沙棘籽渣和果渣中黄酮对糖尿病大鼠降糖作用的研究

沙棘籽渣和果渣中黄酮对糖尿病大鼠降糖作用的研究

沙棘是胡颓科的一种多年生落叶灌木，具有很高的药物价值。这是中国古代和蒙古医学中常用的药物。唐朝的《四书》和《清代的珍珠草本植物》等古典医学书籍都记录了沙棘。1977年，卫生部首次将沙棘列入《中华人民共和国药典》。目前，国内外学者主要集中于沙棘油、沙棘果汁及沙棘叶的研究。表明沙棘可以抗肿瘤、防辐射、增强心血管系统功能等。但至今，有关对沙棘籽渣和果渣的营养成分和药效的研究甚少。籽渣、果渣分别是沙棘籽榨油、果实轧汁后的残渣，也是传统药用部位果实初级利用后的弃物，其中亦含较多活性物质。我们的前期研究表明：沙棘籽渣和果渣中黄酮能体外清除自由基及抗脂质过氧化；对正常小鼠的血糖、血脂具一定的降低作用，并抑制糖异生。本研究进一步探讨沙棘籽渣和果渣中黄酮对STZ诱导糖尿病大鼠的降糖作用及对体内物质代谢的影响。1材料和方法1.1材料表面1.1.1和3种植物沙棘籽渣黄酮(flavonoidsfromseedre-siduesofHippophaerhamnoidesL.,FSH)和果渣黄酮(flavonoidsfromfruitresiduesofHippophaerhamnoidesL.,FFH)由本院植物化学实验室制备。1.1.2动物雄性SD大鼠体重（253.07±16.17)g（上海西普尔-必凯公司）。1.1.3血清、糖代谢和理化指标的测定链脲佐菌素（streptozotocin,STZ,Sigma公司产品），盐酸二甲双胍片（Metformin,上海华氏制药有限公司，批号：021101）；血清葡萄糖、胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、果糖胺和白蛋白测定试剂盒购自上海科欣生物技术研究所；乳酸、乳酸脱氢酶（LDH）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽还原酶（GR）和丙二醛（MDA）测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所；肝糖原用蒽酮硫酸法测定；蛋白含量用Folin酚试剂法。1.1.4分光器sartoris,wh-65、wh-65型螺旋混合器721型光栅分光光度计（上海第三分析仪器厂），紫外分光光度计，BS210S电子天平（Sartorius）,WH-85型旋涡混合器（上海手术器械厂）。1.2方法1.2.1模型大鼠的分组正常雄性大鼠适应性饲养5d，禁食10h后，根据预试验选用57mg/kg剂量腹腔注射灭菌柠檬酸缓冲液（pH4.6）配制的4%STZ溶液。96h后，尾静脉采血，测定禁食6h后空腹血糖值，取血糖值>15.00mmol/L的大鼠为模型大鼠。模型大鼠随机分为模型对照组、二甲双胍组、FSH组和FFH组，组间的血糖差异小于0.1mmol/L；同时另设一正常对照组。1.2.2灌胃时间及模型对照组和正常对照组灌胃FSH、FFH组均以剂量150mg/(kg·d)，二甲双胍组则按剂量200mg/(kg·d)每天一次性灌胃，模型对照组和正常对照组灌胃等体积的蒸馏水。连续4w，每周测血糖一次，称体重，每天测摄食量饮水量，4w后眼窦脉采血并处死，进行血液和脏器分析。1.2.3统计处理用Excel软件，结果以表示，组间差异经t检验。2结果与分析2.1ffh和二甲双乍试验与模型对照组比，FSH极显著地减少糖尿病大鼠的饮水量、摄食量，效果优于二甲双胍，而FFH对饮水量影响不大，对摄食量有显著作用。三者对STZ糖尿病大鼠试验前后体重无明显影响。提示FSH和FFH可调节糖尿病大鼠饮食水平。2.2ffh组与对照组血糖含量比较灌胃1、2、3、4w后，FSH组大鼠的血糖值都显著地低于模型对照组，降糖的幅度分别5.66%、14.86%、16.68%、23.33%，与试验开始相比，亦出现下降趋势；FFH组仅在2w时血糖值显著地低于模型对照组；二甲双胍组在3w,4w时血糖值明显的降低，降低率为15.84%、7.27%。表明FSH在剂量150mg/(kg·d)对糖尿病大鼠具有效的降糖作用。2.3fpss的表达在高糖环境中血清蛋白与血清中葡萄糖发生非酶促反应形成具有酮胺键糖化血清蛋白，又称果糖胺（FTS）。FTS在血清中的浓度比较稳定，不受血糖暂时波动影响，可反应2～3w的血糖水平。进一步分析结果(表3)：与模型对照组比，FSH组FTS水平显著降低；FFH和二甲双胍组FTS水平无显著差异（P>0.05）。结合表2综合分析，提示FSH能有效控制血糖水平。2.4鼠肝糖原、血清乳酸、ldh与模型对照组相比，FSH和FFH对STZ糖尿病大鼠的肝糖原、血清乳酸、LDH没有明显作用。提示FSH和FFH可能未通过增加肝糖原含量来降低血糖，没有加强葡萄糖的无氧代谢作用，不会产生过多的乳酸。2.5ffh对tg的影响与模型对照组比，FSH能显著降低STZ糖尿病大鼠血清TG水平，FFH对TG影响不大；FSH和FFH组的血清TC与模型组比无显著差异（P>0.05）；二甲双胍对血清TG和TC都无明显的影响。提示FSH对STZ糖尿病大鼠并发的高脂血症具一定的调节作用。2.6ffh、fsh、二甲双钺对血清蛋白及肾重指数的影响与模型组比，FSH组血清白蛋白、血清总蛋白及血清总蛋白/白蛋白水平显著升高；FFH组血清白蛋白与模型组没有差异，血清总蛋白及总蛋白/白蛋白水平显著升高；而二甲双胍对三者均无影响。同时FSH、FFH及二甲双胍对肾重和肾重指数均无明显影响。提示FSH和FFH可增加糖尿病大鼠血清蛋白水平，调节蛋白质代谢紊乱。2.7甲双fig对gsh和gr的影响结果显示：FSH可显著地增加糖尿病大鼠体内的GSH水平和GR的活性；FFH同样显著地增加GSH水平，但对GR影响不大；而二甲双胍对GSH和GR的作用均不明显。MDA是机体内不饱和脂肪酸在自由基的作用下产生脂质过氧化最终产物，表7结果显示：FSH、FFH和二甲双胍对糖尿病大鼠体内MDA的产生均有显著的抑制作用，且FSH的效果最好。3fsh与ffh单次给药对大鼠血糖的影响高血糖是糖尿病临床重要指标，果糖胺水平变化则反映糖基化程度。本研究表明：与模型组比，随着疗程延长，FSH降糖效果逐渐明显，4w后，降糖幅度达23.33%，20%的有效降糖；FSH组果糖胺水平也显著低于模型对照组，因此FSH能稳定有效地控制血糖水平。FFH组仅在2w时显著低于模型对照组，果糖胺水平没显著性差异，如果延长疗程，可否提高药效，尚待探究。糖尿病所致的脂质代谢异常是导致动脉粥样硬化的重要危险因素之一。实验结果表明：FSH对血清TG有显著的降低作用，可调节糖尿病大鼠并发的高脂血症，纠正其脂质代谢异常。糖尿病亦引起蛋白质代谢紊乱,研究证实，脂蛋白可刺激肾小球系膜细胞增殖，引起肾小球硬化，使肾脏损害加重，同时使血中白蛋白丢失增多，加重低蛋白血症，而低蛋白血症反过来又可刺激脂蛋白合成，从而造成恶性循环。本实验中，FSH和FFH组大鼠血清白蛋白或总蛋白水