四逆汤对大鼠温里药效的性别差异

四逆汤对大鼠温里药效的性别差异

关于医学药物效应学和药物代动力学的性质差异的研究已经完成。如Wolbodld等用手术切除94例患者的肝脏样本,研究钙离子拮抗剂维拉帕米血药浓度性别差异与CYP3A4的关系。结果表明,静脉滴注维拉帕米后,女性的血药浓度高于男性。Verster等对所有道路驾驶考试进行检查催眠药物效果的文献进行检索与系统分析,研究催眠药物治疗后对驾驶性能影响的性别差异。结果表明,晨起氟西泮(30mg)和午夜唑吡坦(10mg)对驾驶性能的影响,具有显著的性别差异。李丽等探讨阿卡波糖对不同性别2型糖尿病患者降血糖效果的差别。结果显示阿卡波糖能降低空腹血糖、餐后血糖及糖化血红蛋白,改善胰岛素抵抗,糖化血红蛋白下降幅度与性别有关,男性下降更明显。现代有关单味中药有效成分的药代动力学性别差异研究已有报道。朱伟等报道大黄酸在人体内具有药代学性别差异。徐国防等报道五味子乙素在不同性别的大鼠体内药代学特征具有明显差异。但是,目前有关中药复方性别差异的研究,从药效学到药代学尚属空白。笔者就温里剂代表方四逆汤“温里”药效是否存在性别差异,作一初步探索研究。1材料和方法1.1动物许可证:scxk浙清洁级SD大鼠32只,雌雄各半,体质量180~220g,由南京中医药大学动物实验中心提供,动物许可证号:SCXK(浙)20080033。在普通清洁环境下饲养,室温18~24℃,通风良好,自由饮水、摄食。1.2elisa试剂盒四逆汤出自张仲景《伤寒论》,由生附子、干姜和炙甘草组成,据《方剂学》折合成现代剂量各9g;购于南京中医药大学国医堂门诊部,由执业中药师鉴定为正品药材;所有药物用8倍水浸泡1h,生附子先煎1h,余药浸泡1h后入汤同煎,一煎40min,二煎30min,合并滤渣,浓缩至生药浓度250g·L-1,-20℃保存备用。Elisa试剂盒为英国Abcam公司生产;尿儿茶酚胺,批号:E11031207;尿羟皮质类固醇,批号:E11031202;血清甲状腺素T3,批号:E11031304;血清甲状腺素T4,批号:E11031305。1.3实验生物代谢笼:南京中医药大学动物实验中心提供;电子体温计:型号ZH-G11江苏江航医疗设备有限公司;电子天平:型号PB602-E梅特勒托利多仪器上海有限公司;离心机:型号DT5-3北京时代北利离心机有限公司;酶标仪:ModelNo.680SerialNo.10820BIO-RAD;心电图机:ECG-2203B广州市三锐电子科技有限公司。1.4性对照组的治疗取SD大鼠32只,雌雄各半,采用随机数字表法分成雌性、雄性实验组;雌性、雄性对照组;每组8只。分别为四逆汤雄性组,四逆汤雌性组,雄性对照组和雌性对照组。按等效剂量计算方法算出四逆汤组大鼠给药剂量为9.60g·(kg·d)-1,对照组灌服同体积生理盐水,每日剂量分上、下午2次灌服,灌胃持续3周。1.5耐疲劳性能检测一般情况:采用代谢笼每只大鼠单独饲养,观察灌药前后4组大鼠的精神状态、活动情况、毛发皮肤等,记录体温、24h摄食量、饮水量、大小便性状等;体力耐受:将大鼠放入水温23~25℃,水深60cm的水中,进行固定时间内的自然游泳观察,以每只大鼠出现自然沉降的时间为每只大鼠的耐疲劳时间;心率:用3mL·kg-1的水合氯醛麻醉大鼠后,仰位固定,将心电图机针状电极插到四肢的皮下,根据心电图纸读取心率;尿儿茶酚胺、尿17-OHCS:收集灌药前后的24h尿液,离心,用ELISA法检测儿茶酚胺、17-OHCS;甲状腺素T3、T4检测:眼眶静脉穿刺收集血液并迅速离心,分离出血清,置-70℃冰箱贮存待测,用ELISA法检测甲状腺素T3、T4。1.6统计学处理用SPSS16.0统计学软件进行统计处理,以均数±标准差(x¯±s)(x¯±s)为统计量描述,两组间用独立样本t检验进行统计分析,P<0.05为差异有统计学意义,P<0.01为差异有极显著性意义。2结果2.1逆汤大鼠与大鼠的行为活动及饮食量比较见表1四逆汤组雄性与雌性大鼠活动明显增加,烦躁不安,叫声响亮,捉拿时剧烈挣扎且挣扎有力,易咬人,摄食、饮水增多,皮肤黏膜潮红,舌色红或紫红,其中,雄性大鼠较雌性更为显著。对照组行为活动较灌胃前无明显差异。四逆汤组大鼠大便由湿润变干燥,小便由淡黄色变为明黄色,雄性大鼠较雌性更为明显,对照组大鼠大便软硬适中。实验第21天记录24h内大鼠体温、体质量、饮水量、饮食量,见表1。四逆汤雄性组与雄性对照组相比,四逆汤雄性组能显著增加大鼠体温、体质量、饮水量、饮食量(P<0.01)。四逆汤雌性组与雌性对照组相比,四逆汤雌性组能显著增加大鼠体温、体质量、饮水量、饮食量(P<0.01)。2.2白鼠心率与游泳时间,四逆汤男性组为小波场,a四逆汤对大鼠心率与游泳时间的影响,给药后与给药前相比,四逆汤雄性组与四逆汤雌性组的心率明显加快,游泳时间显著延长(P<0.01);雄性对照组与雌性对照组的心率与游泳时间无显著性差异(P>0.05)。四逆汤雄性组与四逆汤雌性组相比:给药后,四逆汤雌性组的心率明显加快(P<0.01),四逆汤雄性组的游泳时间显著延长(P<0.01);雄性对照组与雌性对照组相比,给药后,雄性对照组与雌性对照组的心率与游泳时间无显著性差异(P>0.05)。见表2。2.3不同给药后儿童茶酚胺、心率及游泳时间给药后与给药前相比,四逆汤雄性组的儿茶酚胺与17-OHCS含量均显著增加(P<0.01);四逆汤雌性组的儿茶酚胺含量增加(P<0.05),17-OHCS含量显著增加(P<0.01);雄性对照组与雌性对照组的尿内儿茶酚胺和17-OHCS含量无显著性差异(P>0.05)。四逆汤雄性组与四逆汤雌性组相比,给药后,四逆汤雄性组的儿茶酚胺与17-OHCS含量均显著增加(P<0.01)。雄性对照组与雌性对照组相比,给药后,雄性对照组与雌性对照组的心率与游泳时间无显著性差异(P>0.05)。见表3。给药后与给药前相比,四逆汤雄性组与四逆汤雌性组的血清内甲状腺素T3、T4的含量显著增加(P<0.01);雄性对照组的T3含量增加(P<0.05);雄性对照组的T4及雌性对照组的T3、T4含量均无显著性差异(P>0.05)。四逆汤雄性组与四逆汤雌性组相比,给药后四逆汤雄性组的血清内甲状腺素T3、T4含量均显著增加(P<0.01)。雄性对照组与雌性对照组相比,给药后雄性对照组与雌性对照组的血清内甲状腺素T3、T4无显著性差异(P>0.05)。见表4。3逆汤对大鼠的热证行为的影响两性在阴阳气血和脏腑经络诸方面的区别,是引起方剂功用性别差异的基础。性别差异不仅表现在男女的日常社会生活中,还存在于生理反应里。《素问·阴阳应象大论》曰:“阴阳者,天地之道也,万物之纲纪,变化之父母,生杀之本始,神明之府也……阴阳者,血气之男女也。”可见男女阴阳禀赋相异,男属阳,女属阴。就雌雄动物的阴阳属性而言,则雄性属阳,雌性属阴。笔者用温里剂代表方四逆汤灌胃不同性别的大鼠,制作热证动物模型,观察“温里”药效的性别差异,即四逆汤的“温里”药效是否对雄性大鼠的影响更加明显。四逆汤出自《伤寒论》,由生附子、干姜、炙甘草组成。方中生附子大辛大热,温壮命火,破阴逐寒;干姜辛热,温中散寒,以助附子,两药合用,温里回阳之力大增;甘草益气安中,与干姜、附子相配具“辛甘化阳”之效。三药成方,共奏回阳救逆之功,本方是温里剂中回阳救逆的代表方。现代有关运用热性单味药或方剂制作热证动物模型的报道颇多,如梁月华等通过用附子、干姜、肉桂复方喂养大鼠,观察其对垂体-肾上腺皮质系统、甲状腺系统、性腺系统的影响。结果表明,垂体内促甲状腺激素(thyroidstimulatinghormone,TSH)合成加速释放增多,丘脑下部促甲状腺激素释放激素(thyrotropin-releasinghormone,TRH)释放增多,垂体内促肾上腺皮质激素(adreno-cortico-tropic-hormone,ATCH)释放活跃,血清内促黄体生成激素(luteinizinghormone,LH)升高。本实验即采用了梁月华等的相关方法。《中医诊断学》指出热证常见发热,恶热喜冷,口渴欲饮,面赤,烦躁不宁,痰、涕黄稠,小便短黄,大便干结,舌红,苔黄燥少津,脉数等。实验中四逆汤组大鼠活动剧烈,烦躁不安;大鼠的体质量、饮水量、饮食量增加;游泳时间延长,而雄性则较雌性更为显著,提示四逆汤的“温里”功效能促进大鼠多方面机能且有一定的性能差异。本实验发现,在四逆汤用药前雌性大鼠心率快于雄性,而四逆汤给药后雌性心率仍快于雄性。这一现象用中医学的寒证脉迟或紧、热证脉数解释不通,有待作进一步研究与理论探讨。四逆汤给药前后,雌性大鼠体温均高于雄性,这可能与雌性大鼠性周期变化的影响有关。尿内儿茶酚胺、17-OHCS和血清内甲状腺素T3、T4是内分泌代谢性指标,此前已有学者用这些指标探讨过热证模型,梁月华等用温热性中药复方灌喂大鼠2~3周,观察对心率、尿内儿茶酚胺及17-OHCS排出量以及氧消耗量的影响,结果证明,温热药有提高交感神经-肾上腺(皮质、髓质)系统机能活动的作用,并使代谢过程加强。本实验研究发现,四逆汤组大鼠尿内儿茶酚胺、17-OHCS排出量增多;血清内甲状腺素T3、T4含量增加,且四逆汤雄性组较四逆汤雌性组更为显著。提示温里剂四逆汤能