实验七.血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳分析浅谈

血清脂蛋白

琼脂糖凝胶电泳分析

【目的要求】1.掌握琼脂糖凝胶电泳别离血清脂蛋白的原理,掌握正常人血浆脂蛋白的分类。2.熟悉琼脂糖凝胶电泳的特点和操作要点。3.了解电泳带中脂蛋白显色特点1整理ppt【实验原理】

琼脂在化学上是由琼脂糖和琼脂胶组成的复合物，为一种含硫酸根、带负电荷的多糖类物质。琼脂是直链多糖，它由D-半乳糖和3，6脱水L-半乳糖的残基交替排列组成。琼脂糖主要通过氢键形成凝胶。电泳时，因为凝胶中含水量大〔98～99%〕，近似自由电泳，固体支持物的影响较少，故电泳速度快、区带整齐。而且由于琼脂糖不含带电荷的基团，电渗影响很小，是一种良好的电泳材料，别离效果较好。血清中脂类物质均与载脂蛋白结合成水溶性脂蛋白形式存在。各种脂蛋白所含载脂蛋白的种类及数量不同，因而不同脂蛋白颗粒大小相差很大。因此，以琼脂糖凝胶为支持物，在电场中可使各种脂蛋白颗粒分开。琼脂糖凝胶电泳别离血清脂蛋白方法简单。将血清脂蛋白用脂类染料苏丹黑〔或油红等〕进行预染。再将预染过的血清置于琼脂糖凝胶板上进行别离。通电后，可以看到脂蛋白被分成三条区带，从负极到正极依次为β脂蛋白〔最深〕、前β脂蛋白〔最浅〕及α脂蛋白〔比前β脂蛋白略深〕，在原点处应无乳糜微粒。2整理ppt【实验器材】1.电泳仪、电泳槽2.载玻片3.台式离心机3整理ppt【实验操作】

1.预染血清

血清0.2ml中加苏丹黑色液0.02ml，混合置37℃水浴中染色30分钟，离心〔2，000转/分〕5分钟。2.制备琼脂糖凝胶板

将已配制好的0.50%琼脂糖凝胶于水浴中加热融化，用吸管吸取约3ml凝胶溶液浇注在载玻片上，立即放上“桥〞，静置待其凝固后，小心取下“桥〞。3.电泳

将凝胶板平行放入电泳槽中，加样孔端置负极。用四层滤纸于巴比妥缓冲液浸湿，然后轻轻盖贴在凝胶板两端，滤纸的另一端那么浸于电泳槽内的巴比妥缓冲液中。接通电源后低压加样，加样完后电压调为120～130V。经电泳35～50分钟，即可见到别离的区带。4.如果需要保存电泳图谱，可将电泳后的凝胶板放入干胶机中制成干胶片。假设无干胶机，可用玻璃纸包好凝胶板〔连同载玻片〕，其上平铺多层吸水滤纸，滤纸上再压上书等重物，吸干凝胶中的水分。也可将凝胶板先放入清水中浸泡脱盐2小时，然后放烘箱〔80℃左右〕中烘干，但应陋随时注意温度的变化以及凝胶的脱水程度，以防止凝胶在脱水过程中龟裂。4整理ppt【本卷须知】1.预染血清与温度有关，低温着色慢，高温着色快，37℃较为适宜。2.浇注琼脂糖凝胶板要尽量使厚薄均一，否那么会影响脂蛋白的别离效果。3.将凝胶板放入电泳槽中，应切记与电力线平行、样品端置负极、搭桥滤纸不能搭在样品上。4.制备干胶时，要严控制脱水的温度和速度，防止脱水时温度过高、速度太快引起凝胶收缩龟裂。5整理ppt【思考题】

1.琼脂糖凝胶电泳有哪些操作要点？2.在不同的实验方法〔超速离心、琼脂糖凝胶电泳、PAGE〕中，正常人血清脂蛋白如何分类，电泳后的相对位置及其与超速离心法的对应关系？3.各种脂蛋白的功能？为什么正常人血清脂蛋白电泳时见不到乳糜微粒区带？6整理ppt【正常参考值】乳糜微粒〔CM〕

0～0%

β－脂蛋白〔β-LP〕〔LDL为主〕

50～