替米考星对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌病的治疗效果

替米考星对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌病的治疗效果

替米考星是泰乐菌素的合成衍生物。这是一种含有泰乐菌素的新领域磺类动物。它具有与泰乐菌素相似的结构和抗菌谱。国内外研究均表明,替米考星对革兰氏阳性菌及某些阴性菌、支原体、螺旋体等均有良好的抑制作用,对胸膜肺炎放线杆菌、巴氏杆菌及支原体具有比泰乐菌素更强的抗菌活性。由于其具有特殊的抗菌活性和药物动力学特征,在国外已被广泛应用于畜禽感染性疾病,特别是呼吸道疾病和乳房炎的预防与治疗。近年来国内已成功的开发并研制出了国产替米考星。通过抑菌试验和药代学试验证实该药与国外产品效果相当。为进一步研究国产替米考星拌料给药对人工感染胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae)的治疗效果,为临床使用提供依据,我们在断奶仔猪上进行了下面的试验,现将试验结果报告如下。1材料和方法1.1试验药物1.1.1试验药物磷酸替米考星,纯度85.47%,白色晶体,味苦,易溶于水,浙江海正药业集团股份有限公司提供。1.1.2标准药物土霉素粉剂,含量为100%,浙江海宁权力制药有限公司生产,批号20031107。1.2猪面膜肺炎疫苗健康约克夏×内江杂种断奶仔猪(30日龄)67头,雌性34头,雄性33头,体重6kg～7kg,均未去势,未曾接种猪胸膜肺炎放线杆菌疫苗,甘肃省渭源县牲畜交易中心购入。试验前进行健康观察7d。1.3玉米小米粉参照家畜营养需求标准配制不含任何抗菌药物的基础日粮(玉米60kg、麸皮30kg、黑面9.3kg、食盐0.5kg、多种维生素0.2kg)。分别在基础日粮中加入不同量的试验药物作为试验各组日粮。1.4细菌和血清猪胸膜肺炎放线杆菌地方毒株及诊断血清,中国农业科学院兰州兽医研究所提供。1.5培养基猪胸膜肺炎放线杆菌专用培养基(APP培养基)。1.6测试方法1.6.1面膜肺炎放线杆菌分离从试验猪中随机抽取10头,逐头鼻黏膜采样,进行胸膜肺炎放线杆菌分离,并用标准血清做玻片凝集反应,以确认试验猪有无胸膜肺炎放线杆菌感染。1.6.2两组治疗方案试验前每头猪称重并按雌雄、体重均衡搭配,分成6个组,每组10头。第1组～第6组依次为健康对照组、感染对照组、替米考星低剂量治疗组(100mg/kg饲料)、替米考星中剂量治疗组(200mg/kg饲料)、替米考星高剂量治疗组(400mg/kg饲料)、土霉素药物治疗对照组(600mg/kg饲料)。试验各组给药及处理情况见表1。1.6.3观察指标及血清学鉴定取健康猪7头随机分为3个组,用不同菌数的猪胸膜肺炎放线杆菌菌液分别滴鼻接种各组猪,接种后观察记录各组猪临床表现,如精神状态,食欲,呼吸等变化及死亡时间等情况,连续观察7d,对死亡猪剖检并取肺、肝脏涂APP琼脂平皿检查是否有猪胸膜肺炎放线杆菌,同时用标准血清进行血清学鉴定。最后根据每组猪发病及死亡情况,综合确定最小致死量。1.6.4养基、母种的培养取冻干菌种开启后,接种于APP液体培养基中,37℃培养18h涂片镜检纯后,接种APP斜面培养基置37℃温箱中培养18h后取出,作为母种置4℃冰箱中备用。攻毒前从斜面保存的母种挑取1环～2环耳圈,接种APP液体培养基中,37℃培养18h涂片镜检纯粹后,接种瓶装APP液体培养基,37℃培养18h后,将菌液用APP液体培养基进行稀释,平皿计数,根据计数结果决定攻菌量。1.6.5饲养水解压监测第2组～第6组猪用猪胸膜肺炎放线杆菌菌液(含菌量为6.9×108cfu/mL)滴鼻接种5mL/头,第1组滴鼻接种生理盐水5mL/头。接种后随时观察,当部分猪出现体温轻微升高,气喘,精神稍沉郁时,即给第3组～第5组猪开始分别饲喂加有替米考星100,200,400mg/kg的饲料;第6组供给加有土霉素600mg/kg的饲料。第1组和第2组猪饲喂不含任何药物的基础日粮。连续饲喂7d后停止饲喂含药饲料,改饲喂基础日粮饲料,继续观察至第15天。1.7发病猪的形态观察人工感染后观察每头猪的临床表现,如精神状态,食欲,呼吸等变化情况。称重并记录试验开始和结束时每头猪的体重。记录各组猪的发病数及死亡数。对死猪进行尸体剖检,观察肺、肝、脾、心脏、肠系膜等的变化。对所有死亡猪及试验结束后宰杀猪取肝、脾涂APP琼脂平皿培养基,37℃培养20h～48h,检查是否有细菌生长,对检出细菌,观察菌落形态,挑取典型菌落进行涂片镜检,以检查是否为猪胸膜肺炎放线杆菌。1.8评估和评估绩效1.8.1猪面膜肺炎放线杆菌感染死亡鉴定人工感染后猪出现典型的胸膜肺炎症状并死亡,取肝、脾涂APP琼脂平皿培养基分离出猪胸膜肺炎放线杆菌,即判定为感染死亡。各组死亡猪头数比各组猪总头数即为死亡率。1.8.2现临床症的判定试验猪人工感染后未出现临床症状或出现临床症,但治疗后耐过而未死亡的,亦判定为有效。试验结束后每组存活猪头数占每组猪总头数的比例即为有效率。1.8.3复兴率计算试验开始和结束时每组猪的平均体重,以健康对照组的增重率为100%,计算其它各组猪的相对增重率。1.8.4数据分析和处理根据试验结果用计算机统计软件(SPSS8.0)计算各组猪死亡率、有效率和相对增重率之间的差异显著性。2结果2.1计算的最小致死量最小致死量测定结果见表2。2.2急性死亡猪5h剖检变化仔猪接种后8h左右,各组猪特别是感染对照组部分猪,开始出现体温轻微升高,精神沉郁,至36h出现呼吸急促,体温升高,站立不稳,不食或犬坐式,严重时出现,张口伸舌,口吐血沫,最后倒地死亡。对急性死亡猪(50h)剖检主要表现为,肝脏充血,呈暗红色并有灰白色结节,脾肿大、柔软、暗黑色,胸腔、心包出现红色渗出液,两侧或一侧肺气肿充血,呈紫红色,切面似肝,并有纤维素性物质附于表面,有些有黄色渗出液。部分猪肠系膜淋巴结肿大,充血严重,呈紫红色。对慢性死亡猪(74h以上)剖检主要表现为,双侧或一侧肺出现硬实的肺炎区,表面有结缔组织化的粘连性附着物,肺炎病灶呈坏死性或化脓性,肝略肿大,表面有坏死点,肠系膜淋巴结轻度肿大,出血,呈暗红色。取肺、肝、脾涂APP琼脂平皿分离到大量猪胸膜肺炎放线杆菌。2.3猪瞳肺炎放线杆菌感染对照组猪剖检变化从临床表现看,4个组给药的猪在接种后发病猪的数量明显比感染对照组的少,出现咳嗽气喘等症状,均明显的迟于感染对照组,死亡猪统计结果表明,试验4个组的猪死亡时间明显迟于感染对照组。病死猪剖检可见,病理变化与感染对照组猪基本类似,但病理损害程度较感染对照组轻,取肺、肝脾涂平皿均检出猪胸膜肺炎放线杆菌。详见表4～表6。试验结束后扑杀各组试验猪,剖检发现感染对照组1头猪出现一侧肺结缔组织化、轻微坏死,肺脏与胸腔壁粘连,肝脏略大,取肺、肝脾涂平皿检出少量猪胸膜肺炎放线杆菌,表明该存活猪为慢性感染,体内带菌,具有传染性,该猪后期生长发育不好。试验4个组及健康对照组猪,扑杀后剖检,各脏器均未见任何病理变化,取肺、肝脾涂平皿均未检出任何细菌(表5)。3替米考星的临床治疗效果3.1猪传染性胸膜肺炎(porcinecontagiouspeuropneumoniae),又称猪副溶血嗜血杆菌病,病原体为胸膜肺炎放线杆菌,该病现在几乎遍布所有的养猪国家。我国从1988年确定有该病流行,并陆续有疫苗研究报道。猪胸膜肺炎放线杆菌对大多数常用药物不敏感,据报道只有丁胺卡那霉素、羧苄青霉素等几种药物对其高度敏感。近年来该病的发生呈上升趋势,已成为规模化养猪场的五大疫病之一,发病率和死亡率分别在8.5%～100%和0.4%～100%之间,严重地威胁着规模化养猪业的安全及产业化进程。替米考星具有广谱的抑菌活性,据我们试验结果和国外文献报道,对猪胸膜肺炎放线杆菌的MIC为2μg/mL～4μg/mL。美国和欧洲一些国家已应用替米考星200mg/kg～400mg/kg料拌料给药预防和治疗由猪胸膜肺炎放线杆菌和多杀性巴氏杆菌引起的猪肺炎并取得良好效果,本试验结果亦证实了这一点。国产替米考星的研制成功,将为预防和治疗该病的发生,促进我国规模化养猪业的发展发挥重要的作用。3.2替米考星拌料给药治疗试验统计结果表明,替米考星高、中剂量组的发病率及死亡率均极显著的低于感染对照组(P<0.01);有效率极显著的高于感染对照组(P<0.01)。替米考星高、中剂量组有效率均显著高于替米考星低剂量组及土霉素组(P<0.01)。但替米考星高、中剂量组的死亡率、有效率之间均无统计学差异(P>0.05)。表明国产替米考星拌料给药对治疗人工感染猪胸膜肺炎放线杆菌具有明显的效果,可降低死亡率,提高成活率,减少人工感染引起的病理损伤。作为临床治疗推荐剂量为200mg/kg饲料,连用7d。3.3替米考星拌料饲喂增重效果统计结果表明,替米考星高、中剂量组的增重效果均显著高于健康及感染对照组(P<0.01)。替米考星高剂量组的增重效果显著高于土霉素组(P<0.05),但替米考星高、中、低剂量组三者之间的增重率无显著差异(P>0.05),这表明替米考星拌料给药除具有治疗效果外,还对仔猪具有明显的增重效果,而且增重效果与替米考星在饲料中的添加剂量成正比。3.4临床症状观察、病理剖检及细菌学检查结果表明,4个试验组的猪在接种后出现明显临床症状的猪数量明显的比感染对照组的少,临床症状发展进程,均明显的比感染对照组缓慢。统计结果表明,4个试验组的猪死亡时间均明显迟于感染对照组。病死猪剖检可见,病理变化与感染对照组猪基本类似,但病理损害程度较感染对照组轻,所有死亡猪取肺、肝脾涂平皿均检出猪胸膜肺炎放线杆菌。对试验结束后存活猪剖检结果表明,感染对照组1头存活猪出现一侧肺结缔组织化坏死,肝脏略大,肠系膜淋巴结轻微肿大,取肺、肝脾涂平皿检出少量猪胸膜肺炎放线杆菌,表明慢性感染猪,体内带菌,且具有传染性。但4个试验组及健康对照组猪,扑杀后剖检,各脏器均未见任何病理变化,取肺、肝脾涂平皿均未检出任何细菌。结果表明,替