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文档简介
11.220
41DB22 22/T
3283—2021猪血凝性脑脊髓炎病毒检测TaqMan
PCR
quantitative
assay
hemagglutinatingencephalomyelitis
吉林省市场监督管理厅
DB22/T
2021前 言本文件按照
GB/T
1.1—2020
《标准化工作导则
部分:标准化文件的结构和起草规则》的DB22/T
2021猪血凝性脑脊髓炎病毒检测 TaqMan
荧光定量
PCR
法
GB
19489实验室
virus,PHEVPHEV(Coronaviridae)、
根据PHEV
发出的荧光信号被淬灭基团所吸收,仪器检测不到荧光信号;而反应进行到延伸阶段时,Taq酶发挥
所有培养物和废弃物的处置应符合
GB
19489
DB22/T
2021
M-MLV
200
U/L,-20
保存。
50
U/L,-20
dNTP
2.5
75
-20
预冷。
TRIzol
保存。6.10
缓冲液
6.11 10
6.12
6.13 阴性对照样品,正常小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a
6.14
mmol/L,-20
冰箱,4
-70
高速冷冻离心机,可控温至
微量移液器,2
L、10
L、50
L。
RNase
DB22/T
2021
样品在
24
h,若长期保存应置于
-70
9.1
称取
1.0
0.2
mL
TRIzol
1.5
RNase
RNase
9.1.1
mL
TRIzol
15
10
加入
预冷氯仿(6.6),振荡
15
10
min。
RNase
30
min。
加入
mL
75
条件下,高速冷冻离心机(7.2)12
000
r/min
min。9.1.10
9.1.11 弃上清,滤纸吸干残余液体,室温干燥
min。9.1.12
2
溶解,超微量紫外分光光度计(7.6)测定核酸浓度。冰浴保存备用。
-70
冰箱。
模板制备按表
s,42
水浴锅(7.7)
10
DB22/T
2021设定
PCR
管盖后,500
30
s。
PCR
PCR将9.3中离心后的PCR反应管(7.9)放入实时荧光定量PCR扩增仪(7.4)内,记录样品摆放顺序。
min;——第二阶段,预变性
95
min;——第三阶段,95
15
s、60
30
s,40
个循环。荧光收集设置在每次循环
60
30
10.2.1
10.2.2
10.2.3
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