自拟活血益肺化瘀中药煎剂联合血府逐瘀散对肺动脉高压模型大鼠肺血管重构的影响

自拟活血益肺化瘀中药煎剂联合血府逐瘀散对肺动脉高压模型大鼠肺血管重构的影响

动脉高压（ph）是一种肺血管重建疾病，其特点是肺血管阻力和肺动脉压力的相关性增加。PH在单一药物治疗上取得了一定疗效,而联合应用不同药物取得最佳治疗效果是治疗PH的新观点,其可发挥不同药物间的协同效应,降低单个药物的不良反应。由于肺动脉重构的分子机制复杂,涉及的信号通路彼此相互作用形成网络,多种药物联合应用可望从不同的治疗靶点起作用,理论上可取得治疗更好疗效,这一观点迄今已得到一些研究的支持。在单药治疗效果不佳或疗效不能维持的病例中联合治疗已显示是一种实用的策略。但也有研究表明,先天性心脏病术后联用一氧化氮(NO)和前列腺素没有协同效应,这可能与二者的竞争机制有关。因此,笔者认为联合用药的两种药物之间如果药理作用近似,可能具有竞争关系,从而影响药效的充分发挥;但两种药物之间药理作用机制完全不同,可从不同的作用位点和不同的细胞信号通路发挥协同作用,从而提高肺动脉高压的治疗效果,降低单药用量过大导致的不良反应。为此,笔者以自拟活血益肺化瘀中药煎剂联用血府逐瘀散,观察其对PH模型大鼠肺血管重构的影响,以为PH临床联合用药提供一定参考。1材料表面1.1疗系统有限公司PM-8000型多参数监护仪(沈阳东软医疗系统有限公司);MIAS300型图像采集分析系统(日本Nikon公司);CX31型光学显微镜(日本Olympus公司)。1.2血府逐瘀散方活血益肺化瘀中药煎剂(笔者自拟方并自制);血府逐瘀散(经典方,笔者自制);野百合碱(MCT,北京伊普瑞斯科技有限公司,批号:201203232145)。1.3动物2方法2.1大鼠项土壤ph模型的建立将MCT溶解于适量0.5mol/LHCl,用0.5mol/LNaOH调pH值至7.4,于大鼠项背部scMCT(60mg/kg)以复制PH模型。2.2中药”与自拟活血府逐瘀散mps的中药研磨成药标准实验分为5组,即空白对照、模型、自拟活血益肺化瘀中药煎剂(MS,2mg/kg)、血府逐瘀散(MP,2mg/kg)与自拟活血益肺化瘀中药煎剂+血府逐瘀散(MPS,2mg/kg+2mg/kg)组。ig给药,每天1次,连续28d。2.3左心室与右心室采集质量比值mmhg各组大鼠均在末次给药后用多参数监护仪检测平均肺动脉压力[mPAP(1mmHg=0.133kPa)],然后断颈处死大鼠,取出心脏,去掉心房及大血管,游离右心室(RV)和左心室加室间隔(LV+S),去掉血液和水分后分别称定质量,并计算RV/(LV+S)质量比值反映右心室肥大程度。2.4防水剂、ldHE染色法操作,切片脱蜡至70%酒精。将地衣红染液滤过,切片投入滤液中,室温下过夜。用70%酒精充分洗涤,必要时用1%盐酸酒精分化至弹力纤维清晰为止,流水冲洗。用亥瑞氏苏木素液作对比染色30s~1min,水洗。经95%酒精、无水酒精脱水,二甲苯透明,香胶封固。2.5肺组织特征的检测2.5.1中膜肌化的检测每只大鼠随机观察20个高倍视野(400×),统计直径在50~150μm的腺泡内小动脉(30~60根)。根据平滑肌α-肌动蛋白(SM-α-actin)染色阳性程度分别计数完全肌化(中膜有完整的肌层)、部分肌化(中膜肌层不完整)和无肌化的小动脉(没有明显的肌层)。无肌性小动脉肌化程度=(完全肌化+部分肌化的血管数)/观察血管总数×100%。2.5.2血管壁内外孔径的测定光镜下观察HE染色切片,每份标本随机计算20根管径在50~150μm肺小动脉管壁厚度(血管内膜与外膜之间的距离)和外径。采用图像采集分析系统,用光标勾画出血管壁内外轮廓线,分别计算出内外管径均值,其差值为管壁厚度。WT%=(2×管壁厚度)/外径×100%。2.6数据处理与分析应用SPSS13.0软件进行统计学分析,数据以表示,采用单因素方差分析,采用q检验进行各组数据两两比较。P<0.05为差异有统计学意义。3结果3.1ms、mp、ms+mp对大鼠mpap、rv/lv+s的影响与空白对照组比较,模型组大鼠mPAP、RV/(LV+S)显著升高(P<0.01);与模型组比较,MS、MP、MS+MP组大鼠mPAP、RV/(LV+S)显著降低(P<0.05);与MS、MP组比较,MPS组大鼠mPAP、RV/(LV+S)显著降低(P<0.05)。各组大鼠mPAP、RV/(LV+S)的比较见表1。3.2大鼠wt%和肺无肌性小动脉肌化程度比较与空白对照组比较,模型组大鼠WT%和肺无肌性小动脉肌化程度显著升高(P<0.01);与模型组比较,MS、MP、MS+MP组大鼠WT%和肺无肌性小动脉肌化程度显著降低(P<0.05);与MS、MP组比较,MPS组大鼠WT%和肺无肌性小动脉肌化程度显著降低(P<0.05)。各组大鼠WT%和肺无肌性小动脉肌化程度的比较见表1。4不同药物联用对肺血管重构的影响血管平滑肌细胞(VSMC)位于血管壁中膜,SM-α-actin是收缩型VSMC的标志性蛋白质;合成型VSMC呈去分化态,对外界各种有丝分裂原起反应而活跃增生,SM-α-actin表达降低。VSMC由收缩型向合成型转化是VSMC增生从而引起PAH肺血管重构的先决条件。本研究中,与模型组比较,MPS组大鼠mPAP、RV/(LV+S)、WT%和肺无肌性小动脉肌化程度显著降低(P<0.05),提示自拟活血益肺化瘀中药煎剂联用血府逐瘀散可抑制PH引起的VSMC表型转换,且两种药物联用对PH引起VSMC表型转换的抑制作用加强,从而逆转肺血管重构进程的同时还可降低mPAP与抑制右心室肥大程度。综上所述,自