培养基的制备和细菌的接种-新乡医学院课件

培养基的制备和细菌的接种-新乡医学院概念培养基是人工配制的微生物生活环境，其主要用途是繁殖及分离接种微生物，传代或保存微生物，鉴别微生物的类属，研究微生物的生理及生化特性，制造菌苗、疫苗或其他微生物制剂等。其营养成分包括微生物生长所需要的水分、碳源、氮源、无机盐及某些生长因子（维生素、辅酶）等。分类主要用于增菌用于检测动力及保存菌种用于分离鉴定细菌分类双糖铁培养基SS培养基普通琼脂培养基血液琼脂培养基庖肉培养基培养基的制备程序调配过滤矫正pH（7.0-7.6） 分装过滤灭菌（121.3℃，20-30分钟）鉴定是否有菌放入冰箱冷藏备用因高压之后pH值会下降0.1左右，所以矫正pH时应比所需的pH高鉴定是否有菌可将培养基置于37℃培养24小时，然后观察肉汤培养基制作方法1.将已去筋膜及脂肪并经绞碎的鲜牛肉50克，加蒸馏水100ml，放入冰箱中过夜。2.加热煮沸半小时至一小时后，用数层纱布或滤纸过滤，滤液用蒸馏水补足其量为100ml。3.于滤液中加入氯化钠0.5克，蛋白胨1克，磷酸氢二钾0.1克，加热使之完全溶化。4.测定酸碱度并调至pH7.6，必要时用滤纸过滤。5.按需要分装于试管或烧瓶内，加棉塞，置高压蒸汽灭菌器内，经121.3℃、20-30分钟灭菌。6.灭菌后置37℃温箱孵育24小时，无杂菌生长，即可应用或放冰箱备用。液体培养基加入1-2%的琼脂为固体培养基，加入0.5%琼脂为半固体培养基。固体培养基加入血液即为血平板（营养培养基）。细菌的接种普通琼脂培养基：分区划线接种半固体培养基：穿刺接种液体培养基接种细菌的接种分区划线划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂.第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占面积的1/4—1/5.划线为连续划线,不能间断.应占满平皿.划线不能交叉重复.每次划完后接种环应灭菌.生长现象的观察菌落：一个细菌不断分裂而成的细菌群体称之。在普通琼脂平板上观察菌落的形态、大小、表面、边缘、湿度、透明度；在血平板上还要观察溶血情况和色素等。细菌在半固体培养基上生长主要看是否有鞭毛，即观察细菌的运动。细菌在液体培养基上的生长现象：混浊生长（大多数细菌）；沉淀生长（链球菌）；膜样生长（专性需氧菌，如结核分枝杆菌、枯草杆菌）。

细菌的生化反应新乡医学院微生物学教研室细菌的生化反应试验：检测细菌对各种基质的代谢作用及代谢产物，借以区别和鉴别细菌种类的生化试验，称为细菌的生化反应试验。细菌的生化反应是鉴别细菌的重要依据。生化反应碳源和氮源利用试验各种酶类试验抑菌试验碳水化合物代谢试验蛋白质和氨基酸代谢试验糖发酵试验甲基红试验V-P试验硫化氢试验吲哚试验枸橼酸盐利用试验一、糖发酵试验

[原理]细菌对糖类的分解能力各异。有的细菌能分解某些糖而产酸产气，有的细菌只能产酸，有的不能分解。因此，可根据各种细菌对糖类分解能力的不同来鉴定细菌的种、属。[方法]在未接种细菌前，糖发酵管培养基应呈澄清紫色，倒立小管内无气泡，接种细菌后置37℃温箱培养18－24小时，观察结果。〔结果〕观察结果时，先确定细菌是否生长，生长时培养基变浑浊。如细菌发酵糖类产酸，则培养基中指示剂（溴甲酚紫）变为黄色，以“+”表示。如发酵糖类产酸产气时，则培养基除变黄外，在倒置的小管中有气泡，用“”表示。如不发酵糖类，培养基仍为紫色，小管内无气泡，以“-”表示。大肠杆菌伤寒杆菌副伤寒杆菌葡萄糖+乳糖－－二、靛基质试验(吲哚试验）

[原理]某些细菌含色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸而生成靛基质。后者与对二甲基氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈红色。[方法]将大肠杆菌、产气杆菌分别接种在富含色氨酸的蛋白胨水培养基中，37℃培养24－48小时取出，在上述细菌的培养液内各加入靛基质试剂数滴，略加振摇，静止半分钟后，在两液面接触处出现玫瑰红色环者，为靛基质试验阳性，以“+”表示；不出现红色环者为阴性，以“-”表示。[结果]大肠杆菌为阳性；产气杆菌为阴性。三、硫化氢产生试验

[原理]某些细菌能分解蛋白质中的含硫氨基酸，如半胱氨酸、甲硫氨酸，而生成硫化氢。硫化氢遇培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀物。[方法]分别穿刺接种大肠杆菌、变形杆菌至两管醋酸铅培养基中。37℃孵育24小时后观察，沿穿刺线部位呈黑褐色为阳性，表明有硫化氢产生，以“+”表示，不变色者为阴性，以“-”表示。[结果]大肠杆菌：-；变形杆菌：+四、甲基红试验产气杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸，经脱羧后生成中性乙酰甲基甲醇，培养液的pH大于5.4，甲基红指示剂呈橘黄色，为甲基红试验阴性。大肠杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸，不能生成乙酰甲基甲醇，培养液pH小于4.5，甲基红指示剂呈红色，为甲基红试验阳性。五、V－P试验产气杆菌能使丙酮酸脱羧生成中性的乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中的分子氧氧化生成二乙酰，二乙酰与培养基中的含胍基的化合物反应，生成红色化合物，是VP试验阳性，大肠杆菌不能产生乙酰甲基甲醇，为阴性。六、枸橼酸盐利用试验某些细菌能利用枸橼酸盐作为碳源，在仅含枸橼酸盐作为唯一碳源的培养基中生长，分解培养基中的铵盐生成氨，培养基变为碱性，指示剂由绿色变为深蓝色是枸橼酸盐利用试验阳性（产气杆菌），反之培养基不变色是为阴性（大肠杆菌）。七、IMViC试验是一个组合试验靛基质试验（I）、甲基红试验（M）、V－P试验（V）和枸橼酸盐利用试验（C）可缩写为IMViC试验。大肠杆菌的结果是＋＋－－，产气肠杆菌的结果是－－＋＋。作业简述三种主要细菌接种方法的要点绘制平板划线接种法示意图下次内容内毒素的检测小测试（笔试，请自带纸张）多种

肺炎细菌均可引起大叶性肺炎，但绝大多数为肺炎链球菌，其中以Ⅲ型致病力最强。肺炎链球菌为革兰阳性球菌，有荚膜，其致病力是由于高分子多糖体的荚膜对组织的侵袭作用。少数为肺炎杆菌、金黄*色葡萄球菌、溶血性链球菌、流感嗜血杆菌等。肺炎链球菌为口腔及鼻咽部的正常寄生菌群，若呼吸道的排菌自净功能及机体的抵抗力正常时，不引发肺炎。当机体受寒、过度疲劳、醉酒、感冒、糖尿病、免疫功能低下等使呼吸道防御功能被削弱，细菌侵入肺泡通过变态反应使肺泡壁毛细血管通透性增强，浆液及纤维素渗出，富含蛋白的渗出物中细菌迅速繁殖，并通过肺泡间孔或呼吸细支气管向邻近肺组织蔓延，波及一个肺段或整个肺叶。大叶间的蔓延系带菌的渗出液经叶支气管播散所致。编辑本段临床表现多数起病急骤，常有受凉淋雨、劳累、病毒感染等诱因，约1/3患病前有上呼吸道感染。病程7~10天。（一）寒战、高热：典型病例以突然寒战起病，继