2022高三统考生物人教版一轮参考跟踪练：选修1、3

选修1生物技术实践

第34讲传统发酵技术的应用

.［课时…黑晟蕉惠」-----提能力、练规范、好题练全

IIA级•基础练II

一'选择题

1.下列关于制作果酒、果醋和腐乳的叙述，错误的是（）

A.在果酒发酵后期拧松瓶盖的间隔时间可延长

B.条件适宜时醋酸菌可将葡萄汁中的糖分解成醋酸

C.果酒发酵过程中发酵液密度会逐渐减小

D.将长满毛霉的豆腐装瓶腌制时，底层和近瓶口处需加大用盐量

解析：选D果酒发酵的后期，营养物质减少，酵母菌代谢减慢，产生的

C02量减少，可以间隔较长的时间再拧松瓶盖；糖源和氧气充足时，醋酸菌可以

将葡萄糖分解成醋酸，糖源不足时，则将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸；果

酒发酵过程中，葡萄糖分解会产生水，因此发酵液的密度逐渐减小；制作腐乳时,

在摆放豆腐的同时，应逐层加盐，随层数的加高而增加盐量，接近瓶口表面的盐

要铺厚一些。

2.

阀a脚b

通气管排气管

三百-葡萄汁

若利用如图所示的装置直接制作果醋，将葡萄汁放入已灭菌的发酵装置后,

下列做法不合理的是（）

A.加入适量的醋酸菌

B.一直打开阀a和阀b进行通气

C.严格进行无菌操作

D.把发酵装置放到15C的恒温箱中进行发酵

解析：选D醋酸菌产生醋酸时，最适宜的发酵温度是30〜35℃。

3.下列关于腐乳制作的叙述，错误的是（）

A.毛霉可利用其体内的酶将豆腐中的蛋白质分解成小分子肽和氨基酸

B.卤汤中酒的含量越高，杂菌繁殖越快，豆腐越易腐败

C.用盐腌制腐乳的过程中，要控制盐的用量，盐的浓度过高会影响口味，

过低则不足以抑制杂菌的生长，导致豆腐腐败

D.其制作过程可以表示为：让豆腐上长出毛霉一加盐腌制一加卤汤装瓶一

密封腌制

解析：选B卤汤中酒的含量过高，腐乳成熟的时间将会延长；卤汤中酒的

含量过低，杂菌繁殖快，可能导致豆腐腐败。

4.家庭制作果酒、果醋和腐乳三种传统发酵食品的共同点是()

A.菌种均可来自自然环境

B.均需在相同温度下进行发酵

C.均需在无氧环境下发酵

D.发酵过程中微生物的种群密度不断增大

解析：选A参与果酒制作的微生物是酵母菌，参与果醋制作的微生物是醋

酸菌，参与腐乳制作的微生物主要是毛霉，家庭制作果酒、果醋和腐乳的菌种均

可来自自然环境；果酒制作的适宜温度是18—25C,果醋制作的适宜温度是BO­

BS°C,腐乳制作的适宜温度是15〜18℃;参与果醋制作的醋酸菌是好氧菌，因

此果醋发酵过程是有氧条件；发酵过程中，微生物的种群密度先增大，后保持相

对稳定，最后减小。

二'非选择题

5.下面是果酒和果醋制作的实验流程和发酵装置。根据图示回答下列问题:

果醋果酒

图1果酒、果醋制作流程图2果酒、果醋制作装置

(1)完成图1中的实验流程。

(2)图2装置中的充气口在______过程中要关闭，否则可能发生使发酵

液变酸的反应____________________________________________________(写出该反

应式)，而排气口在该过程中应开放，排气口要通过一个长而弯曲的胶管与排气

管连接，目的是

⑶葡萄酒呈现红色的原因是

重铭酸钾在酸性条件下与酒精反应呈________色。

（4）果酒和果醋的制作分别利用了酵母菌和两种微生物的发酵原

理，后者在结构上的主要特点是

解析：在酒精发酵阶段，充气口应关闭，否则醋酸菌会将乙醇氧化为醋酸，

从而使发酵液变酸。酵母菌为真菌，属于真核生物，醋酸菌为细菌，属于原核生

物，两者在结构上的主要区别是有无以核膜为界限的细胞核。

答案：（1）醋酸发酵（2）酒精发酵C2H5OH+O2-CH3co0H+H2。避免

空气中其他微生物进入发酵装置（防止空气中的微生物污染）（3）红色葡萄皮中

的色素溶解在发酵液中灰绿（4）醋酸菌无以核膜为界限的细胞核

6.（2019届济南模拟）利用不同微生物的发酵作用制作食品，一般称为传统

发酵技术。回答下列问题：

（1）果酒发酵时酵母菌能在发酵液中生长繁殖，而其他绝大多数微生物则不

可以，原因是

（2）进行果醋深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌

死亡，醋酸菌的代谢类型属于________________型。

（3）腐乳制作时，从微生物培养的角度分析，豆腐相当于,

豆腐中的脂肪可作为微生物生长所需的o制作腐乳还要进行卤汤腌制，

卤汤由酒和香辛料配制而成，这些材料不仅可以调制腐乳的风味，还具有

的作用。卤汤中的酒可以选用料酒、黄酒、米酒、高

粱酒等，含量一般控制在左右。

（4）泡菜腌制时可利用法随时检测泡菜中亚硝酸盐的含量，原理是

在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应后再与N-1-蔡基乙二胺盐酸

盐结合呈现_______色。

解析：（1）酵母菌通过无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，使得发酵液呈现酸性，

在缺氧、呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长，而绝大多数其他微生物生长受到

抑制。（2）根据题意分析，醋酸发酵时，短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌

死亡，说明醋酸菌的代谢类型是异养需氧型。（3）腐乳制作时，从微生物培养的

角度分析，豆腐相当于固体培养基，豆腐中的脂肪可作为微生物生长所需的碳源。

制作腐乳还要进行卤汤腌制，卤汤由酒和香辛料配制而成，这些材料不仅可以调

制腐乳的风味，还具有抑制微生物生长的作用。卤汤中的酒含量一般控制在12%

左右。（4）检测泡菜腌制时产生的亚硝酸盐可以用比色法，即在盐酸酸化的条件

下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应后再与N-1-奈基乙二胺盐酸盐结合呈现玫瑰

红色。

答案：（1）在缺氧、呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长，而绝大多数其他

微生物生长受到抑制（2）异养需氧（3）固体培养基碳源（或碳源和能源）抑

制微生物生长12%（4）比色玫瑰红

7.蚕豆种子具有高蛋白、富淀粉、低脂肪等特点，蚕豆酱就是以脱壳蚕豆

为主要原料加工而成的传统发酵产品。我国生产蚕豆酱的历史悠久，蚕豆酱的自

然发酵中有米曲霉、黑曲霉、酵母菌、乳酸菌等共同参与，其中米曲霉、黑曲霉

是优势菌种。请回答下列问题：

（1）米曲霉、乳酸菌细胞结构的共同点是都具有等结构。

（2）若要获得米曲霉菌落并加以观察，则培养基中除需添加等

各类营养成分外，还需添加o

（3）米曲霉等分泌的可将原料中的大分子有机物水解成小分子

产物。大分子有机物在酵母菌、乳酸菌的作用下，产生_____________、有机酸、

酯类等，构成蚕豆酱特有的香气。

（4）下表表示探究温度对蚕豆酱发酵影响的实验结果:

氨基酸态感官得

温度（℃）总酸（％）还原糖含量（％）

氨分

前发酵40后发酵330.250.303.378.0

前发酵40后发酵370.290.354.948.2

前发酵45后发酵330.360.407.198.5

前发酵45后发酵370.430.589.389.5

根据上表结果可以确定，蚕豆酱发酵的适宜温度为

解析：（1）米曲霉是由真核细胞构成的真核生物，乳酸菌是由原核细胞构成

的原核生物，二者细胞结构的共同点是都具有细胞膜、细胞质（基质）、核糖体等

结构。（2）微生物在固体培养基上生长才能形成菌落。若要获得米曲霉菌落并加

以观察，则培养基中除需添加碳源、氮源、水和无机盐外，还需添加凝固剂一

琼脂。（3）蚕豆种子具有高蛋白、富淀粉、低脂肪等特点，是加工蚕豆酱的主要

原料。米曲霉等分泌的蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶可将原料中的大分子有机物水解

成小分子产物。大分子有机物在酵母菌、乳酸菌的作用下，产生乙醇、有机酸、

酯类等，构成蚕豆酱特有的香气。（4）表中信息显示：前发酵为45°C、后发酵为

37C时，蚕豆酱的总酸、氨基酸态氮、还原糖含量和感官得分的检测指标都最

高，说明蚕豆酱发酵的适宜温度为前发酵为45°C、后发酵为37℃。

答案：（1）细胞膜、细胞质（基质）、核糖体（2）碳源、氮源、水和无机盐琼

脂（3）蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶乙醇（4）前发酵为45℃、后发酵为37c

IIB级•提升练II

一、选择题

1.如图是草莓酒制作的步骤。下列分析中不正确的是（）

A.步骤②是对草莓进行灭菌处理

B.步骤⑤为加入酵母菌液或含酵母菌的凝胶珠

C.发酵过程中放气量先增加后减少

D.利用重铭酸钾溶液检测酒精的含量

解析：选A步骤②是对草莓进行清洗，A错误；步骤⑤为加入菌种酵母菌

液或含酵母菌的凝胶珠，B正确；发酵过程中因为先进行有氧呼吸产生二氧化碳

较多，后期进行无氧呼吸产生气体量较少，C正确；是否产生酒精可以用重络酸

钾在酸性条件下进行检测，有酒精会出现灰绿色，D正确。

2.（2019届驻马店期末）下列有关泡菜的制作和亚硝酸盐含量测定实验的叙

述，正确的是（）

A.将新鲜蔬菜与煮沸冷却的盐水（盐和清水的质量比为4：1）混匀装瓶

B.发酵过程始终要保持密封状态，泡菜坛盖边缘的水槽中要始终装满水

C.在酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应形成玫瑰红色

沉淀

D.随发酵进行，亚硝酸盐含量逐渐增加，用比色法可进行亚硝酸盐含量的

测定

解析：选B泡菜制作中应先加蔬菜，再加盐水，且盐与水的质量比为1:4;

由于乳酸菌严格厌氧，因此发酵过程始终要保持密封状态，泡菜坛盖边缘的水槽

中要始终装满水；在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应

后，与N-1-蔡基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料；随发酵进行，亚硝酸盐

含量先逐渐增加，后又逐渐降低，最终趋于稳定，用比色法可进行亚硝酸盐含量

的测定。

3.家庭制作腐乳并无严格的灭菌环节，但也能制作出品质优良的腐乳。下

列叙述不正确的是（）

A.粽叶上有大量毛霉菌繁殖体，使毛霉菌在短期内成为优势菌

B.由于营养物质的消耗和代谢产物的积累，毛霉菌之间的斗争变得激烈

C.发酵过程中要经常揭开覆盖物散热

D.装瓶密封后能继续进行发酵

解析：选C在空气中有大量的毛霉，成熟施子可以在粽叶上萌发菌丝，在

高温高湿条件下繁殖迅速，短时间内会成为优势菌种，A正确；随着营养物质的

消耗和代谢产物的积累，毛霉菌之间因为资源有限斗争激烈，B正确；发酵过程

中为了避免外界微生物的污染不能经常揭开覆盖物，C错误；装瓶密封后能继续

发酵，后期发酵利用的是被杀死后的毛霉裂解释放出来的各种分解酶的作用，D

正确。

4.（2019年江苏卷）下列关于传统发酵技术应用的叙述，正确的是（）

A.利用乳酸菌制作酸奶过程中，先通气培养，后密封发酵

B.家庭制作果酒、果醋和腐乳通常都不是纯种发酵

C.果醋制作过程中发酵液pH逐渐降低，果酒制作过程中情况相反

D.毛霉主要通过产生脂肪酶、蛋白酶和纤维素酶参与腐乳发酵

解析：选B乳酸菌是一种严格的厌氧菌，有氧气存在时，其发酵会受到抑

制，因此利用乳酸菌制作酸奶的过程中，应一直处于密闭状态，否则会导致发酵

失败，A错误；家庭制作果酒、果醋与腐乳过程中所用的菌种均来源于自然环境,

有多种微生物参与发酵过程，因此均不是纯种发酵，B正确：果醋制作过程中，

醋酸菌有氧呼吸产生二氧化碳和水，二氧化碳溶于水形成碳酸，随着二氧化碳浓

度的增加，溶液的pH逐渐降低；果酒制作过程中，酵母菌无氧呼吸产生二氧化

碳与酒精，二氧化碳溶于水形成碳酸，随着二氧化碳浓度的增加，溶液的pH逐

渐降低，因此果酒、果醋制作过程中溶液的pH都是逐渐降低，C错误；毛霉主

要通过产生脂肪酶、蛋白酶参与腐乳发酵，D错误。

二'非选择题

5.(2019届乌鲁木齐模拟)我国是桑根种植大国，桑根品种、产量均居世界

首位。桑根果实富含白黎芦醇、花青素等有良好防癌、抗衰老功效的物质，以桑

根果实为原料进行发酵制作果酒和果醋，既开发了桑根的保健价值，又解决了桑

根果实难以保存的问题。如图为发酵过程示意图，请据图回答有关问题：

I桑根果酒)|桑根果匍

(1)处理桑根果实时，应清洗后再除去枝梗，目的是防止O

⑵为了优化发酵工艺，科研人员研究了酵母菌接种量对果酒中酒精度的影

响，结果如表:

酵母菌接种量(％)510152025

酒精度(％)5.055.415.375.215.13

由表可知，酵母菌接种量为%时，果酒的酒精度最高；当酵母菌接

种量过高时，果酒的酒精度会随接种量增大而下降，分析其原因是

果汁发酵后是否有酒精产生，可以用来检测。

(3)在发酵得到的桑根果酒中接种醋酸菌，醋酸菌在_____________条件下，

可将乙醇转变为,进而生成醋酸。

解析：(1)处理桑楣果实时，为防止杂菌污染，应清洗后再除去枝梗。(2)根

据表中数据可知，酵母菌接种量为10%时，果酒的酒精度最高；当酵母菌接种量

过高时，酵母菌种内斗争加剧，影响酒精生成，从而导致果酒的酒精度会随接种

量增大而下降。果汁发酵后是否有酒精产生，可以用酸性的重络酸钾来检测。如

果颜色由橙色变成灰绿色，说明有酒精产生。（3）在发酵得到的桑植果酒中接种

醋酸菌，醋酸菌在氧气充足条件下，可将乙醇转变为乙醛，进而生成醋酸。

答案：（1）杂菌污染（2）10酵母菌种内斗争加剧，影响酒精生成酸性的

重铭酸钾（3）氧气充足乙醛

6.（2019届重庆模拟）科研人员通过实验研发含盐低，同时又保持产品质量

与风味的低盐腐乳，过程如下：①筛选分离菌种：将待筛选的菌种涂布到特定的

选择培养基上进行分离，挑选菌种接种于酪蛋白培养基上筛选出蛋白酶活力高的

毛霉菌株。②菌种扩大培养：将毛霉接种在斜面培养基上，培养一段时间后将菌

种制成悬液，加一定浓度的盐水调节菌种数。③将含菌种的液体喷洒在豆腐块上,

然后培养、装瓶、腌制。④腐乳品质评定：通过氨基酸态氮含量和感官评价对腐

乳品质进行综合评定，结果如图，请分析回答：

高很好

低

5很差

8111417盐含量(%)

⑴毛霉的同化类型是，豆腐块为毛霉的生长提供的营养物质有

（2）腐乳制作的原理主要是利用微生物产生的（酶），氨

基酸态氮含量可代表o

（3）步骤①中，毛霉产生的酶能将酪蛋白分解而产生透明圈，在酪蛋白培养

基中筛选到三个单菌落甲、乙、丙，其菌落直径分别为3.2cm、2.8cm、2.9cm,

其菌落与透明圈一起的直径分别为3.7cm、3.5cm、3.3cm。应选择菌落

（填“甲”“乙”或“丙”）作为产蛋白酶活力高的毛霉候选菌。

（4）据图分析盐含量为________左右适宜制作腐乳；盐含量不宜过低，其原

因是盐含量过低

解析：（1）毛霉的同化类型属于异养型，豆腐块为毛霉的生长提供的营养物

质有碳源、氮源、水和无机盐。（2）腐乳制作的原理主要是利用微生物产生的蛋

白酶、脂肪酶，氨基酸态氮含量可代表蛋白质的分解情况。（3）根据菌落直径和

菌落与透明圈一起的直径可以计算透明圈的大小，甲、乙、丙的透明圈直径长分

别为3.7-3.2=0.5cm、3.5—2.8=0.7cm、3.3—2.9=0.4cm,蛋白酶活力越高，

透明圈越大，因此应选择菌落乙作为产蛋白酶活力高的毛霉候选菌。（4）腐乳的

质量需要通过氨基酸态氮含量和感官评价对腐乳品质进行综合评定，由曲线图可

知，腐乳的盐含量约为11%较为适宜；盐含量过低不足以抑制微生物的生长，可

能导致豆腐腐败变质。

答案：（1）异养碳源、氮源、水和无机盐（2）蛋白酶、脂肪酶蛋白质的

分解情况（3）乙（4）11%不足以抑制微生物的生长，可能导致豆腐腐败变质

7.（2019届凉山模拟）乳酸菌能产生亚硝酸还原酶将亚硝酸盐分解，某兴趣

小组从泡菜滤液中筛选出亚硝酸盐还原酶活力较高的乳酸菌，进行了相关实验。

请回答下列问题：

（1）为保证泡菜发酵过程中的无氧环境，在装坛发酵前后需要检查泡菜坛

，并对泡菜坛进行处理,在腌制过程中,

坛中会出现溶液量增多现象，主要原因是

（2）将筛选出的乳酸菌，用于泡菜制作过程，进行食盐用量与亚硝酸盐含量

的探索实验，结果如图I。

国-»-5%NaCl

负-□.-10%NaCl

题…il5%NaCl

隙

峰

琼

3

g

k/

)g

4-812f6

腌制时间(d)

①泡菜制作过程中，pH呈下降趋势，原因是乳酸菌发酵在第阶段

产生________0

②据图可知，腌菜时食盐的浓度越低，亚硝酸盐含量的峰值出现得越早，且

峰值较高，原因是__________________________________________________

___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________0

③实验结果说明，食盐用量和影响亚硝酸盐含量，亚硝酸

盐含量达到峰值后下降，一方面是因为环境抑制杂菌生长，使

亚硝酸盐的产生量降低；另一方面是因为

___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________0

解析：（1）为保证泡菜发酵过程中的无氧环境，在装坛发酵前后需要检查泡

菜坛有无裂纹和砂眼，并对泡菜坛进行用水密封坛口处理，在腌制过程中，坛中

会出现溶液量增多现象，主要原因是外界溶液浓度高使蔬菜细胞渗透失水。（2）①

泡菜制作的原理是乳酸菌的无氧呼吸，无氧呼吸第二阶段产生了乳酸，导致pH

呈下降趋势。②食盐用量过低，会造成细菌大量繁殖，因此图中腌菜时食盐的浓

度越低，亚硝酸盐含量的峰值出现得越早，且峰值较高。③据图分析可知，食盐

用量和腌制时间都会影响亚硝酸盐含量，亚硝酸盐含量达到峰值后下降，是因为

缺氧和酸性环境抑制杂菌生长，使亚硝酸盐的产生量降低，同时乳酸菌产生亚硝

酸还原酶会将亚硝酸盐分解。

答案：（1）有无裂纹和砂眼用水密封坛口外界溶液浓度高使蔬菜细胞渗

透失水（2）①二乳酸②食盐用量过低，造成细菌大量繁殖③腌制时间

缺氧和酸性

乳酸菌产生亚硝酸还原酶将亚硝酸盐分解

选修1生物技术实践

第35讲微生物的培养与应用

.「浬府.....跟踪检测1-------------提能力、练规范、好题练全

LHjGENZONGJIANCEJ

IIA级•基础练II

一、选择题

1.下列有关微生物培养的叙述，错误的是（）

A.测定土壤样品中的细菌数目，常用稀释涂布平板法进行菌落计数

B.在对微生物进行培养前，需要对微生物和培养基进行灭菌

C.酵母菌发酵过程产生的酒精，对其他微生物生长有一定的抑制作用

D.分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源

解析：选B在对微生物进行培养前，需要对培养基进行灭菌，不能对所培

养的微生物进行灭菌。

2.做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是（）

A.高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖

B.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上

C.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

D.用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上

解析：选D在高压灭菌的操作过程中，加热结束后应让灭菌锅内温度自然

下降，待压力表的指针指到零时，打开放气阀，旋松螺栓，打开盖子；倒平板时，

用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全取下放到一边；接种环

经火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后，再用其挑取菌落；在微生物的培养中，一

般将培养皿倒置，在皿底上用记号笔做标记。

3.下列关于统计菌落数目方法的叙述，错误的是（）

A.采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的菌落数

B.当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落

C.为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数

D.在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应

以它们的平均值作为统计结果

解析：选C当两个或多个活菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，

因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。一般选择菌落数在30—300的平板

计数，密度过大会使计数结果偏小，影响结果的准确性。至少涂布3个平板，作

为重复组，取其平均值计数能增强实验的说服力和准确性。

4.以下关于分离纤维素分解菌的实验操作错误的是（）

A.经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上

B.选择培养这一步可省略，但得到的纤维素分解菌会较少

C.可通过定时测定葡萄糖产量的变化来衡量纤维素分解菌培养液中的纤维

素酶产量

D.对照组可用等量的纤维素分解菌培养液涂布到含纤维素的培养基上

解析：选A经选择培养后，再经梯度稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维素

分解菌的培养基上；富集培养可省略，但培养分离的纤维素分解菌较少；纤维素

酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行

定量的测定；实验组和对照组遵循单一变量原则，对照组可用等量的纤维素分解

菌培养液涂布到含纤维素的培养基上，设置对照组能证明经“浓缩”培养的确得

到了欲分离的微生物。

二'非选择题

5.（2019届西安一模）环境污染物多聚联苯难以降解，受到多聚联苯污染的

土壤中，常有重金属污染同时存在。研究发现联苯降解菌内的联苯水解酶是催化

多聚联苯降解的关键酶。为了从富含多聚联苯的环境中分离联苯降解菌，某同学

设计了甲、乙两种培养基（成分见表）：

维生素NH4NO3MgCh多聚联苯水琼脂

培养基甲++++++

培养基乙++4-++—

：十表示添加该物质，一表示没有添加该物质。

（1）甲培养基中加入多聚联苯作为用于培养联苯降解菌，该培养基

属于（填“选择”或“鉴别”）培养基。接种前需对甲培养基采用

_________________法进行灭菌。

⑵培养基乙_______（填“能”或“不能”）用于测定联苯降解菌的数量，原

因是_________________________________________________________________

___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________O

统计联苯降解菌数量时，应进行多组实验，再

___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________0

（3）联苯降解菌在实验室里的降解率很高，但是实际污染环境的治理中降解

率很低，这可能是因为

_________________________________________________________（答出一种可

能即可）。

解析：（1）分析表格，甲培养基中加入多聚联苯作为唯一碳源用于培养联苯

降解菌，因此该培养基属于选择培养基。接种前需对甲培养基采用高压蒸汽灭菌

法进行灭菌。（2）培养基乙没有加入琼脂，属于液体培养基，可以在其中培养联

苯降解菌，采用显微计数法测量联苯降解菌数量。统计联苯降解菌数量时，应进

行多组实验，再取平均值。（3）联苯降解菌在实验室里的降解率很高，但是实际

污染环境的治理中降解率很低，这可能是因为实际污染环境中多聚联苯不是唯一

碳源或其他污染物（如重金属等）导致联苯水解酶的数量或活性降低。

答案：（1）碳源选择高压蒸汽灭菌（2）能培养基乙为液体培养基，可

以在其中培养联苯降解菌，采用显微计数法测量联苯降解菌数量取平均值（3）

实际污染环境中多聚联苯不是唯一碳源或其他污染物（如重金属等）导致联苯水

解酶的数量或活性降低（意思接近即可）

6.（2019届瑞金模拟）常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖进行

酒精发酵，自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，科学家欲从果园的葡萄上

或土壤中分离这种酵母菌，操作如下：

（1）制备酵母菌培养基要进行倒平板操作，待平板冷凝后，要将平板倒置，

其主要原因是

（2）纯化菌株的过程中，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始

划线，这样做的目的是o划线的某个平板培

养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线

上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误是

（3）若要检测土样中的酵母菌数量，应采用法接种。在接种前,

随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目的是

然后，将1mL土壤溶液分别稀释10倍和100倍，每种稀释度各3个平板,

分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，6个平板上的菌落数分别为59、57、

58、2、7和5,据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为个。

解析：（1）为了防止培养皿盖的冷凝水落入培养基造成污染，制备酵母菌培

养基要进行倒平板操作。(2)纯化菌株时，通常使用的划线工具是接种环。在第

二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做可以将聚集的菌落逐

步减少以获得单个菌落。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间

断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落，造成

划线无菌落可能的操作失误是接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开

始。(3)若要检测土样中的酵母菌含量，应采用稀释涂布平板法。在接种前，随

机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，目的是检测培养基平板

灭菌是否合格。稀释涂布平板法中，一般选用菌落数在30—300的平板进行计数，

因此采用稀释10倍的菌落数分别为59、57、58的平板进行计算，据此可得出每

升土壤溶液中的活菌数=(59+57+58)+3X10+(0.1X10-3)=5用乂1。6个。

答案：(1)防止培养皿盖的冷凝水落入培养基造成污染(2)将聚集的菌落逐

步分散以获得单个菌落接种环灼烧后未冷却或划线未从第一区域末端开始

(3)稀释涂布平板检测培养基平板灭菌是否合格5.8X106

7.自生固氮菌可不与其他植物共生，独立完成固氮作用，在农业生产中具

有广泛的用途。研究人员欲从土壤中筛选高效的自生固氮菌株进行研究。请回答

下列问题：

(1)在配制含琼脂的培养基和倒平板的过程中，下列选项不需要的是

(填序号)。

①酒精灯②接种环③高压蒸汽灭菌锅④棉塞

(2)要从土壤样品中分离出自生固氮菌，在获得土壤浸出悬液后，可以采用

稀释涂布平板法将菌液涂布于培养基上进行筛选。在如图所示的四种菌

落分布图中，不可能是用该方法得到的是________o

ABCD

(3)稀释涂布平板法还可用于检测土壤中自生固氮菌的含量，图中用该方法

得到的菌落分布图中，最符合计数要求的是图中的o用该方法统计样本

菌落数时是否需要设置对照组？o为什么?

（4）将1g土样稀释1（）3倍后分别取01mL土壤浸出液，涂布到3个琼脂固体

培养基的表面进行培养，记录到自生固氮菌的菌落平均数为130。则每克土样中

自生固氮菌为o该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原

因是_________________________________________________________________

___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________0

解析：（1）平板培养基配制的基本流程为：计算f称量f溶化（包括琼脂）一调

节pHf分装f灭菌倒平板f（冷却后建，J置平板，不需要接种环接种。（2）对微

生物进行分离和计数，应该用稀释涂布平板法。自生固氟菌是指在土壤中能够独

立进行固氮的细菌，所以培养基中不需要添加氮源。图D是平板划线法得到的

平板，所以稀释涂布平板法接种不可能得到D的情况。（3）符合计数要求的平板

中的菌落数应该在30〜300之间，所以图中最符合要求的是平板C。由于需要判

断培养基是否被污染，所以用该方法统计样本菌落数时需要设置对照组。（4）由

于平板上自生固氮菌的菌落平均数为130,所以每克土样中自生固氮菌为

130+0.1X1（）3=13X106（个）。由于当两个或多个细胞连在一起时，在平板上形成

的只是一个菌落，所以该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。

答案：（1）②（2）缺氮D（3）C需要培养基制备不合格会导致菌落数增

加（4）1.3X106当两个或多个细胞连在一起时，在平板上形成的只是一个菌落

IIB级•提升练II

一、选择题

1.下表表示某培养基的配方，下列叙述正确的是（）

成分蛋白陈葡萄糖KH2PO4伊红美蓝蒸储水

含量10g10g2g0.4g0.065g1000mL

A.从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养

基

B.培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白陈

C.该培养基缺少提供生长因子的物质

D.该培养基调节合适的pH后就可以接种

解析：选B从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属

于鉴别培养基；微生物的营养物质主要包括氮源、碳源、水和无机盐等，培养基

中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白陈：生长因子主要包括

维生素、氨基酸和碱基等，它们一般是酶和核酸的组成成分，蛋白陈可以提供生

长因子；该培养基调节合适的pH后还需经灭菌后才可以接种使用。

2.

如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为1-2-3f4f5,下列说法正

确的是（）

A.操作前要将接种环用酒精消毒

B.划线操作须在酒精灯火焰上方进行

C.只有在5区才可以得到所需菌落

D.在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌

解析：选D在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应

是在酒精灯火焰上灼烧，不能用酒精消毒；接种时划线操作是在酒精灯火焰附近

进行；在5个区域中，只栗有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落；每次划

线前都要灼烧接种环，目的是杀死接种环上原有的微生物（第一次划线前）和上次

划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种都来自上一次划线的末端，

划线结束后灼烧接种环以防止污染环境和感染操作者。

3.取9个洁净培养皿，均分为三组（I、II、III）,各组分别加入等量的不

同培养基，每个平板均用涂布法接种0.1mL大肠杆菌菌液，37℃培养36h后，

统计菌落数（见表），以下相关叙述正确的是（）

各平板的菌落数

组别培养基

123

I琼脂、C6Hl2。6、NH4NO3303127

II琼脂、C6Hl2。6、NH4NO3、维生素169178193

III琼脂、NH4NO3＞维生素001

A.I组和H组说明维生素可以促进大肠杆菌生长

B.I组和HI组说明大肠杆菌正常生长需要糖类物质

C.三组实验均使用了液体培养基，以方便菌落计数

D.三组实验所使用的培养基均需62℃、30min消毒

解析：选A由表格分析可知，I组和n组说明维生素可以促进大肠杆菌生

长；n组和ni组作对照，自变量是葡萄糖的有无，说明大肠杆菌正常生长需要葡

萄糖；由题意知，每个平板都含有琼脂，属于固体培养基；三组实验所使用的培

养基均需高压蒸汽灭菌。

4.(多选)漆酶属于木质素降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广

泛用途。如图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述正确的是()

A.生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品

B.筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落

C.在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化

D.斜面培养基中含有大量营养物，可在常温下长期保存菌株

解析：选BC生活污水中含木质素的物质相对较少，产漆酶菌株也较少，

不宜作为分离产漆酶菌株的样品；产漆酶菌株可降解木质素，在筛选培养基中加

入木质素可筛选产漆酶的菌株，筛选时可通过菌落特征挑出产漆酶的菌落；在涂

布平板上生长的菌落可能还有其他杂菌，可再通过平板划线法进一步纯化；对于

需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法，即在一20℃的冷冻箱中保存。

二'非选择题

5.资料表明：培养液pHW4.5时，酵母菌的代谢活动会逐渐受到抑制，甚

至停止；耐酸性酵母菌能在pHW3.5的环境下继续表现出较强的发酵能力，适宜

作为白酒发酵的生产菌种。为选育适合白酒生产的耐酸性强的酵母菌，研究者进

行了相关实验，请回答下列有关问题：

(1)河南杜康老酒制酒工艺中，在接种活菌前，清蒸稻皮的目的是

。随着发酵的进行，酒窖中培养液的pH会逐渐下降，原因是

(2)取窖底泥，溶于10mL无菌水中，再取1mL上清液接入一定量的麦芽汁

培养基中，其目的是o在此过程中先振荡摇匀，并通气培养的目的是

⑶用稀释涂布平板法进行纯化培养统计的细菌数量往往较实际值偏小的原

因是_________________________________________________________________

通过培养选育得到了三个耐酸性较强的酵母菌菌株，特点如下表。

菌株甲菌株乙菌株丙菌株

pHW3.5时，生长代谢pHW3.5时，生长代谢pH为2.5〜6时，生长

特点正常、优于其他常规菌正常，pH为4〜6时生代谢正常、优于其他常

种长不正常规菌种

依据菌株特点，研究者认为菌株更适合作为白酒发酵菌株，理

由是。

解析：（1）在接种活菌前，清蒸稻皮的目的是去除杂菌（或灭菌）。随着发酵的

进行，酵母菌细胞呼吸产生C02,C02溶于水形成碳酸，代谢过程还产生了其他

酸性物质，导致培养液的pH逐渐下降。（2）取窖底泥，溶于10mL无菌水中，再

取1mL上清液接入一定量的麦芽汁培养基中，其目的是使酵母菌大量繁殖。由

于酵母菌是兼性厌氧菌，因此在培养时通气的目的是使酵母菌进行有氧呼吸，大

量繁殖。（3）用稀释涂布平板法统计细菌数量时，由于两个或多个细胞连在一起

时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的细菌数量往往较实际值偏小。三

个耐酸性较强的酵母菌菌株中，由于丙菌株对pH的耐受范围更大（发酵初期pH

近中性，丙菌株适合此环境，更易于形成优势菌群；发酵后期pH逐渐降低，丙

菌株依然能正常生长），因此丙菌株更适合作为白酒发酵菌株。

答案：（1）去除杂菌（或灭菌）细胞呼吸产生CO2,可形成碳酸；代谢过程还

产生了其他酸性物质（2）扩大培养（或使酵母菌大量繁殖）使酵母菌进行有氧

呼吸，大量繁殖（3）当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个

菌落丙丙菌株对pH的耐受范围更大（发酵初期pH近中性，丙菌株适合此环

境，更易于形成优势菌群；发酵后期pH逐渐降低，丙菌株依然能正常生长）

6.（2019届诸暨市期末）幽门螺杆菌（Hp）感染是急慢性胃炎和消化道溃疡的

主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步

骤如下：

配制培养基一灭菌、倒平板一接种f培养一观察。请回答：

（1）在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有

,它能以尿素作为氮源；若有Hp,则菌落周围会出现红色环带。

（2）高压蒸汽灭菌加热结束时，待高压锅或灭菌锅时,

开启锅盖。

（3）接种时，先将菌液用稀释，然后用取0.1mL稀

释液加到培养皿中，再用玻璃刮刀涂布到整个平面上。

（4）在培养时，需将培养皿倒置并放在恒温培养箱中，培养皿需用记号笔在

（填“皿盖”或“皿底”）做好标记。

（5）观察时发现，若实验操作都正确规范，但通过菌落计数计算，稀释倍数

高的组计算结果往往大于稀释倍数低的组，导致这种结果的原因最可能是

（6）临床上纥呼气试验检测是一种安全、准确的检测Hp的方法，其基本原

理是当被检测者服用含有14C标记的尿素的胶囊后，如被检测者的胃内存在Hp

感染，则可检测到被标记的o

解析：（1）由于Hp在分解尿素的过程中合成麻酶，腺酶将尿素分解成氨，会

使培养基碱性增强，pH升高，在培养基中加入酚红指示剂，指示剂变红。（2）高

压蒸汽灭菌加热结束时，待高压锅或灭菌锅压力与大气压相同时，开启锅盖。（3）

接种时，先将菌液用无菌水稀释，然后用移液管取0.1mL稀释液加到培养皿中，

再用玻璃刮刀涂布到整个平面上。（4）在培养时，需将培养皿倒置并放在恒温培

养箱中，培养皿需用记号笔在皿底做好标记。（5）观察时发现，若实验操作都正

确规范，但通过菌落计数计算，稀释倍数高的组计算结果往往大于稀释倍数低的

组，原因可能是稀释倍数低的组菌液浓度更大，可能出现多个细菌连在一起形成

一个菌落，导致菌落计数偏低。（6）临床上用14c呼气试验检测人体是否感染Hp,

其基本原理是Hp能将,4C标记的尿素分解为NR和14co2。

答案：（1）麻酶（2）压力与大气压相同（3）无菌水移液管（4）皿底（5）

稀释倍数低的组菌液浓度更大，可能出现多个细菌连在一起形成一个菌落，导致

菌落计数偏低（6）二氧化碳

7.（2019届无锡期末）成年大熊猫是以竹子（高纤维食物）为主的珍稀动物。大

熊猫对纤维素的消化主要是由肠道微生物来完成的。科研人员从大熊猫粪便中筛

选出能够降解纤维素的菌株（目的菌），并对该菌株进行鉴定和产酶条件的优化，

具体流程如图1。请回答下列问题:

图1

(1)制备牛肉膏蛋白陈培养基需经过计算f称量f溶化ff倒平板

等步骤。大熊猫粪便样品通过富集培养，可增加,以

确保能够从样品中分离到所需要的微生物。

(2)将富集培养后的大熊猫粪便混合菌液适当稀释后涂布于以

作为唯一碳源的选择培养基上，倒置放入37℃培养箱中培养

24ho培养完成后滴加染色，观察培养基上是否产生_________,

再通过比较其大小，初步获得目的菌株。

(3)将初步获得的目的菌株通过滤纸分解实验进一步验证筛选，其是否可以

作为生产菌株仍需进行菌株鉴定，菌株鉴定通常通过观察记录菌落的

________________________________等特征进行o

(4)为确定最终获得的目的菌株的最佳产酶条件，首先选取培养基初始pH、

培养温度、摇床转速以及装液量(250mL三角瓶)4个因素开展单因素实验，实验

结果如图2〜5所示。

T

l100

w

m80

/60

v

c40

u20

7100:

比80

建60

史40

陇20

6.57.033

二100100

三r

8080

/己6060

cv4040

yu2020

JS

遨

叟

招

『

150175200

摇床转速/(r/min)

图4

①培养基pH和培养温度都会影响目的菌株产酶，主要原因是这些因素会影

响0

②摇床转速和装液量都可以影响培养液中的含量，进而影响目

的菌株产酶。