【犬用环丙沙星凝胶剂制备的实验探究5000字（论文）】

犬用环丙沙星凝胶剂制备的实验探究目录TOC\o"1-2"\h\u4502摘要 19272关键词：环丙沙星；凝胶剂；正交实验 1218911前言 1307112材料与方法 2224782.1实验器材与方法 2256362.2环丙沙星凝胶剂的制备 2305282.3凝胶剂的质量检测 488322.4凝胶剂检测评分标准 431223结果与分析 53093.1环丙沙星凝胶剂基质的选择 5283063.2正交试验结果 6228453.3药敏试验结果 7310184讨论与结论 720743参考文献 8摘要为了制备犬用环丙沙星凝胶剂，实验采用正交试验设计，以卡波姆-940、甘油、氮酮的用量为因素，以凝胶剂的外观、黏稠度、涂展性和稳定性、药敏试验结果为考查指标，筛选环丙沙星凝胶剂主要基质的最佳配比。结果表明，筛选得到的犬用环丙沙星凝胶剂的最佳配比为1%卡波姆940、0.3%主药、5%甘油、6%氮酮。以此配方制备的环丙沙星凝胶剂色泽均匀，黏稠性及涂展性良好，稳定性好，制备工艺简单。关键词：环丙沙星；凝胶剂；正交实验1前言近几年来，宠物犬和工作犬的饲养量随着人们生活水平的提高而不断增加。犬类与人类的接触日益密切。其健康也受到宠物主人的重视。随之而来各种疾病的发病率也迅速增加。犬类细菌性皮肤病是临床上最常见的疾病之一，发病原因复杂，种类繁多。根据相关文献可得，引起细菌性皮肤病的常见致病菌有金黄色葡萄球菌、化脓性杆菌、奇异变形杆菌等[1]。临床表现为皮肤表面出现脓包，甚至有渗出液，病灶表面被毛脱落等。动物常表现瘙痒，频发抓挠患病部位。给宠物带来了极大的痛苦。目前临床上常采用软膏剂、喷剂等外用制剂进行治疗。但软膏剂涂布不均匀，容易污染犬类毛发。喷剂流动性大，药效容易丧失[2]。其他外用制剂也因为剂型的原因存在一些缺点。而凝胶剂作为一种药物新剂型，制备工艺简易、易于使用、生物相容性良好、生物利用度高、吸收快、质地均匀，能够很好的克服犬类活动范围广，皮肤比较敏感的特点[3]。环丙沙星是第三代喹诺酮类抗生素，对于引起犬类细菌皮肤病的致病菌的最低抑菌浓度0.008-2毫克/毫升。显著优于其他同类药物以及头孢菌素等。主要用于敏感性致病菌引起的皮肤、软组织感染和创伤感染等疾病。目前临床上已经存在人用盐酸环丙沙星凝胶剂，但犬类皮肤和人皮肤结构存在差异（主要是表皮层数的差异、皮肤ph值不同、汗腺分布不同、敏感性不同）。因此人用盐酸环丙沙星凝胶剂不能直接用于犬类皮肤。本次课题将参考薛大全关于环丙沙星凝胶剂的制备方法，初定基础配方比筛选卡波姆-940、羧甲基纤维素钠，为确定基质用量、丙三醇用量以及氮酮的用量，设计L9(34)正交试验，选用基质用量、丙三醇用量、氮酮的用量为正交试验的因素，每个因素均有3个水平，并以环丙沙星凝胶剂的外观性状、稳定性为评价指标，优选环丙沙星凝胶剂的最佳处方配比。2材料与方法2.1实验器材与方法2.1.1实验器材电热恒温鼓风干燥箱，购自上海精宏实验设备有限公司;离心机，购自沈阳理化仪器厂;磁力搅拌器，购自常州市普达教学仪器有限公司;电子天平，购自上海精密科学仪器有限公司;冰箱，购自青岛海尔股份有限公司;电子恒温水浴锅，购自余姚市亚星仪表有限公司;2.1.2试验药品环丙沙星;卡波姆940(CP－940)、羧甲基纤维素钠(CMC－Na)、乙醇、三乙醇胺、甘油、尼泊金丙酯，氮酮，浓盐酸均购自中国天津巴斯夫化工有限公司，试剂均为分析纯。2.2环丙沙星凝胶剂的制备2.2.1环丙沙星凝胶剂的制备方法药物均按处方量用电子天平称取，先将卡波姆-940置于100ml小烧杯中，加约60ml蒸馏水搅拌溶胀过夜，得透明胶状物。称取处方量的环丙沙星于小烧杯中，用适量浓盐酸搅拌溶解，备用。另称取尼泊金丙酯于小烧杯中加适量无水乙醇溶解，加入溶胀好的凝胶剂基质中。最后加入处方量的甘油、氮酮，充分搅拌，使药液混合均匀，最后添加蒸馏水至约90ml,充分搅拌的同时,滴加三乙醇胺适量,搅拌均匀使成凝胶状,最后补加蒸馏水至100ml[6]。2.2.2环丙沙星凝胶剂基质的选择初定基质和基础配方比：环丙沙星0.3%，基质1%，甘油5%，氮酮4%。按照上述环丙沙星凝胶剂的制备方法制备凝胶剂，并以环丙沙星凝胶剂的外观，涂展性，黏稠性，稳定性为考察指标，筛选合适的环丙沙星凝胶剂基质。2.2.3正交试验设计根据单因素试验结果，选择合适的凝胶剂基质，采用正交试验进一步优化制备工艺，以凝胶剂的外观和制剂的稳定性作为考察指标，考察影响凝胶剂成型的3个主要因素:基质浓度(A)、丙三醇用量(B)、氮酮用量(C)，每个因素选择3个水平，按L9(34)安排正交试验，因素水平见表1。按表1中各个因素和水平条件制备凝胶剂，每个实验条件平行重复3次，分别对凝胶剂的外观性状、涂展性、均匀性以及，稳定性进行综合评分[8]。表1各因素水平对比%水平因素(A)卡波姆-940(B）丙三醇（C）氮酮10.5522110431.5156按照上述环丙沙星凝胶剂的制备方法，参照表2中CP-940用量、丙三醇用量以及氮酮用量，对环丙沙星凝胶剂进行制备，其中每个因素有3个水平，观察外观性状并检测其稳定性。表2环丙沙星凝胶剂处方优化正交试验因素水平表%试验号因素(A)卡波姆-940(B)丙三醇(C)氮酮10.55220.510430.51564110651152615471.515481.55691.51022.3凝胶剂的质量检测2.3.1环丙沙星凝胶剂的稳定性检测(1)离心试验：将所测样品以3000r/min,离心30min后取样观察,观察样品外观是否均匀,有无分层和渗水现象。(2)耐热试验：取实验制备的环丙沙星凝胶剂基质放入55℃的电子恒温水浴锅中2小时，恢复室温后观察凝胶剂有无分层、渗水现象。(3)耐寒实验：取环丙沙星凝胶剂置于4℃冰箱中，分别于第0、5、10天取样，考察凝胶剂的性状、均匀性、稳定性。(4)长期试验：在温度25℃±2℃、相对湿度60%±10%的条件下，将环丙沙星凝胶剂保存一周以上，并观察外观变化。2.3.2环丙沙星凝胶剂的药效检测(1)药敏试验：将引起犬类细菌皮肤病的主要致病菌金黄色葡萄球菌接种于普通琼脂培养基中，同时将浸有环丙沙星凝胶剂的纸片用无菌手术镊小心加放在培养基上，37℃培养24小时后，用游标卡尺测量试纸周围抑菌圈直径，并记录结果[4]。2.4凝胶剂检测评分标准采用综合评分法，依照上述实验结果，参考《中国药典》2010年版一部附录凝胶剂下有关规定：凝胶剂应均匀、细腻，在常温时保持凝胶状，不干涸或液化。以凝胶剂的外观性状和稳定性为综合评分考察指标，使凝胶剂的质量控制更加全面。表3凝胶剂检测评分标准考察指标评分标准分数外观性状乳白色、半透明半固体1颜色浑浊、透明性不佳0.5颜色十分浑浊0均匀性整体均匀，无较大颗粒、团块、气泡2有少量颗粒、团块、气泡1有大量颗粒、团块、气泡0涂展性有弹性，容易涂抹1弹性欠佳，稍难涂抹0.5难以均匀涂抹0耐热稳定性无分层或渗水现象1有分层或渗水现象0.5有严重分层或渗水现象0耐寒稳定性无分层或渗水现象1有分层或渗水现象0.5有严重分层或渗水现象0离心实验无分层或渗水现象2有分层或渗水现象1有严重分层或渗水现象0放置试验无分层或渗水现象2有分层或渗水现象1有严重分层或渗水现象03结果与分析3.1环丙沙星凝胶剂基质的选择根据单因素实验结果，CP-940配制的凝胶剂粘附性强、涂展性好，成型性好。且有文献报道卡波姆还有一定的促渗作用，而用羧甲基纤维素钠制成的凝胶剂流动性强，需要加大剂量或加入其他辅料才能改善。稳定性不如卡波姆制成的凝胶剂，因此选用卡波姆-940作为环丙沙星凝胶剂基质。不同基质对于凝胶剂成型的影响见下表。表4基质的选择基质外观检查稳定性检查形态涂展性均匀性耐热试验耐寒实验离心实验放置试验卡波姆-940乳白色凝胶容易涂抹整体均匀细腻无分层现象无分层现象无分层现象无分层现象羧甲基纤维素钠乳白色凝胶稍难涂抹有少量颗粒有分层现象有分层现象有分层现象无分层现象3.2正交试验结果参照环丙沙星凝胶剂的制备方法按照表2的处方比例制备凝胶剂，再根据表3的评分标准对上述已经制备好的环丙沙星凝胶剂进行质量考察，平行实验多次评分并计算其平均分。其评分结果如表5所示。从下表中我们可以看出，在正交试验所得的9组样品中其综合评分最高的是4号样品，综合评分最低的是2号样品。R为极差，极差R的值越大，对实验的结果影响程度越大。所以，从R值的大小可以判断出对环丙沙星凝胶质量的影响因素的大小，影响最大的是因素（B)丙三醇的用量，因素A和因素C的加入对凝胶剂的综合评分有影响但影响不大。K为平均值，根据K值的大小可以判断出哪个水平的处方制得的凝胶质量较好。评分结果越高说明凝胶的处方相对也越好。所以，要求所对应的K值越大越好。也即是说，正交试验中3个因素的优先顺序为凝胶剂中丙三醇的含量>凝胶剂中卡波姆-940的含量>氮酮的用量。综上所述，环丙沙星凝胶剂的最佳处方配比为A2B1C2即卡波姆-9401%,丙三醇5%，氮酮6%。表5正交试验结果试验号因素综合评分(A)卡波姆-940（%）(B)丙三醇（%）(C)氮酮（%）10.5526.520.51066.230.51546.841568.2511047.3611527.071.5548.081.51026.591.51567.5K16.5007.5676.6677.100K27.5006.6677.3007.067K37.3337.1007.3677.167R0.8330.9000.7000.1003.3药敏试验结果以药敏圈的直径为判定标准，>21mm为高度敏感，>16-20mm为中度敏感，<15mm为耐药。环丙沙星凝胶剂对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为22mm，说明金黄色葡萄球菌对环丙沙星高度敏感,表明制成的环丙沙星凝胶剂具有一定的临床应用意义，有明显的抑制致病性细菌的作用。4讨论与结论环丙沙星是第三代喹诺酮类药物；其抗菌活性是目前广泛应用的氟喹诺酮类中最强者。现一般认为喹诺酮类作用于细菌细胞DNA螺旋酶的A亚单位，抑制DNA的合成和复制而导致细菌死亡。除对革兰阴性杆菌有高度抗菌活性外，尚对葡萄球菌属具有良好抗菌作用。凝胶剂作为一种新型制剂，已成为目前国内外制剂领域研究的热点。具有黏附性好、制备工艺简单、易于使用、不污染犬类毛发。本课题在薛大权所作关于环丙沙星凝胶剂的配方比：环丙沙星0.3g,聚羧乙烯9410.5g,乙醇3g,甘油5g,0.1g,三乙醇胺适量,蒸馏水加至100g的基础上[7]，通过正交试验探究犬用环丙沙星凝胶剂制剂成型的最佳处方比例，并对制备出的凝胶剂进行质量考察。在单因素试验中，对凝胶剂基质卡姆波-940和羧甲基纤维素钠进行筛选，试验结果表明，羧甲基纤维素钠虽涂展性、均匀性等外观性状较好，但稳定性不佳，离心或耐热实验后有渗水或分层现象，而卡波姆-940制成的凝胶剂涂展性好、黏附性强、离心或者耐热耐寒试验无分层或渗水现象、药物在皮肤的滞留时间长。因此选择卡波姆-940作为环丙沙星凝胶剂基质。甘油作为外用制剂中最常用的保湿剂，其用量通常介于5%~15%之间。甘油的保湿效果良好，对皮肤的刺激性较小，因此选择甘油作为本制剂的保湿剂[5]。凝胶剂需透过皮肤或黏膜的吸收才能发挥作用，但是皮肤角质层作为天然的生理屏障,能阻碍药物进入体内，因此大多数药物经皮渗透率低，不易吸收，为了使药物透过皮肤达到治疗目的，并维持血药浓度长时间相对稳定，所以需要在凝胶剂中添加适宜的促皮渗透剂改善药物本身分子量大、极性高、水溶性大等不易吸收的特性。促进药物经皮渗透并达到治疗所需的血药浓度。由于犬类皮肤结构与人皮肤结构存在差异，原配方中乙醇作为促渗剂对于犬类皮肤有一定的刺激性，容易引起过敏、瘙痒、抓挠患病部位而使药效丧失。所以本次课题摒弃了一般外用制剂中乙醇作为渗透剂，而采用氮酮。氮酮作为市面上最常用的促皮渗透剂，应用范围较广，无毒无害、安全性高，有利于亲水性凝胶剂的渗透。能够避免肝脏首过作用，充分发挥凝胶剂释药快的特性。经正交试验探究，犬用环丙沙星凝胶剂的最终配比为:1%卡波姆940、0.3%环丙沙星、0.1%尼泊金丙酯、5%甘油、6%氮酮，用适量三乙醇胺调节pH值至7左右。对确定最佳处方配比的环丙沙星凝胶剂进行制备并通过对凝胶剂稳定性、刺激性等的考查，本制剂的外观性状稳定，质地均匀细腻，涂展性好，综合得分为8.2分。研究结果表明与正交试验结果相似，确定该凝胶剂制备方法可行，且该处方比重复性较好、可行性强。希望实验筛选出的处方可以为犬用环丙沙星凝胶剂的进一步研究提供一定的方法和依据。参考文献薛占永.北京地区犬细菌性皮肤病主要病原菌(需氧与兼性厌氧)的分离鉴定与药敏试验[A].中国畜牧兽医学会兽医外科学分会、中国畜牧兽医学会小动物医学分会.全国兽医外科学第13次学术研讨会、小动物医学第1次学术研讨会暨奶牛疾病第3次学术讨论会论文集[C].中国畜牧兽医学会兽医外科学分会、中国畜牧兽医学会小动物医学分会:,2006:4.周彤.复方紫草凝胶剂的制备与研究[D].天津工业大学,2017.张宁,徐艳明,