高效毛细管电泳法对四种抗生素的测定

高效毛细管电泳法对四种抗生素的测定

高性能毛细管电脉法（hplc）广泛用于中医成分分析、手性药物分离、药物浓度测定、临床诊断和生物化学领域。然而，由于缺乏定性和定量差，采用毛细管电泳法（ce）并不适用。随着应用和机器技术的发展，ce的线性准确性和准确性接近hplc。2000年的药店将ce法写为一个附件。对于大环内酯类抗生素（如盐酸大观素、硫酸内莫林星、血红蛋白、酪氨酸等），由于其自身的官方能够团簇中没有紫外吸收，因此很难分析化学容量。采用微生物价格法测定含量[1.4]。价格法操作复杂，影响因素多，实验周期长，相关物质和其他成分不选择性，不能真正反映药物的含量。对于这些药物的新的分析和评价方法非常重要。作者选择了四种抗生药物进行分析，考察了电泳的抗性、定形成理和改进方法，并探索了药物分析的新形式。1实验1.1毛细管冲洗方法Biofocus3000型毛细管电泳仪(美国Biorad公司),可变波长紫外检测器,检测口位于负极端,配有工作站和486微机.毛细管柱为50μm(i.d.)×54.6cm(有效长度为50cm),河北永年光导纤维厂.毛细管冲洗方法:每次开机后用0.1mol/LNaOH溶液冲洗10min,蒸馏水冲洗5min,最后用运行缓冲液冲洗平衡10min.两次测定间用运行缓冲液冲洗毛细管3min.硼酸钠、盐酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氢氧化钠、磷酸均为分析纯.阿奇霉素对照品(97.6%)由太平洋药业提供.阿奇霉素样品为国产市售品;红霉素对照品(88.5%)由中国药品生物检定所提供;红霉素样品为国产市售品;盐酸大观霉素对照品由中国医学科学院医药生物研究所提供;盐酸大观霉素样品为市售品;硫酸奈替米星对照品由中国医学科学院医药生物研究所提供;硫酸奈替米星样品为市售品.1.2样品的加标试验(1)阿奇霉素的操作条件:运行缓冲液为40mmol/L磷酸二氢钠溶液,以磷酸调节pH至2.8,并以0.45μm的微孔滤膜过滤.操作电压为18kV;柱温20℃;以709kPa压力进样,每次进样7000Pa×10s;检测波长190nm.(2)红霉素的操作条件:运行缓冲液为30mmol/L磷酸氢二钠溶液,调节pH至4.8,并以0.45μm的微孔滤膜过滤.操作电压为18kV;柱温20℃;以709kPa压力进样,每次进样7000Pa×10s;检测波长190nm.(3)盐酸大观霉素的操作条件:运行缓冲液为10mmol/L硼砂溶液(pH=9.3),并且以0.45μm的微孔滤膜过滤.操作电压为18kV;柱温25℃;以709kPa压力进样,每次进样7000Pa×10s;检测波长192nm.(4)硫酸奈替米星操作条件:运行缓冲液为10mmol/L磷酸氢二钠溶液(pH=4.4),该溶液和样品溶剂经0.45μm微孔滤膜过滤后使用.操作电压18kV;毛细管温度25℃;以709kPa压力进样,每次进样7000Pa×10s;检测波长192nm.(5)操作条件的选择:对4种抗生素分别以不同浓度的Tris、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硼砂在不同的pH下试验,通过考察迁移时间、峰型、峰面积的重现性等确定最佳操作条件.1.3方法回收率的测定采用加样回收率法;样品的定量采用外标法.2结果与讨论2.1麻黄的回归方程实验得到阿奇霉素的回归方程为:Y=3508X-38,V=0.9993,n=5;红霉素的回归方程为:Y=4027.0X+30.0,V=0.9999,n=5;盐酸大观霉素的回归方程为:Y=8548.0X-239.5,V=0.9994,n=3.硫酸奈替米星的回归方程为:Y=5176.9X+37.6,V=0.9998.2.2加样回收率阿奇霉素(A)的平均加样回收率为98.9%(n=5),5次试验结果的TRSDA=1.3%.红霉素(B)的平均加样回收率为100.8%(n=5),5次试验结果的TRSDB=1.4%.盐酸大观霉素(C)的平均加样回收率为101.0%(n=5),5次试验结果的TRSDC=1.5%.硫酸奈替米星(D)的平均加样回收率为99.2%(n=5),5次试验结果的TRSDD=0.8%.2.3样品测定结果分别以HPCE外标法和效价法对3批样品含量进行测定,结果见表1～表4.2.4测定结果的比较由表可知,本法和效价法测定结果相差较大,其原因是效价法的操作过程复杂,影响因素多(如实验用菌、缓冲液的pH值和浓度以及培养温度等),其中任何一个环节都可能造成误差;效价法没有分离能力,选择性差,结果可能比实际含量高.而HPCE法的结果为同一测定条件下由对照品和样品的峰面积比较而得出的,在保证重复性的前提下,测定结果更加可靠.这4种抗生素的紫外最大吸收波长都在190nm附近,属于末端吸收区,由于有机试剂强烈的末端吸收,无法用HPLC方法进行紫外检测.而HPCE的分离过程中不使用有机溶剂,从而排除了试剂干扰.在所用的实验条件下,线性关系和回收率均获得了很好的结果,出峰时间短,3批