8%）按照操作规程进行器材准备，规定器材摆放有序，物品标记合理，桌面整洁等。（二）配制1%鸡红细胞悬液（占总成绩的18%）按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液，规定采血规范、纯熟、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜等。（三）血凝实验（占总成绩的20%）按照操作规程，用微量移液器在96孔V型血凝反映板滴加稀释液、新城疫原则抗原，充足混匀，倍比稀释后，添加1%鸡红细胞悬液，充足振荡混匀，对的鉴定抗原的血凝效价。规定微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、成果对的等。（四）配制四单位病毒（占总成绩的10%）根据血凝实验成果，按照操作规程配制四单位病毒。规定稀释倍数计算对的，稀释液体积加入得当、四单位病毒配制量适宜等。（五）血凝克制实验（占总成绩的20%）按照操作规程，对20个被检血清进行血凝克制实验操作，并设新城疫原则阳性血清对照、阴性血清对照；对的读取抗体滴度成果，完毕报告。规定移液器使用规范、反映板各孔的稀释对的、感作时间得当、成果判断对的等。（六）抗体滴度报告（占总成绩的24%）按照操作规程，对的读取抗体滴度成果，完毕报告。规定抗体滴度报告方式对的、场地整洁、成果误差小等。（二）选手注意事项1.参赛选手必须持本人身份证或户口簿、学生证和参赛证参加比赛。2.参赛选手不得穿戴有学校名称或有特殊标记的服装进入赛场。3.参赛选手务必于赛前20分钟到赛场，迟到15分钟以上按弃权解决，已检录入场的