GB 4789.11-2014 好 溶血性链球菌 自学

第二节β型溶血性链球菌检验/bemf/microangela/strept.htmStreptococcusGB/T4789.11-2014NationalfoodsafetystandardFoodmicrobiologicalexamination:examinationofStreptococcushemolyticus食品安全国家标准食品微生物学检验

β型溶血性链球菌检验2014-12-01发布2015-05-01实施

目录一、概述2、菌体生物学特性（菌体形态学特征、分类、培养特性、抵抗力和致病性）4、培养基和试剂5、检验程序6、原理附、猪溶血性链球菌流行及对人的感染第一部分概述分布：自然界分布较广致病菌分型：

90％属于乙型溶血性链球菌的A族。但可引起人致命感染的猪链球菌病原体是甲型溶血荚膜抗原2型菌。

所致疾病：浅部组织化脓性炎症、多器官炎症、以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变态反应。

因此，检查食品是否有溶血性链球菌具有现实意义。

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－－概述解释1、分布较广:

溶血性链球菌在自然界分布较广，可存在于水、空气、尘埃、牛奶、粪便及人的咽喉和病灶中。2、致病菌分型：90％属于乙型溶血（绵羊红细胞）性链球菌的A族。猪链球菌病原体是甲型溶血，

荚膜抗原2型菌。

目前常用血清学分类

乙型溶血性链球菌分成A，B，C，D，E，F，C，H，K，L，

M，N，O，P，Q，R，S，T共18个族，在一个族内因表面抗原，即型特异性抗原的不同，又可分成若型。如A族由于M抗原不同可分成60多个型

B族分为4个血清型

C族分成13个型。

“与人类疾病有关的大多属于乙型溶血性链球菌，其血清型90％属于A族链球菌”-检验用常可引起皮肤和皮下组织的化脓性炎症及呼吸道感染，还可通过食品引起猩红热、流行性咽炎的爆发性流行。因此，检查良品是否有溶血性链球菌具有现实意义。

3、菌体生物学特性

（菌体形态学特征、分类、培养特性、抵抗力和致病性）

1）形态与染色:G＋链球菌

形态：球形或卵圆形无芽孢、鞭毛，难见荚膜

大小：直径为0.5-l.5μm

排列：液体培养基中易呈长链状排列，长者达20-30

个菌或更长；

固体培养基或病灶中常呈散在、成对或由4-8个菌体组成短链。

染色：G＋。

Streptococcus_files/slide0273_image021.jpg2）培养特性

营养要求:

较高，加血成份生长良好血清肉汤中：溶血性菌株呈长链状，管底呈絮状或颗粒状沉淀血平板上：形成灰白色细小s菌落，溶血现象:不同菌型有不同的溶血能力，有甲型溶血：猪和人流行的链球菌病属于该型溶血的荚膜抗原2型链球菌

“β/乙型溶血：90％以上致病性链球菌属于该型”丙型溶血：无溶血环亚甲型溶血性链球菌，溶血环狭小，不具有明显的环状，3）抵抗力

菌体:抵抗力一般不强，在60℃经30min即被杀死；敏感：对杆菌肽、青霉素、红霉素和磺胺都很敏感。

青霉素、头孢类是溶血性链球菌感染的首选药物。耐受：奥普托辛、多粘菌素、萘啶酮酸钠；

*奥普托辛(乙基氢化叩卜林<一种铜色素碱>)试验阴性，可与肺炎链球菌(+)区别；*“约有97％的A族链球菌被杆菌肽抑制，而其他链球菌则不受抑制－－检验用。”毒素：红疹毒素耐热力很强，煮沸60min才可破坏奥普托辛试验阴性

OptochinTest：Optochin(ethylhydrocupreine，乙基氢化叩卜林<一种铜色素碱>)memiserf.medmikro.ruhr-uni-bochum.de

β型溶血性链球菌对optochin不敏感，菌落周围不形成抑菌环。肺炎链球菌：阳性肺炎链球菌对optochin敏感，菌落周围形成≥14mm的抑菌环；β型溶血性链球菌：阴性葡萄糖＋，触酶阴性多数A族溶血性链过氧化氢酶阴性链球菌可分解肝糖和淀粉肠球菌(D族)绝大多数能分解甘露醇，亦能分解七叶苷，使培养基变黑。

4）生化特性5）毒素和酶致病性链球菌可产生多种毒素和酶。（1)溶血素：溶血素有O和S两种：

O为含有—SH基的蛋白质，具有抗原性；

S为小分子多肽，相对分子质量小，故无抗原性。

(2)红疹毒素：疹毒素为外毒素，主要由A族链球菌产生，

大剂量引起全身性红疹，并伴有发热、头痛、

恶心、呕吐、周身不适等。红疹毒素耐热力很强，煮沸60min破坏/~cbwilso/250graphics00.htm（3)透明质酸酶（扩散因子）

(4)链激酶（溶纤维蛋白酶）：能激活人的“血浆蛋白酶原”（无活性）成“血浆蛋白酶”（有活性），可溶解凝固的纤维蛋白。该活性可被相应的抗体抑制；链激酶试验阳性。”

(5)杀白细胞素

（6）还有链道酶(又称脱氧核糖核酸酶)

蛋白酶核糖核酸酶二磷酸吡啶核苷酸酶致病毒素等

6）致病性

感染方式：直接接触飞沫吸入、消化道通过皮肤和粘膜伤口

引起疾病：

(1)化脓性炎症—败血症：

淋巴管炎、淋巴结炎、蜂窝组织炎、扁桃体炎、咽炎、鼻窦炎、中耳炎、乳突炎、细菌性心内膜炎、风湿热、肾盂肾炎、肾小球炎及产褥热、新生儿败血症等。溶血性链球菌侵袭力较强，比葡萄球菌更易扩散和蔓延，往往沿淋巴和血液扩散而引起败血症。

(2)猩红热产生红疹毒素的溶血性链球菌引起的小儿急性传染病。多以飞沫传播并通过咽喉粘膜侵入机体，产生红疹毒素，引起全身红疹和全身中毒症状。第二部分国标部分1、范围本标准规定了食品中β型溶血性链球菌（Streptococcus

）的检验方法。本标准适用于食品中β型溶血性链球菌的检验。2、术语和定义2.1β型溶血性

在菌落周围形成完全透明的溶血环，红细胞完全溶解。2.2β型溶血性链球菌

能够产生β型溶血的化脓（或A群）链球菌（Streptococcuspyogenes）和无乳（或B群）链球菌（Streptococcusagalactiae）.3、设备和材料------------厌氧培养装置------------------------微生物生化鉴定系统------------抽气型厌氧培养罐

4&id=3311267c5aa4062c7a01622a0a25b2ac&multiple

4、培养基和试剂4.1/A.1改良胰蛋白胨大豆肉汤（MTSB）

：

稀释用在胰蛋白胨大豆肉汤的基础上加了多粘菌素和萘啶酮酸钠（1-乙基-1,4-二氢-7-甲基-4-氧代-1,8-萘啶-3-羧酸钠盐）抑杂菌，主要针对G-菌的抑制作用。4.2/A.2哥伦比亚CAN血琼脂：绵羊红细胞β--溶血营养丰富：胰酪蛋白胨、动物组织蛋白消化液、酵母提取物、牛肉提取物、

玉米淀粉、氯化钠、琼脂；抑制杂菌：多粘菌素和萘啶酮酸无菌脱纤维绵羊血以5%的量加到50℃灭菌培养基中。4.3/A.3哥伦比亚血琼脂比哥伦比亚CAN血琼脂营养成分少点。4.4/A.4革兰氏染色液G+4.5/A.5胰蛋白胨肉汤（TSB）4.6/A.6草酸钾血浆草酸钾：抗血凝剂血浆：抗凝血离心去除血细胞余下的上清部分，由纤维蛋白和血清组成。4.7/A.70.25%氯化钙（CaCl2）溶液：链激酶（容纤维蛋白酶）实验用：阳性4.8/A.8

3%过氧化氢（H2O2）触酶试验：阴性5、检验程序+P28加猪溶血性链球菌H2O2酶阴性阳性阳性（容纤维蛋白酶）人感染猪链球菌的病症多数病例发病初期均出现高热、全身不适，眩晕。人体感染猪链球菌后的临床上主要分为2个类型，即败血症型和脑膜炎型。败血症型常发生链球菌中毒性休克综合征：突然发病，多为突起高热；腹痛、腹泻；肢体远端部位出现瘀点、瘀斑；病情进展快，很快转入多器官如肾、肝功能不全，急性呼吸窘迫综合征，软组织坏死、筋膜炎等，衰竭，休克。该型的临床表现较重，病死率较高。

脑膜炎型主要临床表现为头痛、高热、脑膜刺激症阳性等。该型的临床表现较轻，愈后较好，病死率较低。－－猪的病症特点败血型：最急性：24小时内突然死于败血症急性：发烧系列症状，皮肤呈紫红色，并有出血点。多在1－3天死亡。慢性：多发性关节炎脑膜炎型：淋巴结脓肿型

/technoloy-zbx/xijun/technology-zbx-xijunbing-lqj.htm举例林间小径

后面是以前国标的4、培养基和试剂

葡萄糖肉浸液肉汤/肉浸液肉汤：

(在肉浸液肉汤内加入1％葡萄糖)轻度污染样品增菌用。匹克氏肉汤：重度污染增菌用，含结晶紫和三氮化钠抑杂菌物质等4、培养基和试剂

血琼脂平板；检测溶血性：90％以上致病性链球菌属于乙型溶血型人血浆:0.25%氯化钙:

灭菌生理盐水

“杆菌肽药敏纸片(含0.04IU):敏感

97%

A族链球菌对杆菌肽敏感”溶纤维蛋白酶（链激酶）检验用＋杆菌肽敏感试验

5、检验程序（溶纤维蛋白酶）阳性阳性增菌用轻度污染重度污染乙型溶血G＋6、说明

1）增菌培养

葡萄糖肉浸液肉汤：污染轻的样品

或用匹克氏肉汤：污染重的样品*匹克氏肉汤含有胰蛋白胨的心肌浸液和脱纤维血，营养丰富，含有结晶紫、三氮化钠抑制G＋菌的生长，一般用于污染严重的标本。接种后在37℃培养24h。

2)分离培养将上述增殖的培养物接种于血琼脂平板，接种后在37℃

培养24h。－－乙型溶血,猪的为甲型溶血。/dir/labs/lhbp/deleo.htm3)溶纤维蛋白酶实验

(1)草酸钾人血浆的制备抽取人血10ml，放人已加无菌0.02g草酸钾试管内，混合后置于2000r／min离心机内旋转10min，吸取血浆进行试验。制备时应选用新鲜的人血浆。

(2)凝固和溶解时间观察

*（草酸钾人血浆＋盐水）＋培养物＋氯化钙－水浴－凝固-溶解注意血浆完全凝固时间(约15min)。凝固后每半小时观察一次结果，共观察2h；溶解者：阳性不溶解者仍放置水浴，24h后再观察一次，仍不溶者：阴性记录完全凝固和溶解时间。致病性链球菌链激酶阳性。对照：阴性对照：取0.5mL肉浸液肉汤作为阴性对照阳性对照:用已知链激酶（溶纤维蛋白酶）阳性菌株肉浸液肉汤培养物0.5ml作为阳性对照。

4）杆菌肽敏感试验－－阳性者为乙型溶血性A族链球菌将分纯的乙型溶血性链球菌划线接种于血琼脂平板，并贴附杆菌肽纸片，经培养后，如产生抑菌圈即为对杆菌肽敏感。由于对杆菌肽敏感的菌株99．5％为A族链球菌，因此当该项试验阳性时，可推测为乙型溶血性A族链球菌。

/~johnson/labtools/Dbiochem/baci.html复习题1、试述溶血性链球菌的检验程序，并说明之。2、与人类疾病有关的决大多数溶血性链球菌属于乙型溶血性链球菌，其血清型90％属于A族链球菌，该菌革蓝氏染色阳性、杆菌肽敏感试验阳性、链激酶（溶纤维蛋白酶）试验阳性。附：猪溶血性链球菌病

人病例：

*第一例病人：2005年6月24日四川资阳市一户人家养的猪突然死了一头，被家人吃掉后发病：高烧、乏力、恶心、呕吐等症状，被送到资阳市第三人民医院，成为第一例病人。

*后陆续有类似病例出现：如7月18日，四川省资阳市一女士花15元钱买了一头死猪，炒猪肝，孙子只吃了一口，妻子吃的多，又吃肉，3d后妻子生病住院。*所有的病例都与病死猪有关，特别是与剖割猪有关，有皮肤伤者最多。病状严重，死亡迅速，引起高度关注。

原因是什么？/GB/8217/51258/－－重视：世界关注，卫生部长高强赶赴四川资阳疫情地区视察。－－病因：经国家卫生部和农业部都已经确认，导致发病和死亡的罪魁祸首是“猪链球菌2型”（荚膜抗原2型，计有30多个型，甲型溶血型的链球菌），此菌可导致猪死亡，这是一种人畜共患病，接触这种猪，就可能患上“人－猪链球菌病。－－猪链球菌病为我国二类动物疫病

STREPTOCOCCALINFECTIONSINPIGSStreptococcussuis,brothculture,Gram'sstain,highpower.Notethetypicalstreptococcalchainseeninorganismsgrowinginfluids.CourtesyofDr.JohnPrescott/mvm/htm/bc/53801.htm

－－流行情况：在四川局部地区集中多点散发－－发展：截至2005年8月3日12时，四川省累计报告人感染猪链球菌病病例206例，死亡38例。目前尚未发生人传人的报道－－现况：疫情已被控制：这次流行，仅限于四川省，截止8月

20日12时，四川省已连续16天无新发人的病例，连续1３d

无动物新发病例－－人的潜伏期：较短数小时－－2d－3d--7d

猪链球菌病图解

－－影响因素：主要和6-9月份高温、闷热有关。以后还会发生－－疫区：四川省内在资阳、内江、成都、绵阳、自贡、泸州、南充、德阳等8个地市、21个县市区、88个乡镇、

149个村发生了猪链球菌病疫情。－－疫区历史：1976-1982年间，四川省内江地区（现资阳市和内江市）、自贡、成都、绵阳等地生猪曾发生猪链球菌病－－猪疫情：死亡猪647头。此次疫情从6月24日开始发生，至7

月20日左右感染死亡猪数量达到高峰，随后数量迅速减少，疫情呈迅速下降趋势。－－人疫情：6月下旬，开始出现人感染猪链球菌病例

7月16日起，发病明显增多，22日达到高峰

7月19－25日发病稳定在较高水平

7月28日开始下降，8月1日以来，病例明显下降，

8月4日以后，没有新发病例。/20050726/n226451555.shtml－－我国其他地域病例：

*深圳确诊首例人猪链球菌病例，摊床卖肉的,切割冻猪肉,

手有伤未及时处理，患者病情已明显好转.*广东共发生四例人感染Ⅱ型猪链球菌确诊病例.*香港新发现一例猪链球菌感染的

78岁妇女，来源不清

/.../

－－其他国家发病历史：

1968年丹麦学者首次报道了人体感染猪链球菌导致脑膜炎的病例

1975年荷兰也曾有个别病例报道。此后，在香港、英国、加拿大、德国、法国和瑞典也陆续报道了人感染猪链球菌的病例。

－－地理分布：主要在北欧和南亚一些养殖和食用猪肉的国家和地区。近年来，美国、日本、泰国、中国台湾、江苏等地都先后有过报道。

－－目前尚未发生人传人的报道。/wbnews.php?db=2&thisid=20599人体感染猪链球菌后病症：

多数病例发病初期均出现高热、全身不适，眩晕。临床上主要分为2个类型，即败血症型和脑膜炎型。