黄芪提取液对肠道内益生菌促生作用的研究

黄芪提取液对肠道内益生菌促生作用的研究

黄鼠尾是一种常用的中药，具有多种疗效。金若敏等通过口服给药,观察了黄芪毛状根对D-半乳糖所致衰老小鼠记忆力的影响及抗氧化作用;制备大鼠肾缺血再灌注模型,测定黄芪毛状根对肾组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响;测定环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠口服黄芪毛状根后NK细胞活性。结果表明,黄芪毛状根具有抗衰老、抗过氧化及免疫调节作用。陈琦、孙云等用毛花黄芪提取液给衰老小鼠模型连续给药,观察对衰老小鼠抗氧化功能和免疫功能的影响,得到毛花黄芪提取液可以增强小鼠的抗氧化能力。付荣、朱蓓薇用乙醇提取黄芪中的抗氧化物质,并采用二苯代苦味酰基自由基分光光度法(DPPH法)测定黄芪提取液的抗氧化性。结果表明,黄芪提取液对二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)有很好的清除作用,因此黄芪具有清除自由基的作用。人和动物的肠道粘膜已定居着大量各类的细菌。这些菌群中,有益菌群与有害致病菌协调并存又相互制约,形成复杂而又稳定的微生态环境在有益菌群中,乳酸菌占绝大多数,它们中的大部分属、种都可以粘附于肠上皮细胞表面,在提供营养、降解有毒物质、激活免疫应答等方面发挥着重要作用。李平兰等采用乳酸菌培养基中加入五味子、枸杞、地黄提取液来培养乳酸菌,并与未加入提取液的培养基培养的乳酸菌作对照,得到了五味子、枸杞、地黄三种中药的提取液对乳酸菌有一定的益生作用。关于中药黄芪对益生菌的促生作用未见报道,本实验采用内蒙古呼和浩特市药材公司提供的黄芪为原料,提取其有效成分,用保加利亚乳杆菌、乳酸链球菌和三种混合乳酸菌(保加利亚乳酸杆菌,双歧杆菌和嗜热乳酸链球菌)的体外生长情况对其进行研究,确定黄芪提取液对益生菌的促生作用。这对于服用黄芪来改善肠道内益生菌的生长状况,增加肠道内益生菌的定殖数量以及延缓机体衰老,都具有重要的意义。1材料和方法1.1材料和机器1.1.1培养基和培养液黄芪,内蒙古呼和浩特市药材公司提供;保加利亚乳酸杆菌,大连轻工业学院食品教研室提供;乳酸链球菌,大连阿蒙德乳品有限公司提供;混合乳酸菌(保加利亚乳酸杆菌、乳酸链球菌、双歧杆菌),大连阿蒙德乳品有限公司提供。1.1.2仪器、设备与测试设备旋转蒸发器(RE-52AA),上海亚荣生化仪器厂;生物洁净工作台(BCN-1360B),北京东联哈尔仪器制造有限公司;不锈钢手提式压力蒸汽灭菌锅(YXQ-SG46-280S),上海博讯实业有限公司医疗设备厂;分光光度计(722S),上海精密科学仪器有限公司;数字电热培养箱(303-3A),上海阳光实验仪器有限公司。1.2实验方法1.2.1馏水制备工艺称取黄芪100g,30℃鼓风干燥,磨碎,加入2L蒸馏水中,浸泡2h,100℃煎煮30min,过滤,残渣用2L水100℃煎煮30min,过滤,浓缩至100mL,115℃,灭菌15min,冰箱中保藏待用。1.2.2mns,khp,分离MRS培养基:蛋白胨1%,葡萄糖2%,醋酸钠0.5%,MnSO40.005%,肉浸膏1%,吐温800.1%,柠檬酸二铵0.2%,K2HPO40.2%,酵母浸膏0.5%,MgSO40.002%,琼脂2%,蒸馏水。1.2.3稀释菌液的制备0.5%L-半胱氨酸盐酸盐0.5mL,酵母粉0.5g,吐温801mL,蒸馏水1000mL。1.2.4发酵液培养。在培养基中,其充将菌种(保加利亚乳酸杆菌、乳酸链球菌、三种混合乳酸菌)接入MRS液体培养基中,37℃培养箱中培养24h,将此发酵液以1%量接入MRS液体培养基中,37℃培养箱中培养24h,再将此发酵液以1%的量接入MRS液体培养基中,37℃培养箱培养24h,取出于0℃冰箱中保藏。1.2.5010101010101010101010101010101010101010.10.7%的甲基苯磺酸酯od400、5.4.7、10101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010101010MRS液体培养基用旋转蒸发器浓缩至一半,分别加入黄芪浓缩液配成黄芪浓度为0、1、2、5、8、10μg/mL的液体培养液,接入活化三代的菌种,37℃培养箱中培养48h,平行三组,取出后稀释10倍,测OD600与不加黄芪的培养基作空白对照。2结果与讨论2.1保乳酸杆菌的生长采用1.2.1中黄芪提取液的制备方法,将保加利亚乳酸杆菌接入MRS培养基中按1.2.5中的方法进行培养,实验结果如图1。由图1可以看出保加利亚乳酸杆菌的OD值随黄芪提取液浓度的增大而增大,黄芪提取液浓度达到8μg/mL以后,OD值增长缓慢,最大OD值与空白OD值相差0.87。说明黄芪提取液对保加利亚乳酸杆菌有促生作用。2.2乳酸球形的培养采用1.2.1中的黄芪提取液的制备方法,将乳酸链球菌接入MRS培养基中,按1.2.5中的方法培养,实验结果如图2。由图2可以看出乳酸链球菌的OD值随黄芪提取液浓度的增大而增大,黄芪提取液浓度达到8μg/mL以后,OD值增长缓慢,最大OD值与空白OD值相差0.71。说明黄芪提取液对乳酸链球菌有促生作用。2.3保乳酸杆菌、乳酸链球菌、白砂糖od值的比较采用1.2.1中的黄芪提取液的制备方法,将三种菌接入MRS培养基中,按1.2.5中的方法培养,实验结果如图3。由图3可以看出三种混合菌的OD值随黄芪提取液浓度的增大而增大,黄芪提取液浓度达到8μg/mL以后,OD值增长缓慢,最大OD值与空白OD值相差0.865。说明黄芪提取液对三种混合乳酸菌有促生作用。由以上结果得出,最大与空白OD差值的大小顺序为:保加利亚乳酸杆菌>三种混合乳酸菌>乳酸链球菌。由于本实验采用的是水浸提的方法提取黄芪中有效成分,而黄芪多糖又易溶于水,因此认为黄芪多糖对乳酸菌起到促生作用,又有相关文献报道多糖对乳酸菌生长能起