定性检验项目的质量控制

定性检验项目的质量控制

临床检验质量控制中心二级医院质控要求【C】建立和实施与检测项目相适应的室内质量控制流程，应包括：（1）质控品的技术规则定义。（2）质控品常规使用前的确认。（3）实施质控的频次。（4）质控品检测数据的适当分析方法。（5）质控规则的选定。（6）试验有效性判断的标准。（7）失控的判定标准、调查分析、处理和记录。2023/11/26三级医院质控要求【Ｃ】1．建立和实施与检测项目相适应的室内质量控制流程，应包括：（1）质控品的技术规则定义。（2）质控品常规使用前的确认。（3）实施质控的频次。（4）质控品检测数据的适当分析方法。（5）质控规则的选定。（6）试验有效性判断的标准。（7）失控的判定标准、调查分析、处理和记录。2023/11/26临床定性检验的报告方式有反应、无反应阳性、阴性检出、未检出是、不是有、没有定性试验完全定性实验：只有两种检测结果（例如：阳性/阴性、存在/不存在、有反应的/无反应的）的方法免疫定性试验：例如：尿液HCG、感染标志物、大便隐血（免疫法），梅毒凝胶颗粒凝集试验（TPPA）。其他定性试验：例如：大便隐血（化学法）、革兰氏染色质量控制（金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌）、微生物凝固酶和过氧化氢酶，阴道分泌物过氧化氢、白细胞酯酶、唾液酸酶等。定性试验半定量定性试验：结果报告为阴性、+1、+2、+3、+4或滴度（1:8、1:16等）的方法半定量免疫试验：例如抗核抗体（ANA）滴度报告、血型抗血清、微生物诊断性抗血清、梅毒快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）检测等。其他半定量试验：如尿液干化学试验弱阳性标本阴性标本重点在于弱阳性检测能力确保阴性检为阴性常见的定性实验：ELISA实验包被Ab层析作用质控线必须稳定显色包被Au-Ag样本Ab包被AgAu-Ag-Ab-AgGTCAu-Ag-AbAu-Ag-Ab游离Au-Ag游离Au-Ag常见的定性实验：金免疫层析试验

（goldimmunochromatographicassay,GICA)操作控制：早孕胶体金法检测步骤１:从包装铝箔袋中取出试纸条步骤２:将试纸条按箭头方向插入尿液标本中步骤３:至少5秒后取出放于干净平台上或放在尿杯中读结果。测试结果应在3分钟读取.用前拆封，必要时平衡温度保持规定的深度、角度、姿态保持规定的放置方向、姿态、时间FDA等批准家庭使用的技术，只要求检测装置有内对照，检测结果满足说明书规定即可。对于需要经验来判定结果的技术仍需在实验室进行，均有质控的要求，但国际上无具体操作的规定和资料。

美国CDC“HIV抗体快速检测质量保证指南”<2007年版>中要求：除检测装置的内对照外，每检测日或分析批，应使用弱阳性和阴性外对照作为质控。

无判定标准，一般理解为阴、阳性质控的检测结果分别为阴性和阳性即表明在控，相反则为失控。电子质量控制电子QC是指在仪器上用电子检查代替液体控制品检测，由传感器发出的信号被一种电学信号取代；那些具备电极传感器的仪器，其来自电池（或其他稳定的电源）的电学信号可取代来自传感器的信号，这种电学信号可判断该仪器取得的读数是否正确；简单、快速、低成本、无需消耗任何检测包或实际；直接给出结论：“Yes”或“No”；仅需很少的培训，无需统计学知识；早有应用：光电检查、滤光器平衡检查、反应杯检查、空白检查、电压检查等；一般与SQC合并使用，单独使用应慎重！！必须在一定时间内在2～8℃或冷冻保存条件下保持稳定。无已知的传染危险性。靶值或预期结果可定。单批可大量获得。价廉。质控品要求自行配制质控品需参照标准或经验证的方法特殊例如：核酸检测质量控制特殊要求实验室分区和环境仪器设备质量控制试剂质量控制检测过程质量控制质控基础：了解质控的共性与个性要求丙型肝炎病毒实验室检测技术规范（中国疾病预防控制中心）——规定了方法学及质量控制《全国艾滋病检测技术规范》（2015年修订版）规定了方法学及质量控制（酶免或发光法抗体检测的室内质量控制；快速法抗体检测质控）临床定性免疫检验重要常规项目分析质量要求（征求意见稿）——李金明质控基础：了解法律、法规、规范和共识等《临床血液学检验常规项目分析质量要求》（WS/T406--2012）——许多检测项目可以参照此标准《丙型病毒性肝炎筛查及管理》（WS/T453--2014）规定了丙型病毒性肝炎筛查的方法学《梅毒诊断标准》（WS273--2007）规定了方法学——1995年《梅毒诊断标准及处理原则》废止质控基础：了解法律、法规、规范和共识等检验结果的干扰因素几乎涉及所有与实验有关的环节我们认为不可能的常常成为可能，比如：质控基础：了解室内质控的复杂性关键环节：加样

平口、斜口（斜口略多）；

向上、向下（向下则多）；

垂直、倾斜（垂直则多）；

口大、口小（口大则多）；

快速、慢速（快速则多）。

加样量的差异

加样时间的不一致

样本与试剂（如酶标抗体）先后加入

……检测全过程QC何为全过程？？分析前分析或检测分析后没有一种质控方法可以监测全过程！！培训和教育是非常重要的分析前质控！！质控方案：ELISA质控阴、阳对照是内对照，用来保证实验有效和计算临界值，室内质控必须引入外对照（外部质控物）。ELISA定性试验的临床意义在于是给出阴性或阳性，与检出量无关，因此质量控制的重点是保证试验的灵敏度和重复性。质控品选择：阴性质控品/临界值质控/弱阳性质控品/阳性质控品/强阳性质控品（HOOK效应）。质控物：阴性和弱阳性外对照质控频度：检测日或分析批为单位质控判断：阴、阳性质控物的检测结果分别为阴性和阳性即表明在控。质控方案：胶体金免疫层析质控准确度与精密度关系准确度是由系统误差和随即误差所决定的而精密度是由随机误差决定的在检测过程中，虽然有很高的精密度，但并不能说明试验结果准确只有在消除了系统误差之后，精密度和准确度才是一致的。此时精密度越高，准确度也就越高EQA主要是提高实验室的准确度，而IQC是对精密度的体现，两者相辅相成，只有共同符合要求，才能真正地达到实验室间结果一致化，最终实现结果互认。精密度差（检测系统不稳定）精密度好（检测系统稳定）正确度差（实验室间结果有偏差）精密度好（检测系统稳定）正确度好（实验室间结果一致）过程监测即时评价结果控制室内质量控制(IQC)设定检测系统的均值及质控规则→每日检测质控品→检测结果根据均值和质控规则以质控图的形式表现（包括失控处理）→控制系统的稳定性常见室内质控方法1、非统计学方法2、统计学方法室内质控以批为单位

——批（RUN）的概念批：在相同的条件下（地点、仪器、试剂、人员、时间）所进行的一组测定。一、非统计学质控方法

（金标法血清学实验、ELISA实验等）在检测临床标本的同时，检测一定数量（与临床样本的数量相适应）的已知阳性（或存在靶微生物或靶细胞）和阴性的质控样本。检测有效的质控判断方法：阳性检测为阳性，阴性检测为阴性。如基层实验室的金标法查乙肝表面抗原、HCG等反应强度（滴度）质控方法。检测有效的质控判断方法：一般为预期值±1+。如尿液干化学实验的蛋白质结果（-→1+→4+）双重反应室内质量控制质控图定性检测质控图（血清学实验、尿液干化学、ELISA实验等）仪器、仪器编号、检验项目、质控品批号、效期等质控图相关信息记录区（参考定量质控图）+++++++靶值+++±检测批次12345678910111213……结果+++++++++++++++++++++++++++日期1346789111213171718检测者***************************************图注：①实际工作中可以绘制更多质控结果；②可以依据自身工作需要编排图形格式。定性检测质控记录表仪器、仪器编号、检测项目、质控品批号、效期等质控图相关信息记录区（参考定量质控图）日期检测批次试剂批号质控靶值检测结果质控结论操作者日期检测批次试剂批号质控靶值检测结果质控结论操作者11***2+2+

在控□失控***910***2+2+

在控□失控***12***2+2+

在控□失控***1011***2+2+

在控□失控***23***2+2+

在控□失控***1012***2+3+

在控□失控***34***2++

在控□失控***1113***2+2+

在控□失控***45***2+2+

在控□失控***1214***2+2+

在控□失控***56***2+3+

在控□失控***1315***2++

在控□失控***67***2+2+

在控□失控***1416***2+2+

在控□失控***78***2+2+

在控□失控***1517***2+2+

在控□失控***89***2+2+

在控□失控***1618***2+2+

在控□失控***Levey-Jennings质控图方法也称Shewhart质控图，是由美国的Shewhart于1924年首先提出，并用于工业产品的质量控制。二十世纪五十年代初，Levey-Jennings将其引入临床检验的质量控制。经Henry和Segalove的改良，即为目前常用的Levey-Jennings质控图。二、统计学质控方法（ELISA实验等）正态分布、标准差和可能性+/-1SD68.2%ofthetime+/-2SD95.5%ofthetime+/-3SD99.7%ofthetime68.2%95.5%99.7%Frequency-3s-2s-1sMean+1s+2s+3s正态分布情况下，数值集中范围如下:ELISA实验每块板质控物的数量及位置2-3份弱阳性质控2-3份阴性质控随机放置于血液本中间外部质控品：阴性质控品/临界值质控/弱阳性质控品/阳性质控品/强阳性质控品（识别HOOK效应）ELISA实验统计学质控的参考意见系统误差的失控规则可以选用41s和/或10x，也就是要求质控图始终保留20个点以上的原因。阴、阳性质控物的测定值均应在质控图中标出：阳性重点是下限，阴性重点是上限，这样的单个超限判为失控；阴、阳性同时上限或同时下限超限判为失控；阳性上限超限而阴性未超或阴性下限超限而阳性未超,可以视为不失控。理论上可选择S/CO值的均值-3SD时等于或略高于“判断值”这样的质控品，以保证用这一浓度质控品时，有99.7%的把握无阴性发生的可能。S/CO:1.5～4.0或2.0～4.0为宜Levey-Jennings质控图以结果画图+4S+3S+2S+1SX-1S-2S-3S-4SS/CO≥1.0批间CV与浓度关系：批间CV的大小决定弱阳性质控物浓度的选择。CVS/CO临界值质控质控品均值质控品的分析至少需要来自于30天以上的20个数据确保所有程序上的变异因素都得以实质体现:操作者差异时间差异计算均值，标准差，变异系数，确定控制范围建立并绘制Levey-Jennings质控图检测批HBsAgHCVAbHIVAbTPAbRBCHb12.252.143.923.775.3313521.902.203.374.095.2613432.382.343.783.795.3913342.182.273.893.605.2913452.263.123.243.895.3113362.282.443.633.635.4413271.772.563.554.115.2813481.822.423.423.935.2813192.062.663.583.585.29133102.572.483.353.695.31135112.282.883.603.445.26135122.672.333.163.875.43133132.612.653.333.295.32131142.302.453.413.785.30133152.232.403.563.795.31134162.282.143.343.345.30133172.492.313.233.925.33136182.022.493.203.355.35132192.302.193.543.205.36133202.482.593.123.665.33133212.202.183.763.305.22135S0.2430.2480.2350.2670.0541.3262.252.443.483.675.32133.43CV(%)10.7710.156.757.271.010.99血红蛋白室内质量控制图表面抗原室内质量控制图基于日常检验的阳性率比值(呈正态分布)直接概率计算方法（不呈正态分布）“假阳性”的统计学室内质控方法图例：定性免疫测定“假阳性”监测质控图图例：定性免疫测定假阳性监测质控图的绘制及应用直接概率计算法直接概率法是针对在每次日常检测的阳性率比值不成正态分布，即非正态分布的情况下，直接计算出某一事件发生的概率。依据统计概率学，小概率事件就是对于某事件发生概率<5%时，也就是说发生的可能性非常小。当有一个小概率事件发生时，应需要进行分析调查事件发生的原因，因为很有可能存在误差。计算在N个患者样本中出现R个阳性结果的概率，检测项目结果中的阳性率用P进行表示。概率计算的二项式分布公式:P(X=R)=N!/[R!(N-R)!]PR(1-P)N-R。在血液筛查检测中，对于那些检测项目中阳性结果率低(如抗HIV、抗HCV)，但检测标本量又十分庞大，虽然可以使用上述模式进行计算，但还可以使用泊松分布来估算，泊松分布是一种相较于上述模式计算更为简便的方法。泊松分布的概率计算公式是:P(X=R)=(NP)Re-NP/R!。邻近标本污染的情况计算概率，即相互交叉污染的概率。对于阳性检测结果中以连续性形式出现时，也就是有可能阳性样本污染了它邻近的阴性样本，所产生的标本间的交叉污染，实验检测标本数用N表示，阳性连续出现的次数用R表示，这种情况的概率计算公式是：P=(N-R+1)/[N!/R!(N-R)!]。直接概率计算法失控后分析失控后分析是室内质控的最关键环节，如果没有对失控进行分析和处理，室内质控就毫无意义！定量系统误差的识别预期值+4S+3S+2S+1SX-1S-2S-3S-4S定量系统误差的识别预期值+4S+3S+2S+1SX-1S-2S-3S-4S产生系统误差的因素恒温系统温度偏倚或漂移实验场地室温或湿度不合适试剂或校准品批号更换试剂在使用、储存或运送过程中变质校准品在使用、储存或运送过程中变质控制品在使用、储存或运送过程中变质控制品处理不当，如：不要求冰冻的却冰冻了光源坏检测系统使用非试剂级用水近期做过校准更换操作人员固定系统误差…………..比例系统误差…………..固定系统误差比例系统误差无误差随机误差的识别预期值+4S+3S+2S+1SX-1S-2S-3S-4S产生随机误差的因素(也许不可接受)电源（在一定范围内可以接受）控制品的重复加样（不可接受，但控制品的加样误差是存在的）控制品编号错误（不可接受）水中产生气泡（不可接受）试剂或样品加样系统内有气泡（不可接受）控制品复溶不正确（不可接受，但复溶过程的误差是存在的）控制品储存于自动化霜冰箱内（不可接受，尽量密封存储）操作人员技术水平（在一定范围内可以接受）ELISA阳性质控样本失控的常见原因污染温育时