高危型人乳头瘤病毒载量与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌程度的相关性研究

高危型人乳头瘤病毒载量与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌程度的相关性研究

高危人类乳头瘤病毒（h-rp）是宫颈和癌前病变的主要原因，并影响预后。国外根据致癌潜能将HPV分为低危型人乳头瘤病毒(LR-HPV)和高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV),并指出HPV感染率随宫颈病变程度的加重而上升。HR-HPV病毒载量与宫颈病变的严重程度成正相关。本研究通过第2代杂并捕获实验(HC-Ⅱ)半定量方法检测HR-HPV病毒载量,探讨其与宫颈病变进展的关系,以及HR-HPV病毒载量检测的意义。1数据和方法1.1病例年龄分布纳入2006年1月-2011年8月因宫颈病变行阴道镜活检或手术治疗的1248例患者,年龄20~78(41.8±10.0)岁。其中145例为宫颈癌患者,鳞癌130例,腺癌15例。根据宫颈病理及临床分期将宫颈病变患者分为5组:宫颈炎(n=525)、宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ组(n=130)、CINⅡ-Ⅲ组(n=448)、宫颈癌Ⅰ期(n=95)和宫颈癌Ⅱ期(n=50),最终以组织病理学诊断为金标准,在治疗前均采用HC-Ⅱ方法定量检测宫颈HR-HPVDNA含量。1.2强调cin治疗后的临床表现阴道镜检查的指征包括:(1)细胞学结果异常,宫颈液基薄层细胞学(TCT)检测,该系统诊断标准包括:正常或良性细胞病变(WNL),未明确诊断的不典型鳞状上皮细胞(ASCUS),低度上皮内瘤变(LSIL),高度上皮内瘤变(HSIL),鳞状上皮细胞癌(SCC),腺癌(AC)。其中,ASCUS及以上病变为细胞学异常;(2)HR-HPVDNA检测阳性;(3)临床可疑病史或体征如接触性出血、异常阴道排液,宫颈外观异常如宫颈假性糜烂(宫颈柱状上皮移位或不对称糜烂)、息肉、白斑、湿疣或可疑癌等;(4)CIN治疗后随诊及动态观察宫颈、阴道和外阴病变。阴道镜检查,在异常部位或肉眼观可疑区多点活检,若细胞学为高度上皮内病变,同时做颈管内膜刮取术。如未发现病变,则于3、6、9、12点位置取活检,标本送组织学检查。1.4病毒载量检测采用美国Digene公司的HC-ⅡHPV检测试剂盒检测标本中的HPVDNA含量,检测探针包括13种高危型HPVDNA亚型(即HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68),单位为RLU/CO。RLU(relativelightunits)为相对光单位,是待测样本的光强度与阳性对照的比值;CO(cutoff)为阳性对照的临界值,是3个阳性对照反应强度的平均值。以RLU/CO比值≥1.0为阳性,RLU/CO比值<1.0为阴性。将HR-HPV按病毒载量高低分为0~0.99,1.00~9.99,10.00~99.99,100.00~999.99,1000.00~5组。对于94例宫颈鳞癌ⅠB-Ⅱ期患者则根据HR-HPV病毒载量分为两组:HPV<100载量组(n=34)和HPV≥100载量组(n=60),对HR-HPV病毒载量分级与宫颈病变的相关性进行分析。1.5妊娠合并妊娠期各分期受检者宫颈细胞按异型的程度和范围依次分为宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ、宫颈癌Ⅰ期、宫颈癌Ⅱ期。根据受检者手术后病理结果分为低分化癌、中分化癌、高分化癌。1.6结构方差分析数据采用SPSS10.0软件进行分析。计量资料以表示,服从正态分布时组间比较采用多因素方差分析;计数资料以%表示,组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1pv的感染率1248例患者中,宫颈癌患者145例,包括鳞癌130例、腺癌15例。高分化癌4例,中分化癌58例,低分化癌44例,另外39例宫颈癌患者病理结果未显示分化程度。病理诊断为宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ、宫颈癌Ⅰ期、宫颈癌Ⅱ期的HPV感染率分别为52.8%、82.3%、94.6%、95.8%和90%,基本呈递增趋势。不同宫颈病变程度的HPV病毒载量差异有统计学意义(P<0.05),CIN和宫颈癌患者HPV病毒载量显著高于宫颈炎患者(P<0.05),而CINⅠ、宫颈癌Ⅰ期HPV病毒载量高于CINⅡ-Ⅲ患者(P<0.05,表1)。2.2hr-pv载量与妊娠合并患者cin-及妊娠期发生率的关系以宫颈炎为阴性对照,CIN及宫颈癌的HPV各级别病毒载量分布为:当HR-HPV载量在1.00~9.99及10.00~99.99分布,时各组间差异无统计学意义(P>0.05);当HR-HPV载量在100.00~999.99分布时,CINⅡ-Ⅲ发生率高于CINⅠ及宫颈癌Ⅰ期(P<0.05);HR-HPV载量在1000.00~分布时,CINⅠ及宫颈癌Ⅰ期发生率高于CINⅡ-Ⅲ(P<0.05),即HPV病毒载量不随宫颈病变程度加重而上升(表2),HR-HPV病毒载量与宫颈病变病理分级无正相关。当HR-HPV载量在100.00~999.99及1000.00~分布时,CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ、宫颈癌Ⅰ期及宫颈癌Ⅱ期较宫颈炎的危险度增加,CINⅠ组OR值分别为1.62、4.09;CINⅡ-Ⅲ组OR值分别为3.67、3.08;宫颈癌Ⅰ期组OR值分别为2.45、5.26;宫颈癌Ⅱ期组OR值分别为2.53、3.51(表3)。2.3最大直径4cm的危险度当HPV病毒载量≥100时,淋巴结转移的危险度增大(P<0.05,OR=2.9);肿瘤最大直径≥4cm的危险度增大(P<0.05,OR=2.92)。当HPV病毒载量≥100时,患者年龄、组织学分化程度、宫颈肌层癌浸润深度及淋巴管癌栓都有不同程度增加,但差异无统计学意义(P>0.05,表4)。3pv与妊娠预后宫颈癌常发生于子宫颈鳞状上皮或腺上皮部位,发生率占我国女性生殖系统恶性肿瘤的首位,早期宫颈癌的治愈率在90%以上,晚期则疗效明显下降。因此,如何早期发现宫颈癌是提高治愈率的关键。持续感染高危型HPV是导致宫颈癌和癌前病变的主要病因,尤其是HPV16类型的持续感染。以往研究表明HPV感染与宫颈癌的发生、发展密切相关。许多文献报道在CIN尤其是CINⅡ、CINⅢ的筛查中,HPV检测比宫颈细胞学检查具有更高的敏感性。HPV应该在婚后3年进行筛查,HPV检测已成为宫颈癌普查初筛的重要手段。HC-Ⅱ作为HPV-DNA负荷半定量测定方法,已被美国FDA批准并广泛应用,RLU与阳性对照平均值的比值≥1为阳性,此方法具有高度敏感性、客观性、可重复性,因简单易操作被广泛用于临床。Saunier等采用实时定量PCR方法检测了173份HPV16阳性宫颈标本中的病毒载量,预测当HPV16DNA在103个细胞中有22000拷贝数时即可作为预测高级别宫颈病变的指标之一。Wu等研究发现,HPV病毒载量与宫颈病变程度明显相关,病毒载量越高,宫颈病变加重的风险越大。近来研究发现HPV病毒载量可以作为区分宫颈是否存在严重病变的一种方法。然而也有发现HPVDNA病毒载量与宫颈病变程度无显著相关性的报道。因此,HC-Ⅱ检测HPV病毒载量与宫颈病变严重程度之间的关系尚存争议。在本研究中,CINⅠ和宫颈癌Ⅰ期的病毒载量高于CINⅡ-Ⅲ,分析认为CINⅠ时期正处于HPV病毒感染的急性期,HPVDNA作为游离基因出现在宿主细胞内,进行自我复制并产生新的病毒颗粒,此时HPV自我复制能力最强。而当CINⅠ转变为CINⅡ-Ⅲ时病毒载量降低,表明HPV的自我复制可能达到稳定期。从CINⅡ-Ⅲ转变成宫颈癌Ⅰ期的过程中,HPV基因整合到宿主细胞DNA上,具备了转化细胞的潜力,是CIN向微小浸润癌转化过程中的关键机制。一旦出现HPV基因整合,用HC-Ⅱ方法不易检出HPV病毒,这与HPV病毒载量在宫颈癌Ⅰ期的增多不相符,因为HPV16整合只占所有宫颈癌的72%,证明宫颈癌的发生尚存在其他相关致病机制。周瑾等报道新疆地区宫颈癌的高发可能与HPV16E6基因突变有关。我们将HR-HPV按病毒载量高低分为0~0.99、1.00~9.99、10.00~99.99、100.00~999.99、1000.00~5组,当HR-HPV病毒载量≥100RLU/CO时,CIN及宫颈癌的发生危险度基本随病毒载量的增加而增加。然而,宫颈癌前病变与HR-HPV病毒载量之间的关系却与此不同,可能原因是我们研究的样本量是13种高危型HPV的病毒载量,而先前的研究仅仅强调HPV16病毒载量与宫颈病变严重程度相关。Park等报道HR-HPV病毒载量≥100RLU/CO时,HPV持续感染及复发率明显增强。Baser等和Bakhidze等报道,淋巴结HPV阳性与宫颈癌淋巴结转移密切相关,并且可能影响宫颈癌的预后。而我们的研究证实,HR-HPV病毒载量≥100RLU/CO是影响宫颈癌预后的关键因素,当HPV病毒载量≥100RLU/CO时,宫颈鳞癌IB-Ⅱ期患者发生淋巴结转移及肿瘤直径≥4cm的危险性增大。表明HPV病毒载量与宫颈鳞癌淋巴结转移有关,但因病例数较少,需要进一步的探索及实验研究证明。综上所述,通过对宫颈炎、CINⅠ、