DB15-T 3185-2023 山药根尖染色体制片和核型分析技术规程

65.020.01CCS

B

0115 DB15/T

3185—2023山药根尖染色体制片和核型分析技术规程Technical

for

preparation

and

karyotype

analysis

inroot

tip

of

yam2023-10-30

发布 2023-11-30

实施内蒙古自治区市场监督管理局 发

布DB15/T

3185—2023 本文件按照GB/T

1.1—2020《标准化工作导则

第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（

20）归口。本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古自治区农牧业科学院、鄂尔多斯市农牧业科学研究院、巴彦淖尔市农牧业科学研究院所。本文件主要起草人：霍秀文、张艳芳、郭树春、菅志亮、刘小燕、张晓蒙、张勇、邵盈、赵令敏、乔慧蕾、邢丽南、葛明然、黄小龙。DB15/T

3185—20231 范围本文规定了山药根尖染色体制片的试剂溶液配制、制片方法以及核型分析方法。本文件适用于山药根尖染色体玻片制备和核型分析。2 规范性引用文件文件。DB15/T

2788 向日葵根尖染色体制片和核型分析技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。着丝粒 centromere染色体主缢痕部位的染色质，是染色体中将两条姐妹染色单体结合起来的区域。核型 karyotype染色体组在有丝分裂中期的表型，是染色体数目、大小、形态特征的总和。随体satellite色质组成，含高度重复的

DNA

序列，不具有常染色质的功能活性。染色体核型分析

对染色体进行分组、比较、排队、配对，并进行形态分析的过程。4 试剂配制本文件用到的试剂参见附录

A

。DB15/T

3185—20235 染色体标本的制备样本的获取

2

度

60%，光照强度

3000

的培养室中培养生根。预处理剪取

cm～1

cm的根尖材料自来水冲洗后，置于羟基喹啉预处理液中14

℃处理1

h。固定将预处理的根尖蒸馏水冲洗后放入卡诺固定液中4

℃固定24

h。前低渗将固定后的根尖蒸馏水冲洗后置于0.075

mol/L氯化钾溶液中，室温处理30

。解离将低渗处理后的根尖蒸馏水冲洗后置于0.25

mol/L的盐酸溶液37

℃水浴12

。再蒸馏水冲洗min后用乙酸-乙酸钠缓冲液浸泡4

3%纤维素酶和果胶酶酶解液37

℃水浴18

。后低渗室温条件下蒸馏水后低渗处理30

min以上。染色压片将处理后的根尖置于干净的载玻片，滴改良卡宝品红染液染色2

。盖上盖玻片轻压。镜检及图像采集在100倍的显微镜下观察中期分裂相，对染色体充分分散的分裂相进行拍照。6 染色体核型分析分析方法取30个以上中期分裂相进行染色体计数。选择背景清晰、染色体形态清晰的5个细胞进行染色体长BStebbins的标准划分见附录BB.3。测量图像相关指标测量使用光学显微图像处理，测量方法参见附录A。Excel

计算对每个细胞分别计算每条染色体的臂比和绝对长度总长，并列出着丝粒位置类别。同源染色体配对及排列按染色体形态大小和着丝粒位置进行染色体配对，方法见附录B。DB15/T

3185—2023核型模式图绘制分析方法按照DB15/T

2788的规定。使用染色体分析软件进行染色体核型图的制作，运用Microsoft

Excel制作核型模式图；结果见附录B。0.002

0.29

1000

15

60

1000

mL

0.01

1000

mL0.075

5.59

1000

83

1000

(pH=4.75)

mL

mL

R-100.1

Y-23

mL表A.1表A.1

试剂及配置方法DB15/T

3185—2023

附录 A（资料性）染色体长度测量步骤及本技术规程用到的试剂和配置方法A.1 染色体长度测量步骤A.1.1 扫描修整图像用

OLYMPUS

BX

51

显微镜观察染色体制片，在

×物镜下对染色体充分分散的中期分裂相进行拍照。对河南铁棍山药材料取

40

个中期分裂相进行染色体计数。选择背景清晰、染色体形态清晰的

5

个细胞进行拍照，图像采集使用奥特光学显微图像处理系统

OPTPro

2008v2.0

完成。A.1.2 整理同源染色体并测量选择染色体形态清晰的

5

个细胞进行染色体长度的测量。按染色体形态大小和着丝粒位置进行染色体配对。使用软件中“图像测量”菜单里“直线”或“曲线”测量工具测量染色体长臂、短臂及随体的绝对长度。对每个细胞分别计算每条染色体的臂比和绝对长度总长，并列出着丝粒位置类别，由此进行同源染色体的配对。对每个细胞配对后计算每对同源染色体的长臂、短臂平均值，得到这个细胞的长臂值、短臂值。对细胞的长臂值、短臂值再对应地求平均值。得到该材料的长臂值、短臂值。由该材料的长短臂值，计算染色体总长并做记录，由此进行染色体排序。各指标的测量使用奥特光学显微图像处理系统

完成。核型不对称系数的计算按照

ARANO

的方法，即核型不对称系数=长臂总长/全组染色体总长。相对长度指数(indexof

relativelength)

的方法计算并对染色体进行分类，即

IRL=染色体长度/全组染色体平均长度。A.2 染色体参数计算按染色体形态大小和着丝粒位置进行染色体配对，并根据染色体臂长计算出染色体绝对长度、相对长度和臂比等核型参数。使用

VideoTesT-Karyo

染色体分析软件进行染色体核型图的制作，运用Microsoft

office

制作核型模式图。A.3 试剂及配置方法试剂及配置方法见表

A.1。

mL

mL55

mL

10

DB15/T

3185—2023表A.1试剂及配置方法（续）m)(%)(sat)1.001.01-1.701.71-3.00sm3.01-7.00st7.01

(L/S)>2:

0.00.01-0.50.51-0.991.00<21A2A3A4A1B2B3B4B>41C2C3C4C1-4M14-10M210-30DB15/T

3185—2023

附 录B（规范性）着丝粒位置B.1 着丝粒位置见表

B.1。表B.1

着丝粒位置B.2表B.1

着丝粒位置表B.