DB22-T 3283-2021 猪血凝性脑脊髓炎病毒检测 TaqMan荧光定量PCR法_第1页
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文档简介

11.220

41DB22 22/T

3283—2021猪血凝性脑脊髓炎病毒检测TaqMan

PCR

quantitative

assay

hemagglutinatingencephalomyelitis

吉林省市场监督管理厅

DB22/T

2021前 言本文件按照

GB/T

1.1—2020

《标准化工作导则

部分:标准化文件的结构和起草规则》的DB22/T

2021猪血凝性脑脊髓炎病毒检测 TaqMan

荧光定量

PCR

GB

19489实验室

virus,PHEVPHEV(Coronaviridae)、

根据PHEV

发出的荧光信号被淬灭基团所吸收,仪器检测不到荧光信号;而反应进行到延伸阶段时,Taq酶发挥

所有培养物和废弃物的处置应符合

GB

19489

DB22/T

2021

M-MLV

200

U/L,-20

保存。

50

U/L,-20

dNTP

2.5

75

-20

预冷。

TRIzol

保存。6.10

缓冲液

6.11 10

6.12

6.13 阴性对照样品,正常小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a

6.14

mmol/L,-20

冰箱,4

-70

高速冷冻离心机,可控温至

微量移液器,2

L、10

L、50

L。

RNase

DB22/T

2021

样品在

24

h,若长期保存应置于

-70

9.1

称取

1.0

0.2

mL

TRIzol

1.5

RNase

RNase

9.1.1

mL

TRIzol

15

10

加入

预冷氯仿(6.6),振荡

15

10

min。

RNase

30

min。

加入

mL

75

条件下,高速冷冻离心机(7.2)12

000

r/min

min。9.1.10

9.1.11 弃上清,滤纸吸干残余液体,室温干燥

min。9.1.12

2

溶解,超微量紫外分光光度计(7.6)测定核酸浓度。冰浴保存备用。

-70

冰箱。

模板制备按表

s,42

水浴锅(7.7)

10

DB22/T

2021设定

PCR

管盖后,500

30

s。

PCR

PCR将9.3中离心后的PCR反应管(7.9)放入实时荧光定量PCR扩增仪(7.4)内,记录样品摆放顺序。

min;——第二阶段,预变性

95

min;——第三阶段,95

15

s、60

30

s,40

个循环。荧光收集设置在每次循环

60

30

10.2.1

10.2.2

10.2.3

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