基因治疗的原理与研究概况课件

基因治疗的原理与研究概况2基因治疗分类体细胞(somaticcell)基因治疗生殖细胞(germline)基因治疗只限于某一体细胞的基因的改变只限于某个体的当代对缺陷的生殖细胞进行矫正当代及子代2024/1/731.基因治疗的策略

内容提要2.基因转移技术

4.治疗基因的受控表达3.基因干预5.基因治疗的应用研究2024/1/74

一、基因治疗的策略2024/1/75

(一)基因置换(genereplacement)

定义:指将特定的目的基因导入特定细胞,通过定位重组,导入的正常基因,以置换基因组内原有的缺陷基因。

目的:将缺陷基因的异常序列进行桥正。对缺陷基因的缺陷部位进行精确的原位修复,不涉及基因组的任何改变。2024/1/76基因同源重组技术又称为基因打靶(genetargeting)定向整合的条件:转导基因的载体与基因组DNA具有相同的序列。带有目的基因的载体就能找到同源重组的位点,进行部分基因序列交换。基因同源重组技术2024/1/77要实现基因置换,需要采用同源重组技术使相应的正常基因定向导入受体细胞基因组的缺陷部位。定向导入的发生率约1/100万,采用胚胎干细胞培养的方法,同源重组的检出率最高可达1/10。2024/1/78(二)基因添加

基因添加(geneaugmentation):通过导入外源基因使靶细胞表达其本身不表达的基因。类型:在有缺陷基因的细胞中导入相应的正常基因,而细胞内的缺陷基因并未除去,通过导入正常基因的表达产物,补偿缺陷基因的功能;向靶细胞中导入靶细胞本来不表达的基因,利用其表达产物达到治疗疾病的目的。2024/1/79(三)基因干预基因干预(geneinterference):采用特定的方式抑制某个基因的表达,或者通过破坏某个基因的结构而使之不能表达,以达到治疗疾病的目的。2024/1/710(四)自杀基因治疗自杀基因治疗:恶性肿瘤基因治疗的主要方法之一。原理:将“自杀”基因导入宿主细胞中,这种基因编码的酶能使无毒性的药物前体转化为细胞毒性代谢物,诱导靶细胞产生“自杀”效应,从而达到清除肿瘤细胞的目的。2024/1/711自杀基因的作用机制

2024/1/712☻TK/GCV

单纯疱疹病毒(herpssimplexvirus,HSV)Ⅰ型胸苷激酶(thymidinekinase,tk)基因编码胸苷激酶,特异性地将无毒的核苷类似物丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)转变成毒性GCV三磷酸核苷,后者能抑制DNA聚合酶活性,导致细胞死亡。☻CD/5-FC

大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(cytosinedeaminase,CD)基因,在细胞内将无毒性5-氟胞嘧啶(5-FC)转变成毒性产物5-氟尿嘧啶(5-FU)。1.自杀基因系统2024/1/713

旁观者效应:“自杀基因”导入后,不仅使转导了“自杀基因”的肿瘤细胞在用药后被杀死,而且与其相邻的未转导“自杀基因”的肿瘤细胞也被杀死。

2.旁观者效应2024/1/714

(五)基因免疫治疗通过将抗癌免疫增强的细胞因子或MHC基因导入肿瘤组织,以增强肿瘤微环境中的抗癌免疫反应。2024/1/715二、基因转移技术

2024/1/716基因治疗的两种途径载体目的基因invivoexvivo靶细胞2024/1/717

基因转移(genetransfer)技术:

1.病毒介导的基因转移2.非病毒介导的基因转移2024/1/718

1.病毒介导的基因转移系统

病毒载体介导的基因转移效率较高,因此它也是使用最多的基因治疗载体。据统计,有72﹪的临床实验计划和71﹪的病例使用了病毒载体,其中用得最多的是逆转录病毒载体。2024/1/719Retrovirus

(1)逆转录病毒

2024/1/7202024/1/721(1)两端各有一长末端重复序列LTR。

逆转录病毒前病毒的结构特点

(2)LTR由U3、R和U5三部分组成。(3)病毒有三个结构基因(4)5ˊ端LTR下游有一段病毒包装所必需的序列(ψ)及剪接供体位点(SD)和剪接受体位点(SA)。

(5)含有负链DNA转录的引物结合位点(PBS)和正链DNA转录的引物结合位点。

(1)在U3内有增强子和启动子;

(2)U3和U5两端分别有病毒整合序列(IS)

;(3)在R内还有poly(A)加尾信号。

(1)gag基因,编码核心蛋白和属特异性抗原;(2)pol基因,编码逆转录酶;(3)env基因,编码病毒外壳或包膜糖蛋白(包括外膜糖蛋白和穿膜蛋白)。

2024/1/722逆转录病毒介导的基因转移系统

──由两部分组成:

(1)逆转录病毒载体

(2)辅助细胞株(如PA317)2024/1/723Retroviralpackagingsystem2024/1/724

逆转录病毒载体的特点

①逆转录病毒包膜上env编码的糖蛋白,能够被许多哺乳动物细胞膜上的特异性受体识别,从而使逆转录病毒携带的遗传物质高效地进入靶细胞。

②逆转录病毒结构基因gag、env和pol的缺失不影响其他部分的活性。

③前病毒通过LTR高效整合至靶细胞基因组中,有利于外源基因在靶细胞中的永久表达。

④包装好的假病毒颗粒(携带目的基因的重组逆转录病毒载体)以出芽的方式分泌至辅助细胞培养的上清液中,易于分离制备。

2024/1/725

逆转录病毒载体的主要缺点

随机整合,有插入突变、激活癌基因的潜在危险;逆转录病毒载体的容量较小,只能容纳7kb以下的外源基因。2024/1/726

(2)腺病毒(adenovirus,AV)载体

腺病毒是一种大分子(36kb)双链无包膜DNA病毒。它通过受体介导的内吞作用进入细胞内,然后腺病毒基因组转移至细胞核内,保持在染色体外,不整合进入宿主细胞基因组中。

腺病毒是人类呼吸道感染的病原体,但目前尚未发现与肿瘤发生有关联。宿主细胞范围广,可感染分裂和非分裂终末分化细胞,如神经元等。2024/1/7272024/1/728腺病毒的优点1.基因导入效率高,对人类安全;2.宿主范围广;3.基因转导与细胞分裂无关;4.重组腺病毒可通过口服经肠道吸收、或喷雾吸入或气管内滴注;5.腺病毒载体容量较大,可插入7.5kb外源基因。2024/1/729

腺病毒载体缺点2.宿主的免疫反应导致腺病毒载体表达短暂。3.有两个环节可能产生复制型腺病毒。4.靶向性差。

1.不能整合到靶细胞的基因组DNA中。分裂增殖快的细胞,导入的重组病毒载体,随分裂而丢失的机会增多,表达时间相对较短。(1)腺病毒产生过程中与293辅助细胞内E1区序列发生同源重组;(2)腺病毒载体与被治疗的患者体内已感染的野生型腺病毒,甚至乳头瘤病毒、巨细胞病毒发生重组。2024/1/730

(3)腺病毒相关病毒载体腺病毒相关病毒(adenovirusassociatedvirus,AAV)是一类单链线状DNA缺陷型病毒。其基因组DNA小于5kb,无包膜,外形为裸露的20面体颗粒。AAV不能独立复制,只有在辅助病毒(如腺病毒、单纯疱疹病毒、痘苗病毒)存在时,才能进行复制和溶细胞性感染,否则只能建立溶源性潜伏感染。AAVVirusParticles2024/1/731StructureofAAVVirusGenomicDNAREP:病毒复制基因,CAP:编码衣壳蛋白的基因ITR:反向末端重复序列2024/1/732AAV的特点●以潜伏感染为主;●病毒基因组与细胞共存;●只要宿主细胞正常,AAV基因表达被抑制而维持潜伏状态;●若细胞受刺激,表达应激基因,AAV基因表达从而使AAV病毒复制;●产生子代病毒并释放,又感染新的细胞,建立新的潜伏状态。2024/1/733AAV载体是目前正在研究的一类新型安全载体,它对人类无致病性。AAV可以高效定点整合至人19号染色体的特定区域19q13.4中,并能较稳定地存在。可以持续稳定表达,并可受到周围基因的调控,兼具逆转录病毒载体和腺病毒载体两者的优点。

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AAV载体的缺陷:

AAV载体容量小，目前最多只能容纳5kb外源DNA片段；感染效率比逆转录病毒载体低。在40%-80%的成人中存在过感染，可能会引起免疫排斥。2024/1/735常用基因治疗载体

整合致病性感染细胞克隆容量逆转录病毒载体随机整合，效率高可能致病分裂细胞<7kb腺病毒载体不整合，可能丢失不致病分裂细胞、非分裂细胞

腺相关病毒载体定点整合(19号染色体特定区域)不致病分裂细胞、非分裂细胞<5kb<7.5kb2024/1/736

2.非病毒载体介导的基因转移系统

(1)脂质体介导的基因转移技术基本原理:利用阳离子脂质体单体与DNA混合后,可以自动形成包埋外源DNA的脂质体,然后与细胞一起孵育,即可通过细胞内吞作用将外源DNA(即目的基因)转移至细胞内,并进行表达。

2024/1/737脂质体介导的基因转移示意图2024/1/738

(2)受体介导转移技术

将DNA与细胞或组织亲和性的配体偶联,可使DNA具有靶向性。这种偶联通常通过多聚阳离子(如多聚赖氨酸)来实现。多聚阳离子与配体共价连接后,又通过电荷相互作用与带负电荷的DNA结合,将DNA包围,只留下配体暴露于表面。这样形成的复合物可被带有特异性受体的靶细胞吞饮,从而将外源DNA导入靶细胞。2024/1/739受体介导转移技术示意图2024/1/740

(3)基因直接注射技术不需要进行基因工程的繁琐操作,直接将裸露DNA注入动物肌肉或某些器官组织内。动物实验表明:接受注射外源DNA的小鼠能够按其基因编码合成相应的蛋白质,并能维持数月之久。1.将促进心脏血管生长的基因直接注入实验鼠的心脏,可使其心脏壁内毛细血管增加30﹪～40﹪;2.将胰岛素基因直接注入鼠骨骼肌细胞,能分泌糖尿病所缺少的胰岛素;3.肌内注射凝血因子Ⅸ基因,可产生血友病所需的凝血因子Ⅸ。2024/1/741

基因直接注射法的优点1.制备具有调控部件的质粒DNA重组体的技术较容易;2.排除病毒载体可能潜在的致癌性或其他副作用;3.导入的基因不需整合即可表达,避免了逆转录病毒载体导入整合后,一旦发生副作用不易中止或逆转的缺点;4.基因直接注射法可反复使用,而病毒载体则可能诱导体内免疫应答,致使反复治疗效果下降。2024/1/742三、基因干预

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(一)反义RNA1.反义RNA与基因表达调控利用反义RNA对体外培养的细胞进行基因表达调控,通常采用的方法有两种:

(1)体外合成反义RNA,直接作用于培养细胞,细胞吸收RNA后,发挥作用。

(2)构建一些能转录反义RNA的重组质粒,将这些质粒转入细胞中,转录出反义RNA而发挥作用。2024/1/744

反义RNA的关键技术问题:☻反义RNA进入靶细胞前的降解问题☻专一性转移问题:

2024/1/7452.受体介导反义RNA技转移术

①受体介导的RNA转移十分专一,而且效率高;②被转移的RNA是被保护的,与周围环境之间存在多聚赖氨酸的保护层,可以抵抗环境中的核酸酶的降解作用。

将脱唾液酸血清类粘蛋白(ASGP)与多聚赖氨酸(PL)共价连接,得到ASGP-PL复合物,成为运载核酸的工具。ASGP-PL反义RNA复合物可以专一性地被肝细胞表面的ASGP受体所识别,并吞噬到肝细胞中,反义RNA进入肝细胞后,可被逐渐释放出来发挥作用。

借助前述的受体介导基因转移方法,可以实现受体介导的反义RNA转移。2024/1/746

3.反义RNA的应用前景

受体介导的反义RNA基因治疗有其自身的优点,而在一定程度上补充了转基因治疗的不足。

(l)安全性高

(2)反义RNA设计和制备方便

(3)具有剂量调节效应

(4)能直接作用于一些RNA病毒反义RNA只作用于特异的mRNA分子,不改变所调节基因的结构。反义RNA分子无论怎样修饰,最终将在细胞内部被降解。

在治疗RNA病毒感染性疾病时,受体介导的反义RNA基因治疗比一般的DNA基因治疗有更大的优势。利用反义RNA可以直接作用于病毒RNA,阻断RNA病毒的繁殖。2024/1/747(二)干扰RNA

实验结果显示,有义链RNA(senseRNA)或反义链RNA(antisenseRNA)均能抑制线虫基因的表达,双链RNA比单链RNA更为有效。将特异的双链RNA注入线虫体内可抑制有同源序列的基因的表达。得到的结果是有义链RNA和反义链RNA都同样阻断基因表达途径。这与传统上对反义RNA技术的解释正好相反。而且其抑制基因表达的效率比反义RNA至少高2个数量级。1.RNA干扰现象

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是一种由双链RNA诱发的基因沉默现象。在此过程中,与双链RNA有同源序列的信使RNA(mRNA)被降解,从而抑制该基因的表达。对RNA干扰的认识来源于用线虫(C.elegans)和果蝇所进行的实验。2024/1/748

2.RNA干扰的机制

RNA干扰过程主要有2个步骤:

(1)小干扰性RNA(siRNA)(2)siRNA与细胞内的某些酶和蛋白质形成复合体,称为RNA诱导的沉默复合体(RNA-inducedsilencingcomplex,RISC)。该复合体可识别与siRNA有同源序列的mRNA,并在特异的位点将该mRNA切断。长双链RNA被细胞内的双链RNA特异性核酸酶Dicer切成21-23个碱基对的短双链RNA,称为小干扰性RNA(smallinterferingRNA,siRNA)。2024/1/749A.贾第鞭毛虫Dicer的晶体结构;B.

RNA干扰机制示意图

2024/1/750

1.体外化学合成;

2.用质粒载体或病毒载体可在细胞内稳定地生成。siRNA的产生2024/1/7513.RNA干扰的应用前景RNA干扰研究目前已经在功能基因组学研究、微生物学研究、基因治疗和信号转导等广泛领域取得了令人瞩目的进展,使其在医学、生物学领域的应用有着广阔的前景。2024/1/752(1)研究基因功能的新工具

由于RNA干扰技术具有高度的序列专一性和有效的干扰能力,可以使特定基因沉默或功能丧失,因此可以作为功能基因组学的一种强有力的研究工具。

RNA干扰技术能够在哺乳动物中抑制特定基因的表达,建立多种表型;抑制基因表达的时间可以控制在发育的任何阶段。

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(2)肿瘤的基因治疗

传统反义RNA技术诱发的单一癌基因的阻断,不可能完全抑制或逆转肿瘤的生长,而RNA干扰技术可以利用同一基因家族的多个基因具有一段同源性很高的保守序列这一特性,设计针对这一区段序列的双链RNA分子,只使用一种双链RNA即可以产生多个基因同时剔除的表型,也可以同时使用多种双链RNA而将多个序列不相关的基因同时剔除。RNA干扰技术可用于治疗有异常基因表达的恶性肿瘤。

K-RAS蛋白为肿瘤发生所必需,bcr/ab1融合基因与人白血病有关,用RNA干扰技术可以阻碍K-RAS蛋白的表达从而抑制肿瘤发生,或杀死有bcr/ab1的人白血病细胞系。通过RNA干扰抑制某些内源性基因的表达,能促进白血病细胞系的细胞凋亡或增加其对化疗药物的反应性。

应用RNA干扰技术成功地阻断了MCF-7乳腺癌细胞中一种异常表达的与细胞增殖分化相关的核转录因子基因Sp1的功能。2024/1/754

(3)病毒性疾病的基因治疗

RNA干扰可以被看成是一种与免疫系统类似的防御机制。用siRNA抑制人类免疫缺陷病毒(HIV)某些基因的表达,如P24、Vif、nef、tat或rev,阻碍HIV在细胞内复制。用RNA干扰技术抑制HIV的受体(CD4)或辅助受体(CXCR4或CCR5)在细胞内表达,可阻碍HIV感染细胞。也可通过RNA干扰抑制其他病毒在细胞内复制,如脊髓灰质炎病毒、人乳头状瘤病毒、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒等。2024/1/755

siRNA在病毒感染的早期阶段能有效地抑制病毒的复制,病毒感染能被针对病毒基因和相关宿主基因的siRNA所阻断,RNA干扰技术将成为一种有效的抗病毒治疗手段。2024/1/756(三)核酶(ribozyme)

天然核酶多为单一的RNA分子,具有自我剪切作用。但核酶也可以由两个RNA分子组成。在基因治疗时,利用核酶分子结合到靶RNA分子中适当的部位,形成锤头状核酶结构,将靶RNA分子切断,通过破坏靶RNA分子而达到治疗疾病的目的(如清除病毒基因组RNA,癌基因表达的mRNA等)。

2024/1/757核酶锤头状的二级结构只要两个RNA分子通过互补序列相结合,形成锤头状的二级结构(3个螺旋区),并能组成核酶的核心序列(13个或11个保守核苷酸序列),就可在锤头右上方产生剪切反应。2024/1/758

1.核酶的设计核酶是通过靶RNA分子与核酶分子共同组成酶活性结构域,要从靶分子和核酶分子两个方面来设计核酶。

(1)选择合适的靶部位,该部位具有核酶切割位点,能与核酶分子结合并组成酶活性结构域。

(2)核酶的基本组成:用于基因治疗的核酶分子由三个部分组成,中间是保守序列(能够组成酶活性结构域),两端是引导序列。在基因治疗中,主要是根据治疗的靶基因序列的特点,设计和合成特定的核酶。设计的基本原则是核酶分子与靶部位结合后能形成酶活性结构域。

2024/1/759核酶的作用机制

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2.核酶的应用

与一般的反义RNA相比,核酶具有较稳定的空间结构,不易受到RNA酶的攻击。更重要的是,核酶在切断mRNA后,又可从杂交链上解脱下来,重新结合和切割其它的mRNA分子。

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四、治疗基因的受控表达

2024/1/762时间:要实现治疗基因的受控表达,必须建立完善的基因表达调控体系。基因调控策略大致有以下几种:基因内部调节机制、基因外部调节机制、利用病灶微环境使治疗基因特异性表达以及治疗基因的诱导表达等。

治疗基因的受控表达包括控制治疗基因表达的时间、空间和水平三个方面。

空间:表达水平:希望治疗基因能在一个适当的水平表达。

1.控制治疗的基因在患者需要实施治疗时才表达,而平时不需要进行治疗时则处于关闭状态;2.根据不同疾病的治疗要求,控制治疗基因持续表达的时间跨度。为了提高基因治疗的专一性和安全性,严格限制治疗基因只在靶细胞中表达,避免治疗基因指导合成的蛋白质干扰非靶细胞的正常生活,产生毒副作用。2024/1/763(一)基因内部的调节机制☻使用正常细胞的组织特异性启动子、增强子元件☻使用病变细胞的组织特异性启动子、增强子元件2024/1/764

1.使用正常细胞的组织特异性启动子、增强子元件

例如,酪氨酸酶是皮肤细胞和黑色素瘤细胞产生色素途径中的一种酶,可利用其启动子驱动治疗基因只在黑色素瘤细胞中表达,而不在正常的周边细胞中表达。不同类型的正常细胞或组织中往往存在某些特有的蛋白质,它们的基因表达调控元件可用于驱动治疗基因的特异性表达,从而起到治疗作用。前列腺特异性抗原(PSA)是参与精液凝块中蛋白质降解、使精液液化的一种丝氨酸蛋白酶。它主要在前列腺中产生,而在前列腺癌细胞中含量很高,可以利用PSA基因调控元件驱动治疗基因在PSA阳性的前列腺癌细胞中表达而发挥作用,而其在PSA阴性细胞和非前列腺癌细胞中不能使治疗基因表达。2024/1/765

2.使用病变细胞的组织特异性启动子、增强子元件

某些病变的细胞或组织产生一些特殊的蛋白质,其基因表达调控元件也可以用来控制治疗基因的特异性表达。甲胎蛋白(AFP)基因正常情况下只在胚胎肝细胞中表达,不在成年肝脏细胞中表达。肝细胞腺癌细胞中AFP基因异常激活,因此可利用该基因启动子驱动治疗基因(如自杀基因)在癌细胞中表达,使癌细胞经给药后被杀死。癌胚抗原(CEA)是膜糖蛋白家族的成员,在许多腺癌细胞中表达很高,采用其启动子可以使治疗基因只在CEA阳性的癌细胞中表达,而不会在阴性细胞中表达。2024/1/766(二)基因外部的调节机制

除利用基因内部的调节机制以外,还可通过施加外部刺激,促进治疗基因在特定细胞或组织中表达。采用热休克蛋白基因的表达调控元件来驱动治疗基因的表达,可以通过对病灶局部进行热处理,达到使治疗基因特异性表达的目的。

Egr-1基因是一种编码锌指转录因子的早期基因,包括电离辐射在内的多种外部刺激都可以诱导其表达,将该基因启动子控制的TNF基因导入肿瘤组织,在电离辐射的作用下,使TNF获得暂时性的局部表达,杀死肿瘤细胞。

组织纤溶酶原激活物(t-PA)作为溶解血栓的药剂,在中风和心肌梗死等疾病治疗中起着重要的作用。t-PA的活性在辐射后增加50倍,表明其基因表达调控元件中存在受辐射诱导的调控元件,故可利用t-PA调控元件启动治疗基因的表达,增强放疗效果。2024/1/767(三)利用病灶微环境使治疗基因特异性表达

病灶微环境与正常时往往不同,因此可利用这些变化控制治疗基因的表达。在肿瘤病灶处,常常出现葡萄糖缺乏等情况,葡萄糖调节蛋白GRP78/Bip的含量也随之增加,使癌细胞能够抵御应激。当采用这种基因的启动子来控制治疗基因时,可以使治疗基因在肿瘤细胞中表达,使肿瘤组织坏死。

肿瘤细胞生长速度快于形成血管的内皮细胞生长速度,造成供血不足,因此在肿瘤内部形成酸性、缺氧和营养缺乏的区域。缺氧条件可以通过缺氧诱导因子(HIF-1)和缺氧响应元件(HRE)相互作用,调节一些基因的表达;如果采用缺氧响应元件(HRE)来控制治疗基因的表达,即可实现治疗基因只在缺氧的肿瘤组织中表达,而在正常组织中不表达。

机体发炎时所可产生的许多急性期蛋白,其基因的启动子可以控制炎症条件下治疗基因的表达;而一旦炎症消失,治疗基因的表达也随之终止。2024/1/768(四)治疗基因的诱导表达

采用组织特异性启动子控制治疗基因的表达,可能造成这些基因在靶细胞中表达,不再受外界控制。为了避免这种情况发生,研究人员正在开发和完善一些可诱导性基因表达系统。这种系统的必要成分:一种是转录激活剂,它只在诱导药物存在时才能与DNA结合;另一种则是特异性基因表达调控元件,仅对这种转录激活剂有所响应。

2024/1/769四环素抗性操纵子系统原理四环素抗性基因的转录受Tet阻遏蛋白的负调控。无四环素存在时,阻遏蛋白与四环素抗性操纵子序列结合阻断四环素抗性基因的表达。四环素存在时,阻遏蛋白与四环素具有极高的亲和性,造成阻遏蛋白对四环素抗性操纵子阻遏解除,使四环素抗性基因的转录得以进行。。

2024/1/7702024/1/771

五、基因治疗的应用研究2024/1/772世界上第一个正式被批准用于基因治疗的病例是先天性腺苷脱氨酶(ADA)缺乏症。1990年9月美国Blaese博士成功地将正常的人的ADA基因植入ADA缺乏症病人的淋巴结内,完成世界上首例基因治疗试验。2024/1/773(一)遗传病的基因治疗研究

已知人类有4000多种遗传病,在人群中的发病率约为40％～50％。但真正了解病因,能进行产前诊断的仅限于那些为数不多的常见遗传病。

1.在DNA水平明确其发病原因及机制;2.必须是单基因遗传病,而且属隐性遗传;3.该基因的表达不需要精确调控;4.该基因能在一种便于临床操作的组织细胞(如皮肤细胞,骨髓细胞等)中表达并发挥其生理作用;5.该遗传病不经治疗将有严重后果(如不治疗难以存活等)。可供选择并符合上述4条以上要求的不过只有30余种遗传病。遗传病基因治疗必须符合以下要求:2024/1/7741．腺苷脱氨酶(ADA)和嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)缺乏症2．珠蛋白生成障碍性贫血和血红蛋白病3．血友病和其他血浆蛋白缺乏症4．苯丙酮酸尿症和其他先天性代谢缺陷病5．莱-纳(Lesch-Nyhan)综合征6．家族性高胆固醇血症7．囊性纤维化病2024/1/775(二)恶性肿瘤基因治疗研究

(1)通过基因置换和基因补充,导入多种抑癌基因以抑制癌症的发生、发展和转移;肿瘤发生是一个极为复杂的过程,许多基因的突变会导致肿瘤的发生。(2)抑制癌基因的活性,通过干扰癌基因的转录和翻译,发挥抑癌作用;(3)增强肿瘤细胞的免疫原性,通过对肿瘤组织进行细胞因子修饰,刺激机体免疫系统产生对肿瘤细胞的溶解和排斥反应;(4)通过导入“自杀基因”杀伤癌细胞。2024/1/776

1.肿瘤基因治疗的基本策略

从临床治疗的应用角度来看,肿瘤基因治疗的策略包括:(1)直接杀伤肿瘤细胞或抑制其生长。(2)增强机体免疫系统,间接杀伤或抑制肿瘤细胞。(3)改善肿瘤常规治疗方法,提高疗效。2024/1/777

2.肿瘤基因治疗的常用方法

☻基因干预技术:通过基因干预,抑制肿瘤细胞中过度表达的癌基因,从而降低其恶性表型。☻自杀基因治疗:直接杀死肿瘤细胞。☻肿瘤的免疫基因治疗:激发机体肿瘤免疫效应或提高免疫效应细胞功能。☻提高化疗效果的辅助基因治疗:药物增敏基因治疗;耐药基因治疗。

2024/1/778

3.自杀基因治疗:自杀基因治疗是目前肿瘤基因治疗领域中的研究热点之一。

基本原理:向肿瘤细胞内导入某些真核细胞中不存在的酶基因(自杀基因),这些基因表达的特异性酶可以催化对真核细胞无毒或低毒的药物前体,转变为具有抑制核酸合成效应的抗代谢药物,进而选择性地使转染了“自杀基因”的肿瘤细胞“自杀”。2024/1/779自杀基因治疗的前提条件是“自杀基因”的表达必须局限于肿瘤细胞中,而不伤及正常细胞。

①利用免疫脂质体、受体介导等技术进行定向基因转移。②利用病毒载体进行基因转移。③瘤内直接注射。

自杀基因转移常用方法2024/1/780

4.肿瘤的免疫基因治疗激发机体肿瘤免疫效应或提高免疫效应细胞功能为目的的一种肿瘤基因治疗方法。

主要包括:细胞因子(或受体)基因治疗;抗原抗体基因治疗。2024/1/7815.提高化疗效果的辅助基因治疗:

临床上对肿瘤患者进行化疗时,通常面临两大难题:(1)患者机体内的肿瘤细胞对化疗药物的敏感程度存在差异,特别是某些经过多次化疗的患者,其体内的肿瘤细胞已经产生了多药耐药性,对多种化疗药物产生交叉耐受,最终导致化疗失败。(2)大剂量的化疗可能导致患者的正常细胞,特别是骨髓造血细胞的功能受到抑制。

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(1)药物增敏基因治疗:

将鸡钙调素(calmodulin,CaM)基因导入小鼠乳腺癌细胞株C127,结果仅需低剂量的长春新碱或长春花碱即可明显抑制该细胞株的生长。其作用原理可能是:CaM基因的表达产物作为细胞内信号转导系统的重要物质,显著增加肿瘤细胞对长春新碱或长春花碱的吸收量而相应减少了排出量,从而提高了肿瘤细胞内化疗药物浓度,导致肿瘤细胞死亡。为了使化疗药物能够最大程度地杀死肿瘤细胞,可以考虑将某些药物增敏基因导入肿瘤细胞,特别是对化疗药物原本不敏感的肿瘤细胞,使其对抗肿瘤药物的敏感性大大增加,从而达到增强化疗效果的目的。

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(2)耐药基因治疗:在解决化疗所致骨髓细胞造血功能受到严重抑制的问题方面,通过向肿瘤患者的骨髓细胞导入某种耐药基因,如mdr-1基因等,以增强骨髓细胞的抗药性,以便耐受大剂量的化疗药物,以达到彻底杀灭肿瘤细胞的目的。肿瘤细胞耐药性的产生与多种糖蛋白或酶有关,包括多药耐药(mdr-1)基因编码的P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白(MRP)以及近年来发现的肺耐药相关蛋白等;还有细胞内氧化和解毒作用的酶系统,包括细胞色素P-450(cytochromeP-450)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)等等。目前除了开发针对肿瘤细胞耐药性产生机制的拮抗剂,如用于阻断P-糖蛋白所引发多药耐药的戊脉安(verapamil)和用于阻断GSH合成的丁硫氨酸亚砜胺(BSO)等。还采用基因干扰技术,在基因水平阻断耐药基因的表达,使肿瘤细胞丧失多药耐药性,从而易于被化疗药物杀死。

2024/1/784(三)病毒性疾病的基因治疗研究据统计,75﹪的人类传染病是由病毒引起的。病毒感染人体后不仅可能急性发病,还可以在人体内长期潜伏,造成终身伤害。病毒还是造成先天畸形的重要因素之一。研究表明,它与某些癌症、自身免疫性疾病和内分泌疾病也存在一定的联系。迄今为止,临床上对绝大多数病毒感染性疾病仍然缺乏有效的治疗手段,而在众多开展的抗病毒治疗方案中,抗病毒基因治疗十分引人注目。2024/1/7851．调节机体免疫应答:

(1)将细胞因子(如干扰素、白细胞介素等)的基因,导入机体免疫细胞,激活免疫细胞并促进其增殖分化,增强机体的细胞和体液免疫应答,促进机体清除病毒感染的细胞和游离病毒。

(2)将能够诱导机体产生保护性免疫应答的病毒抗原基因,如乙型肝炎病毒表面抗原基因等,导入机体,表达的抗原不仅可以诱导机体产生保护性抗体,还可以引发特异性的细胞免疫应答,产生对野生型致病病毒攻击的防御作用。2024/1/786

2．抗病毒复制:根据病毒在机体细胞中复制周期的各个环节来设计的,主要包括:(1)抑制病毒与宿主细胞结合:即阻断病毒表面抗原决定簇与宿主细胞受体间的特异性结合。

(2)干扰病毒基因组的转录起始和调控。

(3)抑制病毒基因组的复制和蛋白质合成。

(4)RNA干扰技术。

(5)将抗病毒蛋白质基因,如2ˊ→5ˊ腺苷酸合成酶等基因,导入细胞并持续表达,可以激活核酸酶F,降解病毒RNA,对RNA病毒的感染产生明显的抵抗作用。2024/1/787(四)其他疾病的基因治疗研究

神经退化性疾病(如帕金森氏病):由于腺病毒可以感染有丝分裂后的细胞,同时具有潜在的高转导效率和在中枢神经系统免疫特惠区(immunologicallyprivilegedsite)的低病原性,因此是进行神经系统疾病基因治疗的有效载体。

神经母细胞(neuroprogenitor)和人星型胶质细胞可以作为自体同源细胞用于exvivo修饰。使用四环素调节的腺病毒载体来表达酪氨酸羟化酶,在动物模型中表现出了可观的前景。在用脑衍生神经营养因子(BDNF)腺病毒重组体缓解亨廷顿疾病的实验过程中,发现表达BDNF的大鼠取得了明显结果。

(1)重组载体的脑内直接注射;(2)取出体内细胞在体外经由载体转染修饰后回输脑内相关区域。传递治疗基因的两种主要策略:2024/1/788

基因治疗的问题与展望

治疗基因调控元件的选择;安全高效载体的构建和转移技术的选择;靶细胞的选择。2024/1/789谢谢！2024/1/790Akiyama,K.etal.Nucl.AcidsRes.200028:e77;doi:10.1093/nar/28.16.e772024/1/7现今医学分为传统医学、基于“生物-医学模式”近代发展起来的西医，20世纪西医又发展到“社会-心理-生物医学”或综合医学模式，后基因组时代系统生物学的兴起，形成了系统医学在全球的迅速发展，成为继传统医学、西医学之后中、西医学汇通的未来医学。当代中国医学类专业比较优秀的学校有北京大学、华中科技医学化验医学定义（medicine），是处理人健康定义中人的生理处于良好状态相关问题的一种科学，（高血压心脏病糖尿病）以治疗预防生理疾病和提高人体生理机体健康为目的。狭义的医学只是疾病的治疗和机体有效功能的极限恢复，广义的医学还包括中国养生学和由此衍生的西方的营养学。现在世界上医学主要有西方微观西医学和东方宏观中医学两大系统体系。医学的科学性在与应用基础医学的理论不断完善和实践的验证，例如生化、生理、微生物学、解剖、病理学、（肺炎青霉素肝炎）药理学、统计学、流行病学，中医学及中医技能等，来治疗疾病与促进健康。虽然东西方由于思维方式的不同导致（高血压心脏病糖尿病）研究人体健康与外界联系及病理机制的宏观微观顺序不同，但在不远的将来中西医实践的丰富经验的积累和理论的形成必将诞生新的医学---------人类医学。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）不同于现代医学，不同于传统中医，（传染病丙肝乙肝甲肝）金水医学诞生了，金水医学是以驱除病理，恢复生理为主张的全新医学，走出了人类医学的误区，（肺血液血小板红血球白血球）治疗疾病的特色鲜明，不论是任何疾病都能做到从危为安，由重到轻的恢复办法。金水医学认识到人体是生命体，生命体有自己的强大的生理自我愈合功能，（高血压心脏病糖尿病）帮助生命体恢复自主作用才是治疗疾病的根本。针对当今现代文明病，现代疑难病，现代慢性病，亚健康，一体多病，取得了巨大的成功，治疗法则为“胃肠洁，气血流，玄府开，营卫昌”人生命体运动符合自然节律，最终达到人体生理增强，消灭疾病的目的。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）编辑本段医学的分类医学研究医学可分为现代医学（即通常说的西医学）和传统医学（包括中医学、（高血压心脏病糖尿病）藏医学、蒙医学等）多种医学体系。不同地区和民族都有相应的一些医学体系，宗旨和目的不相同。印度传统医学系统也被认为很发达。（传染病丙肝乙肝甲肝）研究领域大方向包括基础医学、临床医学、检验医学、预防医学、保健医学、康复医学等。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）基础医学包括：医学生物数学,医学生物化学,医学生物物理学,人体解剖学,医学细胞生物学,人体生理学,人体组织学,人体胚胎学,医学遗传学,人体免疫学,（肺血液血小板红血球白血球）医学寄生虫学,医学微生物学,医学病毒学,人体病理学,病理生理学,药理学,医学实验动物学,医学心理学,生物医学工程学,医学信息学,急救学,护病学,新中心法则。（肺炎青霉素肝炎）临床医学包括：临床诊断学实验诊断学.影像诊断学+放射诊断学+超声诊断学+核医诊断学*临床治疗学职能治疗学化学治疗学生物治疗学血液治疗学组织器官治疗学饮食治疗学（高血压心脏病糖尿病）物理治疗学语言治疗学心理治疗学内科学外科学泌尿科学妇产科学儿科学老年医学眼科学耳鼻喉科学口腔医学传染病学皮肤医学神经医学精神病学肿瘤医学急诊医学麻醉学护理学家庭医学性医学（传染病丙肝乙肝甲肝）临终关怀学康复医学保健医学听力学。（肺炎青霉素肝炎）编辑本段医学的起源

医学教材东、西方文化历史背景是中、西医学形成、发展的土壤。公元2世纪东、西方的两位医学巨匠张仲景和盖伦，传承了不同的学术思想，创建了迥异的医学范式，发展和完善了不同的理论体系，使中、西医学各自走向了（高血压心脏病糖尿病）两条完全不同的发展道路。在汉代医学家张仲景所著述的《伤寒杂病论》之前，就有《内经》、《难经》、《本草经》等古典医药典籍。张仲景总结了汉代以前的医学成就，继承了《内经》等基本理论和丰富的医药（传染病丙肝乙肝甲肝）知识，结合自己的临床实践，写成了《伤寒杂病论》。其贡献在于确立了中医学辨证论治的理论体系，为后世中医临床医学的发展，奠定了坚实的基础。（肺炎青霉素肝炎）在西方，盖伦的一生生活在罗马帝国时安东尼父子的执政期。彼时，罗马帝国的繁荣，为盖伦的医学成就、以及西方医学的昌盛，提供了可靠的政治、经济、科技和文化保证。盖伦继承希波克拉底的学术思想，（肺血液血小板红血球白血球）著述200余部著作，现存的83部著作中，内容涉及解剖、生理、病理、卫生、药物、《希波克拉底文集》研究、哲学、语言学、逻辑学、数学、历史、（传染病丙肝乙肝甲肝）法律等。倡导实证医学，他的科学（高血压心脏病糖尿病）方法论具有重视实验、疾病局部定位思想、重视形式逻辑、强调演绎法等特点，对后世西医学的发展影响深远。中、西医学在张仲景和盖伦完全相悖的医学范式引导下，开始步入了分道扬镳的历史进程。在中华文化强调“中和”的大背景下，学术界便有了“海纳百川”的宽松气氛。出现了学术流派精彩分呈，如瘟病的寒温之争，经方时方之别等。中医学按张仲景的思维范式，蓬蓬勃勃的发展起来了。（传染病丙肝乙肝甲肝）随着科学的进步和社会的发展特别是医疗实践的发展，最初的中医学理论已无法诠释新的科学事实，因此，医学理论必须不断创新，（高血压心脏病糖尿病）才能适应社会需要，这就促使中医学进入汉代以后，呈现出全面发展的阶段，这个阶段共包括四个时期：编辑本段魏晋隋唐时期（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）由于重视总结临床经验，并继承整理发挥《黄帝内经》、《伤寒杂病论》等经典医著的理论，出现了众多名医名著。如晋代王叔和的《脉经》和皇甫谧的《针灸甲乙经》、隋代巢元方的《诸病源候论》、唐代孙思邈的《千金要方》和《千金翼方》。（肺炎青霉素肝炎）编辑本段宋金元时期我国经济和科学技术日益发展，学术文化领域百家争鸣，特别是思想家的革新精神，为中医学理论的创新和突破性进展，提供了有利的文化背景。宋代陈无择著《三因极一病证方论》一书，提出三因学说；并产生了最具盛名四大学派，（肺血液血小板红血球白血球）刘完素倡导火热论；张从正力倡“攻邪论”；李杲提出“内伤脾胃，百病由生”的理论；朱震亨创造性（高血压心脏病糖尿病）地阐明了相火的演变规律。编辑本段明清时期是中医学理论综合汇编、深化发展，临床各科辨证体系丰富、提高阶段。如明代楼英的《医学纲目》和王肯堂的《证治准绳》，清代吴谦等编著的《医宗金鉴》和陈梦雷主编的（传染病丙肝乙肝甲肝）《古今图书集成·医部全录》等。王清任著《医林改错》，注重实证研究，纠正了古医籍中关于解剖知识的某些错误，肯定了“脑主思维”，（肺炎青霉素肝炎）发展了瘀血理论。温病学说的形成和发展，标志着中医理论的创新与突破，吴有性著《温疫论》，叶天士著（高血压心脏病糖尿病）《温热病篇》，吴鞠通著《温病条辨》等，在药物学研究方面，李时珍著的《本草纲目》，总结了16世纪以前我国药物学研究的成就。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）而西方医学随着西罗马帝国的灭亡，逐渐进入了中世纪的千年黑暗，科学变成了神学的奴婢，牧师取代医师。（传染病丙肝乙肝甲肝）从13世纪开始，始渐复明，直到15世纪，冲破封建宗教藩篱，才得以迅速发展。达·芬奇开创现代解剖学，维萨里创立解剖生理学；1731年意大利摩尔干尼创立了病理解剖学；1855年德国魏尔啸创建了细胞病理学；与此同时西方科学方法论对医学发展具有指导作用。以实验为主的实证方法(观察实验和比较分析)、及对医学研究中的“经院哲学”的彻底决裂、依靠各门自然科学所提供的技术手段和方法，（肺血液血小板红血球白血球）培养了医学家们的科学意识，赋予了医学的自然科学属性，使其摆脱了思辩推理的玄想而成就了生物医学模式（传染病丙肝乙肝甲肝）下的实验科学。（高血压心脏病糖尿病）至此中医学在实证医学领域已无法于西医同日而语。但中医学相对于西医学的优势是从宏观入手，注重整体，强调局部与局部、局部与整体之间的联系，重视辨证，主张“三因治宜”的个体化诊疗方略等。编辑本段东西方医学差异（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）中、西医学运用不同的思维模式诊治疾病，其基本理论各成体系并有（传染病丙肝乙肝甲肝）根本差异。中西医学的差异不仅仅是有否实证的科学理念，最主要的是两种文化体系的差别。从理论上讲，中西医学是两种不可能统一的医学体系。“中体西用”曾成为中西医汇通派的指导思想，但由于两种医学的根基不同，硬在中医之体上套上西医之用，近一个世纪的事实证明，“汇通医学的体用判断脱离了中西医学的事实认识，以价值认识代替了事实认识，决定最终结果劳而无功”，因此，中、西医学应并存共荣而不必强求统一。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）尽管目前中、西医学还不可能融合成为一种统一的医学模式，但可以独立发展，并存共荣，整合互补。缘于现代信息论、系统论和控制论的影响，西医学的发展趋势若仅仅是单纯地重视分析而忽略了（传染病丙肝乙肝甲肝）整体结构和整体功能，无疑将渐行渐窄。而中医讲究“感悟”，未免夹带有很多主观因素，（肺血液血小板红血球白血球）难以客观地定量，定性。若中医的诊察疾病能参考现代医学的微观分析，将辨证与辨病相结合，实现宏观与微观的统一，使中医诊断客观化，即把分析与综合相结合的方法引入中医理、法、方（高血压心脏病糖尿病）、药的研究，使二者有机结合（肺炎青霉素肝炎），互相借鉴、补充，避免各自的片面性、局限性，这将有利于中西医学的优势互补，“和而不同”，多元发展。近年来，中医药在防治非典、禽流感和艾滋病方面发挥的独特作用也证实了二者的有机结合，具有肯定的临床疗效。编辑本段东西方医学交融（传染病丙肝乙肝甲肝）不管是中医学还是西医学，从二者现有的思维方式的发展趋势来看，均是走向现代系统论思维，中医药学理论与现代科学体系之间具有系统同型性，属于本质相同而描述表达方式不同的两种科学形式。可望在现代系统论思维上实现交融或统一，（高血压心脏病糖尿病）成为中西医在新的发展水平上实现交融或统一的支撑点，希冀籍此能给中医学以至生命科学带来良好的发展机遇，进而对医学理论带来新的革命。编辑本段现代中医史（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）上个世纪末,本世纪初，1996年,清华学界对中医气本质，经络实质，阴阳，五行，藏象，中医哲学观等都有了新的全面整体创造性的认识和解说。如，邓宇等发现的:气是流动着的‘信息－能量－物质’的混合统一体；（传染病丙肝乙肝甲肝）分形分维的经络解剖结构；数理阴阳；中医分形集：分形阴阳集－阴阳集的分形分维数，五行分形集－五行集的分维数；分形藏象五系统－暨心系统、肝系统、脾系统、肺系统、肾系统；中医三个哲学观－新提出的第三哲学观：相似观－分形论等。（肺血液血小板红血球白血球）还包括近代针灸经络的发展史,近代中医气的进展简史,中西医结合史,中医中药史等.古代(经典)中医史（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）中国的中医学起源于三皇五帝时期，相传伏羲发明了（传染病丙肝乙肝甲肝）针灸并尝试草药。在公元前3000多年，中国的轩辕黄帝写下了人类第一部医学著作——《祝由科》，后世人在这部医药著作的基础上不断增补删改，逐渐形成了后来的《黄帝内经》和《黄帝外经》，并由祝由科里将纯粹的医药分离了出来，形成了后来的中医学。而其中的《黄帝内经》则在世界上（高血压心脏病糖尿病）第一个提出了“不治已病治未病”这一防病养生保健康的预防医学观点。（肺炎青霉素肝炎）轩辕黄帝早在周代(公元前1046年（肺血液血小板红血球白血球）－公元前771年)就建立了世界上第一个医院和医疗制度，周代的医疗机构设有医师、上士、下士、府（管药库）、史（管记录）、徒若干人。下面又分食医（管饮食卫库）、疾医（内科）、疡医（外科）、兽医四种，这是世界上最早的医学分科。医师总管医药行政，并在年终对医生进行考核；《周礼》记载“岁冬则稽其事，以制其食”，就是说，医生每年都要通过年终考核增减俸禄。（传染病丙肝乙肝甲肝）当时的患者已经分科治疗，而且建立病历。（高血压心脏病糖尿病）“死终则各书其所以，而入于医师”，（肺血液血小板红血球白血球）规定在死者病历上要写明死因，然后送交医师存档，以便总结医疗经验，提高医疗技术。这也是世界上最早的病历制度。在春秋战国（公元前770年－前221年）时期名医辈出，（肺血液血小板红血球白血球）秦国有名医医缓，齐国有长桑和他的徒弟扁鹊。扁鹊发明了中医独特的辨证论治，并总结为“四诊”方法，即“望、闻、问、切”。扁鹊看病行医有“六不治”原则：一是依仗权势，骄横跋扈的人不治；（肺血液血小板红血球白血球）二是贪图钱财，不顾性命者不治；三是暴饮暴食，饮食无常者不治；四是病深不早求医者不治；五是身体虚弱不能服药者不治；六是相信巫术不相信医道者不治。后世则尊称他为神医扁鹊。春秋战国时流行的主要医学著作有《黄帝内经》、（高血压心脏病糖尿病）《黄帝外经》、《扁鹊内经》、《扁鹊外经》、《白氏内经》、《白氏外经》和《旁篇》这七本，（传染病丙肝乙肝甲肝）合成“七经”。（肺炎青霉素肝炎）在秦朝（公元前221年—公元前207年）出现了世界上最早的专门法医——"令史"。秦律规定，死因不明的案件原则上都要进行尸体检验，司法官如果违法不进行检验，将受到处罚。秦代的《封诊式》对法医鉴定的方法、程序等有较为详细的记载。在人命案件中，鉴定检验的主要内容有尸体的位置、创伤的部位、数量、方向以及大小等。（肺血液血小板红血球白血球）令史检验完成之后，必须提交书面报告，称为“爰书”，是世界上最早的法医鉴定和现场勘察报告。秦代还在世界上第一个建立传染病医院——“疠迁所”，（高血压心脏病糖尿病）并制定了最早的治疗传染病的隔离制度。据1975年湖北省云梦睡虎地出土秦简中记载：当时规定，凡经医生在给病人检查后发现有鼻梁塌陷、手上无汗毛、声音沙哑、刺激鼻腔不打喷嚏等症状者，一律送至疠迁所隔离治疗。（传染病丙肝乙肝甲肝）这说明中国古代对传染性疾病的治疗措施，很早就已经是得力有效的。到了西汉时期(公元前202年－公元8年)，中医的阴阳五行理论已经非常完备，名医则有太仓公淳于意和公乘阳庆。东汉出现了著名医学家张仲景和华佗。张仲景完善了中医的辨证理论，他还是世界上第一个临床医学大师，被尊称为医圣。他著有（高血压心脏病糖尿病）《伤寒论》《疗妇人方》、《黄素方》、《口齿论》、《平病方》等等医书，最终流传下来的医书被并被后人编纂为《伤寒杂病论》和《金匮要略》。张仲景采用辨证论治的基本原则，在《伤寒论》中归结为“八纲辨证”和“六经论治”，经由这两种方法辨证论治后，再采用“八法”（汗、吐、下、（传染病丙肝乙肝甲肝）和、温、清、补、消）治疗疾病。“八纲辨证”是书中贯彻辨证论治的具体原则，所谓“八纲”（阴、阳、表、里、寒、热、虚、实）是运用“四诊”（望、闻、问、切）分析和检查疾病的部位、性质而归纳出来，“六经论治”是整个脏腑经络学说在临床医学上的具体运用。东汉末年，华佗则以精通外科手术和麻醉名闻天下，华佗是世界上（高血压心脏病糖尿病）第一个使用麻醉术进行手术的人，他发明的麻沸散是世界上最早的麻醉药物，还创立了世界上最早的健身体操“五禽戏”。可惜华佗所著医书的（肺血液血小板红血球白血球）《青囊书》最后被付之一炬。在汉代，大量的医药和历算等书籍传入西藏（《西藏王统记》记载）。在汉代还出现了专门性的妇科医院，西汉时的“乳舍”，是世界上最早的妇产医院。（肺炎青霉素肝炎）南北朝时期(420年－589年)问世了世界上最早的两本儿科专著，即王末钞的《小儿用药本草》和徐叔响的《疗少小百病杂方》。南朝宋元嘉二十年(公元443年)，（传染病丙肝乙肝甲肝）太医令秦承祖创建了世界上第一个医学院。到了公元6世纪，隋朝完善了这一医学教育机构，并命名为“太医署”，署内分医、药两部，太医令是最高官职，丞为之助理，下有主药、医师、药园师、医博士、助教、按摩博士、祝禁博士，（高血压心脏病糖尿病）在校师生最多时达580人之多。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）在唐朝（公元618年－907年），孙思邈总结前人的理论并总结经验，收集药方多达5000多个，出版了《大医精诚》、（肺血液血小板红血球白血球）《千金要方》和《千金翼方》三本医学著作，后世尊称他为药王。唐朝以后，中国医学理论和著作大量外传到突厥、高句丽、日本、中亚、西亚等地。（传染病丙肝乙肝甲肝）到了在唐末宋初，儿科专著《颅囟经》问世流行，而世界医学史上第一个著名儿科专家钱乙（公元1032－1113年）则受此书启发，撰写了著名的儿科巨著《小儿药证直诀》，后人把钱乙尊称为“儿科之圣”，“幼科之鼻祖”。北宋时期（960年－1127年），宋政府设立翰林医学院即太医局，医学分科已经非常完备，并且统一了中国针灸穴位，出版《图经》。北宋的宋慈出版了世界上最早的法医学著作（高血压心脏病糖尿病）《洗冤集录》。（肺炎青霉素肝炎）在明朝（1368年－1644），著名医学家李时珍的医学巨著《本草纲目》成书，这本书不仅是药物学专着，还包括植物学、动物学、（传染病丙肝乙肝甲肝）矿物学、化学等方面的知识。《本草纲目》刊行后很快传入日本、朝鲜及越南等亚洲地区，（肺血液血小板红血球白血球）在公元17、18世纪先后被翻译成多种欧洲语言。另一方面，李时珍是世界上第一个提出大脑负责精神感觉、又发现胆结石病、利用冰敷替高热病人降温以及发明消毒技术的医学家。此外还有王叔和的《脉经》、皇甫谧的《针灸甲乙经》、陶弘景的《本草经集注》、葛洪的《肘后备急方》、巢元方的《诸病源候论》、苏敬的《新修本草》（肺血液血小板红血球白血球）、王焘的《外台秘要》、元丹贡布的《四部医典》、《太平圣惠方》、王惟一的《铜人腧穴针灸图经》等大量医学典籍问世。自明朝中医发展已经达到了顶峰，（传染病丙肝乙肝甲肝）出现了诸多的医学流派。同时在朝鲜研究中医的（高血压心脏病糖尿病）所谓东医学也得到了很大的发展，例如许浚撰写了《东医宝鉴》。（肺炎青霉素肝炎）自清朝末年，中国受西方列强侵略，国运衰弱。同时现代医学（西医）大量涌入，严重冲击了中医发展。中国出现许多人士主张医学现代化，中医学受到巨大的挑战。人们开始使用西方医学体系的思维模式加以检视，中医学陷入存与废的争论之中。同属中国医学体系的日本汉方医学、韩国的韩医学亦是如此。2003年“非典”（肺血液血小板红血球白血球）以来，经方中医开始有复苏迹象。（高血压心脏病糖尿病）在文化大革命期间，中医作为“古为今用”的医学实例得到中国共产党政策上的支持而得以发展。现代，中医在中国仍然是治疗疾病的常用手段之一。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）近代、现代医学史近代的医学（传染病丙肝乙肝甲肝）西方近代医学是指文艺复兴以后逐渐兴起的医学，一般包括16世纪、17世纪、18世纪和19世纪的欧洲医学。16世纪封建社会后期，手工业和商业发展，手工工厂出现，生产力的增长也促进对新市场的寻找。1492年哥伦布发现新大陆,1497年达·伽马发现好望角,1519～1522年麦哲伦环绕世界一周。（高血压心脏病糖尿病）许多药物（如鸦片、樟脑、松香），由东方传入欧洲，美洲发现后，欧洲也有了金鸡纳、愈创木、可可果。（肺炎青霉素肝炎）由于资本主义的兴起，首先在意大利形成了资产阶级的知识分子。他们的特点是敢于向教会思想挑战，反对宗教迷信的束缚。他们的口号是：（肺血液血小板红血球白血球）“我是人，人的一切我应该了解”，以此来反对神学的统治。他们一方面传播新文化,一方面竭力钻研和模仿古代希腊的文化,因此此时期称为“文艺复兴”。1543年哥白尼出版《天体运行论》，是科学史上文艺复兴的开始。（传染病丙肝乙肝甲肝）①医学革命。文艺复兴运动中，怀疑教条、反对权威之风兴起。于是，医界也产生了一场以帕拉切尔苏斯(1493～1541)（高血压心脏病糖尿病）为代表的医学革命。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）中世纪的医学校中,主要讲阿维森纳的《医典》,以及加伦和希波克拉底的著作。教师照本宣科，一切墨守成规，毫无生气。文艺复兴的狂潮，很快就波及医学领域。帕拉切尔苏斯指出人体的生命过程是化学过程。他在巴塞尔大学任教时主张用流行的德语写书和讲演，使医学易为大众所接受，这是一件伟大的改革。他重视实践，反对烦琐的经院哲学，反对中世纪顽固的传统和权威观念，他说：“没有科学和经验，谁也不能成为医生。（肺血液血小板红血球白血球）我的著作不是引证古代权威的著作，而是靠最大的教师──经验写成的”。他勇敢地向墨守成规和盲目崇拜进行斗争，公开焚毁了加伦和阿维森纳的著作。②人体解剖学的建立。古代的人认为身体是灵魂寄居之处,在封建社会,各民族无例外地禁止解剖尸体。（高血压心脏病糖尿病）因此,人体解剖学得不到发展,这个时代的医书如加伦所著的解剖学中，解剖图几乎全是根据动物内脏绘成的。反之，文艺复兴时代的文化，把人作为注意的中心，在医学领域内人们首先重视的就是研究人体的构造。（传染病丙肝乙肝甲肝）首先革新解剖学的是意大利的达·芬奇，他认为作为现实主义的画家，（肺血液血小板红血球白血球）有明了解剖的必要，尤其需要了解骨骼与肌肉，于是从事人体解剖。不过,他所绘制的700多幅解剖图,传至今日还有150余幅。画得大都准确、优美。他首先对加伦的解剖学发生疑问。他曾往气管吹入空气，但无论如何用力，也不见心脏膨胀起来，于是得出结论：加伦所谓肺与心相通的学说是错误的。他还检查过心脏的构造与形态，他所画的心脏图较以往有关图画正确得多。此外，他还发现了主动脉根部瓣膜的活动及其性质，证明瓣膜的作用在于阻止血液回流。他所提到的心血管方面的问题，不久就引起了医学家们的注意。（肺炎青霉素肝炎）根据直接的观察来写作人体解剖学教科书这一工作由A.维萨里完成。维萨里先肄业于卢万大学，后转入巴黎大学。（高血压心脏病糖尿病）当时，这两所大学讲解剖时，仍是教授高坐椅上讲课,助手和匠人在台下操作,而且一年内（肺血液血小板红血球白血球）最多只允许进行3或4次解剖。维萨里不满足这种状况，曾夜间到野外去盗窃尸体来进行解剖。当时意大利的帕多瓦大学有欧洲最好的解剖教室。于是他到那里任教。1543年，他将工作中积累起来的材料整理成书，公开发表。这本书就是《人体构造论》。此书指出加伦的错误达200多处，如5叶肝、两块下颌骨等。并指出加伦解剖学的依据是动物如猴等。维萨里虽然也受到当时保守派的指责，但他的学生们发展了解剖学。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）总之，16世纪欧洲医学摆脱了古代权威的束缚，开始独立发展，（传染病丙肝乙肝甲肝）其主要成就是人体解剖学的建立。这既表明一门古老的学科在新的水平上复活，又标志着医学新征途的开始。17世纪16世纪，尼德兰发生革命，产生了独立的资产阶级国家荷兰；17世纪，英国推翻了专制王权，建立资产阶级的议会制度。新兴资产阶级为了发展工商业支持科学技术，提倡宽容，这些都有进步作用。哲学上培根提出经验主义（肺血液血小板红血球白血球），提倡观察实验，主张一切知识来自经验，并提倡归纳法；（高血压心脏病糖尿病）他的名言“知识就是力量”激励了后人的探索热情。笛卡尔是唯理论的代表，他重视人的思维能力，同时，又把机械论观点运用于对生理问题的研究，对后世的生命科学影响很大。这时期还出现了一些科学社团，它促进了交流，推动了科学进步。在17世纪，英国科学处于领先地位。（肺炎青霉素肝炎）生理学的进步。17世纪，量度观念已很普及。最先在医界使用量度手段的是圣托里奥(1561～1636)。他制作了体温计和脉搏计。还制造了一个像小屋似的大秤（高血压心脏病糖尿病），可在其中生活、睡眠、运动、进食；在排泄前后，他都秤量自己的体重，如此不厌其烦地进行了30余年。他发现体重在不排泄时也在减轻，认为其原因是“不易觉察的出汗”。这可以说是最早的新陈代谢研究。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）（传染病丙肝乙肝甲肝）实验、量度的应用，使生命科学开始步入科学轨道。其标志是血液循环的发现。W.S.哈维(1578～1657)也毕业于帕多瓦大学，在他以前，帕多瓦大学的解剖学家们曾相继发现并解释了心脏血循的环节。1553年，西班牙学者M.塞尔维特（1511～1553）确认血液自右心室流入左心室，不是经过中隔上的孔，而是经过肺脏作“漫长而奇妙的迂回”。（肺血液血小板红血球白血球）哈维最先在科学研究中，应用活体解剖的实验方法，直接观察动物机体的活动。同时，他还精密地算出自左心室流入总动脉，和自右心室流入肺动脉的血量。他分析认为血液绝不可能来自饮食，也不可能留在身体组织内，他断定自左心室喷入动脉的血，必然是自静脉（高血压心脏病糖尿病）回归右心室的血。这样就发现了血液循环。哈维于1628年发表了著作《心脏运动论》。显微镜的应用。随着实验的兴起，出现了许多科学仪器，显微镜就是17世纪初出现的。显微镜把人们带到一个新的认识水平。在这以后，科学家利用显微镜取得了一系列重要发现。（肺血液血小板红血球白血球）临床医学和T.西德纳姆(1624～1689)。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）内科学直到17世纪一直没有什么进展。医术与中世纪相仿，四体液论依然是疾病理论的基础。由于当时医生多研究解部学和生理学，似乎忘记了医生的责任，所以17世纪的临床医学家T.西德纳姆指出：（传染病丙肝乙肝甲肝）“与医生最有直接关系（高血压心脏病糖尿病）的既非解剖学之实习，也非生理学之实验。乃是被疾病所苦之患者。故医生的任务首先要正确探明痛苦之本质，也就是应多观察同样病患者的情况，然后再研究解剖、生理等知识，以导出疾病之解释和疗法”。同时，他非常拥护希波克拉底关于“自然治愈力”的思想。