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凝胶柱层析操作要点(一)根本原理凝胶是一种不带电荷的具有三维空间的多孔网状构造、呈珠状颗粒的物质，每为外水体积V。不能进入凝胶孔径的那些大分子，当洗脱体积为V。时，消灭洗脱Vi，能全部渗入凝胶的那些小分V。+Vi时消灭洗脱峰。(二)凝胶的类型及性质1.交联葡聚糖凝胶Sephadex，3-氯-1.2-环氧丙烷(交联剂)以醚键相互交联而形成具有三维空间多孔网状构造的高分子化合物。交联葡86–2)。交联度越大，网状构造越严密，孔径越小，吸水膨胀就愈小，故只能分别相对分子质量较小的物质;而交联度g10SephadexG–25SephadexG–25G–50LH交联葡聚糖凝胶在水溶液、盐溶液、碱溶液、弱酸溶液和有机溶剂中较稳定，10期保存，应参加适量防腐剂，如氯仿、叠氮钠等，以免微生物生长。交联葡聚糖凝胶由于有羧基基团，故能与分别物质中的电荷基团(如碱性蛋白质)发生吸附作用，但可借助提高洗脱液的离子强度得以抑制。因此在进展凝胶层NaCl蛋白质的相对分子质量。1.凝胶处理交联葡聚糖及聚丙烯酰胺凝胶的市售商品多为枯燥颗粒，使用前必需充分溶5,106–2细菌，同时排解气泡。2(凝胶柱制备1:25,1:100。凝胶柱的装填方法和要求，根本上与离子交换柱的制备一样。一根抱负的凝胶柱要求柱中的填料(凝胶)密度均匀一20002g/L观看色带是否均匀下移，以鉴定装柱的技术质量是否合格，否则，必需重装填。3(加样与洗脱床体积小，加样量可小;否则，加样量增大。例如利用凝胶层析分别蛋白质时，假设28Onm2cm×6Ocm5mg高。通常样品液的参加量应把握在凝胶床总体积的5,,10,。样品体积过大，分离效果不好。对高区分率的分子筛层析，样品溶液的体积主要由内水体积(Vi)所打算，故高mL0.3,0.5mg0.O2倍总体积;而低吸水量凝胶如SephadexG–75，每mL总床体积加溶质质量0.2mg，0.Ol加样方法如同离子交换柱层析一样，凝胶床经平衡后，吸去上层液体，待mL洗管壁。然后连续用大量洗脱液洗脱。洗脱加完样品后，将层析床与洗脱液储瓶、检测仪、分部收集器及记录仪mL。各组分可用适当的方法进展定性或定量分析。凝胶柱层析一般都以单一缓冲溶液或盐溶液作为洗脱液，有时甚至可用蒸馏方法进展。4.凝胶的再生和保存稍加平衡即可进展下一次的分析操作。但使用屡次

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