醒脾开郁方对抑郁症大鼠模型海马及皮层单胺类递质的影响

醒脾开郁方对抑郁症大鼠模型海马及皮层单胺类递质的影响

抑郁属于中医学的“抑郁综合征”范畴。临床表现以抑郁、抑郁和抑郁为主，通常伴有气虚血瘀、少动、胸闷和食欲减退等症状。作者从气湿的表面运动和胸闷的开放平衡中出发，根据不改变金正气散的不同角度，形成相应的处方，包括香附、香附、香味、白竺等药物，临床效果明显。本实验采用分养与慢性应激相结合的方法建立经典动物抑郁模型,研究醒脾开郁方对大鼠抑郁模型的中枢单胺类神经递质的影响,以探讨其抗抑郁的机制。1实验材料1.1动物健康SD雄性大鼠,180～200g购于北京维通利华实验动物有限公司。1.2离子检测试剂醒脾开郁方药材购于北京同仁堂药店,由中日友好医院中药制剂室制作,并提取挥发油,按比例兑入汤剂中。盐酸氟西汀,常州华生制药有限公司生产,批号80703010,将其用蒸馏水溶解为悬浮液。去甲肾上腺素(NE),为Serva公司生产;多巴胺(DA)、肾上腺素(E)、5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、高香草酸(HVA)、海马3,4二羟基苯乙酸(DOPAC)及内标物3,4-二羟苄胺(DHBA)为Sigma公司产品;二正丁胺为上海化学试剂采购站进口分装;B-8离子对试剂为天津化学试剂二厂生产,甲醇为北京化工厂产品;其余为国产分析醇。1.3色谱中心条件Waters510泵,M464电化学检测器,DL-800色谱工作站(大连化物所色谱中心);Open-Field观察箱(自制);THZ-95型台式衡恒温振荡培养箱,由军事科学院实验仪器厂研制。2实验方法2.1刺激刺激试验用Open-Field法作行为学评定,选择得分相近的大鼠50只随机分为5组,即正常组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、盐酸氟西汀组。正常组大鼠每笼5只饲养,不给予任何刺激。其他4组为造模组,根据文献均单笼饲养,先给予21d不同刺激,包括冰水游泳(4℃,5min),热刺激(45℃,5min),摇晃(频率160次/min,3min),夹尾1min,禁水24h,禁食24h,昼夜颠倒,平均每种刺激给予3次,21d造模成功后,药物组及模型组开始灌服同等体积药物及生理盐水,共28d,并每隔2d再接受1次不同应激刺激,刺激方式及程度与造模时相同,直至实验结束。2.2药/学法10.7g/l给予21d刺激后,中药高剂量组灌胃给予醒脾开郁方,浓度为15mL/kg(含生药15.7g/kg);中药低剂量组,浓度为15mL/kg(含生药7.8g/kg),西药组给予盐酸氟西汀,配制浓度为15mL/kg(生药1.8mg/kg),模型组给予生理盐水15mL/kg。共灌胃28d,灌胃过程中大鼠死亡6只。2.3液氮中冷冻液氮的投入量连续灌胃28d后,将大鼠用1%戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔麻醉后断头处死,取脑置于冰袋上,迅速分离海马及皮层,称重后,立即投入液氮中冷冻,后放入-80℃储存。加0.1mol/L过氯酸(内含0.3mmol/LNa2EDTA、0.5mmol/LNa2SO3)950μL,2mg/LDHBA50μL,超声波匀浆,11000r/min高速离心,10min,取上清液10μL进行测定,根据保留时间和峰面积进行计算。2.4统计处理使用SPSS10.0统计软件进行方差分析,结果用(x¯±s)(x¯±s)表示。3结果3.1各组单胺神经传递质的变化结果见表1。3.2各组单胺神经传递质的变化结果见表2。3.3各组单胺神经传递物质含量的变化结果见表3。4抑郁症患者中神经递质代谢的动态变化及其关系采用分养与慢性不可预见的中等强度应激造成的大鼠模型,表现为兴趣丧失、快感缺乏、自发活动减少等,与临床抑郁症相类似,因此是目前实验研究中最为常用的抑郁模型。抑郁症的发病机制仍处于假说阶段,比较公认的中枢单胺递质减少假说认为,抑郁症的发生与突触间隙中的中枢单胺类神经递质5-HT、NE水平的降低有关,临床采用选择性5-HT重吸收抑制剂(SSRIs)或NE重吸收抑制剂均可缓解临床抑郁症状。但这并不能全面地解释抑郁症的机制,许多研究证明抑郁的发生可能与5-HT、NE、DA之间的失衡关系更为密切,抑郁症的发生与海马关系密切,海马是介导应激反应的最重要的脑区之一,既能调节应激反应,又受到应激反应的影响,慢性的应激可引起海马结构及功能的损害,最终导致抑郁症的发生。抑郁症患者多见忧郁寡言、少动、思维及行动迟缓等临床表现,符合气郁湿滞的病机特点,运用醒脾开郁方以芳香燥湿醒脾,从而使湿化而气行,情志之郁滞亦可随之而消,使情志畅达。本实验选择了海马与皮层的单胺类神经递质为观察指标,研究醒脾开郁方抗抑郁的机制。实验结果显示慢性应激刺激与分养可以明显降低大鼠海马及皮层5-HT、海马DA含量,并使DA、NE的代谢产物DOPAC、HVA明显升高,模型组海马5-HIAA/5-HT、DOPAC/DA及皮层5-HIAA/5-HT明显升高,皮层及海马5-HT/NE低于正常组,说明模型组大鼠一方面存在递质含量的不足,另一方面皮层及海马的5-HT及DA代谢增强,降低了5-HT、DA能神经活性,5-HT与NE的失衡也是导致抑郁的原因之一。醒脾开郁方可明显提高递质含量并纠正递质代谢的紊乱,使递质间关系趋于平衡。抑郁症的发生机理十分复杂,与中枢单胺类神经递质关系密切,而NE能神经元、5-HT能神经元及DA神经元之间相互联系、相互影响,抑郁症的发生并非仅仅限于某一类递质含量的降