新亲子鉴定10-3-31 法医学1

亲子鉴定

paternitytesting

parentagetesting

伍新尧教授法医学系目录1.概述(受理程序)2.检测3.结果评价和分析4.亲子鉴定相关概率和计算5.判断标准和结论6.遗传变异7.亲子鉴定结论的风险8.本卷须知广东省人民医院

女婴纠纷案1986年，“羊城晚报〞登载消息，要求社会给予帮助，抚养一个女婴。该女婴在广东省人民医院过了1年过1个月，仍然没人领养。许多好心人来信。孕妇急产，实习医生说：生个“大肥仔〞；但是，护士没有告诉产妇该新生儿的性别。9天后，产妇出院拒绝带该新生儿出院。广东省人民医院

女婴纠纷案广州市中级人民法院委托中山医法医物证学教研室亲子鉴定，确定其亲生父母后宣判：该产妇夫妇有抚养孩子的法律义务！1999年中国政府出台政策，允许港人在内地的非婚生子女赴港定居。要求进行亲子鉴定的案例急增。第一局部概述第一节．

Concept应用医学、生物学、分子生物学、遗传学等的理论和技术解决争议个体之间是否存在有亲缘关系的法律问题。

第二节．应用范围及意义民事纠纷〔案〕1〕家庭纠纷5〕财产继承2〕疑产房调错6〕非自然妊娠(试管婴、3〕认亲人工受精、租子宫、卖卵子)4〕婚外生育(抚养权)7〕血缘〔叔侄、姑甥同胞、堂兄妹、表兄妹〕刑事案1〕无名尸体的个人认定-反向亲子鉴定.2〕强奸致孕的亲权鉴定其他1〕方案生育2〕同卵双生3〕骨髓、干细胞移植成活确定意义：为民事诉讼、刑事案件的解决提供证据亲权鉴定案件的分类1.双亲案〔三联体，母亲已经确定〕单亲案(缺父或母)；2.其它认亲案件〔爷孙、叔侄、姨甥、同胞/半同胞等〕。第三节.亲子鉴定的原理3.1医学原理〔难于确定〕1〕是否具有生育能力精子数量(aspermatogenesis)及活力；输卵管是否通畅；2〕是否符合生殖规律—妊娠期〔10个月〕3〕个体特征〔多指畸形〕3.亲子鉴定的原理3.2个体遗传特征从亲代那里获得的，会遵循下面的规律：1)Mendel’sLaw〔获得染色体的父母源性〕2)Y-chromosome—男性伴性遗传3)MitochondrialDNA-母系遗传(异质性与瓶颈理论)4)X-DNA单倍型的遗传Mendel’sLaws〔chromosomes〕1．别离律〔Lawsofsegregation〕,Mendel的假设①每一性状由一对遗传因子〔基因〕〔hereditarydeterminant/factor〕控制；基因一个来自父亲，另一个来自母亲；②每对遗传因子〔即等位基因〕相互分开〔即别离〕，分别入成熟生殖细胞〔精子/卵子〕，每个精子/卵子只含一对遗传因子中的一个；2．自由组合律〔Lawofindependentassortment〕生殖细胞的结合，形成一个新的合子，是随机的。控制不同性状的遗传因子〔等位基因〕是自由组合的。Y染色体DNA的男性伴性遗传同一父源的男性，Y-chromosome的DNA序列相同，除非发生突变：法医学：个体识别、父子及男性亲属的鉴定〔本室研究结果-某村同姓男性个体49人Y-DNA单倍型相同〕；人类学：1.通过对中国东部地区1000多男性Y染色体DNA分析，认为150万人是共同祖先--觉昌安〔16世纪中叶〕的后代，觉昌安的孙子建立了清朝。2.现在中亚有1600万男人带有成吉思汗的Y染色体。技术路线：Y-STR单倍型和/或Y-SNPs单倍型检测X-chromosome同父异母的姐妹，有一个X-chromosome是相同的。

MitochondrionDNA母系遗传按pseudohaplotype方式遗传第四节

亲子鉴定技术的开展简史4.1阶段：朦胧阶段：滴血认亲〔东周列国志—秦始皇是吕不韦的儿子，秦始皇母怀孕12个月〕4.开展简史科学阶段：遗传特征〔18世纪德国多指畸形鉴定〕血型〔1900〕精确阶段：〔1986年省医女婴纠纷案〕RBC血型HLA〔humanleukocyteantigen,-A、-B、-C、-DR、-DP、-DQ，1980〕血清蛋白型同工酶型4.开展简史4.2.DNA分型阶段DNAfingerprinting(RFLP，到达个人认定，1985)VNTR〔variablenumberoftandemrepeat〕STR(shorttandemrepeat)(AFLP)mtDNAcontrolregionDNAsequencingMVR(minisatellitevariantrepeats)-PCRSNP(singlenucleotidepolymorphism)genotyping实现机械化、自动化、数据库第五节

亲权鉴定程序程序：受理;采集样本；检测；分析；结论;接受法庭质证。证据链的重要性程序一.受理；法律保障：行政、司法部门，案件相关人员在场〔签字〕，被采集标本者知情同意；程序二.标本采集；标本真实性是“证据〞可靠的根底；标本唯一性编号；标本传递过程可靠性的控制。亲子鉴定的受理程序1.受理2.签订协议书〔法律文件：责任与权利，风险告知〕3.采集检材：1〕递送检材2〕当场取材3〕送检材料的法律效力不能保证〔保证标本真实性、知情同意、相关证件、两个证人在场的记录〕4.检材传递的法律手续〔传递过程的传接签字〕

亲权鉴定程序程序二.样本的检测①实验技术人员有相关资质②采用的分析技术的科学性〔国际、国内、实验室〕③实验过程样本转移的可溯源性④实验设备、试剂的校准维护⑤实验对照的正确设定、结果正确⑥实验记录的客观、及时目前常用技术STR分型技术多基因座STR分型技术(multiplexSTRgenotyping)以实验用分子量内标〔internalsizestandards〕和基因座Ladders作为参照物备用STR基因座分型试剂和其它技术。5.亲权鉴定程序程序三.分析①确定实验结果〔图谱〕的可靠性：可靠性图谱的标准：每个基因座不超过2个等位基因，每个峰荧光值≥100rfu;

②确保使用的人群资料是符合HWE〔HardyWeinberg’sequilibrium〕的。

每一个实验步骤都有另一个技术人员核查。亲权鉴定程序程序四.鉴定结论和签发检验报告

亲生关系的判断①否认“存在亲生关系〞②支持“存在亲生关系〞③不排除“存在亲生关系〞〔单亲案〕

亲权鉴定程序程序五.司法鉴定人出庭作证〔接受质证〕第二局部检测检测技术1.多基因座STR分型技术2.辅助技术3.质量控制4.鉴定策略(DNA指纹技术因操作繁杂、要求高，无法推广)第一节多基因座STR分型技术1.多基因座STR分型技术(multiplexSTRgenotyping)市售STR分型试剂盒：常染色体，Y-染色体，X-染色体。含分子量内标〔internalsizestandards〕和allelicladders作为参照物，DNA样本。2.峰值>100rfu才可以定为等位基因。3.OL〔off-ladder〕,可通过计算得出该等位基因的值.AllelicLadder荧光标记分子量内标第二节、实验室质量管理1.实验室质量管理体系〔人员和制度〕；2.实验室操作流程的设计:防止交叉污染，PCR产物污染待测样本、水、试剂和用具。3.实验室技术人员的污染的可能性，技术人员mtDNA-D-loop序列档案。第三节、实验技术质量控制

①实验技术人员有相关资质②采用的分析技术的科学性〔国际、国内、实验室〕③实验设备、试剂的校准维护④实验对照的正确设定、结果正确⑤DNA图谱清晰合格。第四节、亲子鉴定的策略1.三联体(triplet)〔母亲已确定〕多基因座(>15loci，including13-CODISsystems〕STR分型技术〔非父排除率>0.5714/locus〕2.单亲案(singleparent/child)多基因座(>18loci)STR分型技术〔非父排除率>0.411/locus〕;母女案,加用mtDNA非编码区序列测定(pseudohaplotype);父子案,加用Y-DNA〔haplotype〕分析;父女、母女案可用X-STR分析。3.备用STR基因座和其它技术的应用。4.其他特殊案件:综合应用上述方法.第三局部结果评价和分析图像的可靠性分析影子峰片段长度峰的荧光强度纯合子与杂合子比较可供分析用荧光标记结果评价和分析1.分析根底1〕各项对照正确2)样本的结果正确3〕可供分析的DNA图谱特征2.符合HWE的人群资料1〕经过HWE吻合度检验2〕属于该人群第一节、实验结果可供分析的根底1.等位基因阶梯(ladder)等对照正确.2.排除以下可能性：1〕长度相同的某些等位基因,不是同一个等位基因;2〕电泳时泳道间的渗漏;〔毛细管电泳时不存在〕3〕区分影子带(stutterband)4〕区分杂合二聚体(heterodimer,heteroduplex)5〕区分检材污染(胎儿脐带血污染有母亲血)(contamination)6〕嵌合体(mosaic)7〕三体综合症(trisomysyndrome)8〕三等位基因现象9〕2个人的混合物10)试剂盒的适用性〔民族差异〕受质疑

(-)(+)杂合二聚体〔PCR产物银染图〕杂合二聚体影子带异常结果3带模板DNA中的杂质太多组织移植后的分型结果多个基因座有2个以上的峰

实验结果可供分析的条件

3.每个基因座只有2个等位基因；4.选用的STR基因座的评价：不存在连锁遗传现象；群体资料适用；不存在引物结合序列的民族差异；

D8S1179－等位基因的缺失；非父排除率要足够高；实验室要有自己的试剂(specificprimers)。

第二节分析图谱的本卷须知相同长度的片段不一定是相同的等位基因；观察图谱的要点：片段的大小，等位基因的峰值〔或峰面积〕>100rfu.

LocusD12S391

19[AGAT]11[AGAC]7AGAT

19*[AGAT]12[AGAC]6AGAT

23[AGAT]14[AGAC]9

23*[AGAT]14[AGAC]8AGAT

23**[AGAT]16[AGAC]6AGAT

25[AGAT]16[AGAC]9

25*[AGAT]16[AGAC]8AGAT序列不同但长度相同—不同等位基因亲权鉴定的辅助技术性染色体DNA分析技术：

DYF155S1，Y-STR

X-STR2.MtDNAD-loop测序CaseDYF155S1locus7Y-STRlociType1Type4Allele(bp)cDYS456DYS464DYS527DYS531DYS709DYS448DYS5221.uncle155-1-(-1)-17133-141805

1513-14-15-1621-2511161911Nephew2.155-1-(-1)-13133-1215051513-13-15-1521-2311161913Grandpa155-15133-1118051512-13-15-1520-2211151711Grandson3.155-15133-1118051512-13-15-1520-2211151711Brother1230-15133-1320051512-13-14-1621-2410141910Brother2230-15133-1320051512-13-14-1621-2410141910Brother3205-17133-721051612-13-13-1320-2312152111(Y－DNA单倍型)检测结果：mtDNAD-loop测序

HVI；HVII;HVIII。

注意异质性问题第四局部

有关概率和计算

有关概率和计算1.非父排除率〔probabilityofexclusion，PE〕2.父权指数〔paternityindex，PI〕3.前概率〔priorprobability,π〕4.父权概率〔probabilityofpaternity,W〕(又称相对父权时机，relativechanceofpaternity,RCP)5.矛盾基因座的父权指数第一节、非父排除率

〔Theprobabilityofexclusion〕

Concept:检测某个基因座作后，能将本来不是亲生父亲却受到指控的随机男人区分出来的概率。用小数点表示：100个随机男人，检查后可被排除的个体数。〔考试时，概念容易错)对基因座效能的评价：非父排除率越高，该基因座的多态性越高。基因座的基因型越多〔该基因座含有等位基因个数多〕且在人群中分布相对平衡，其非父排除率就高。

三联体，基因座非父排除率

的计算单个基因座的非父排除率计算公式

Pi代表该基因座i等位基因的频率(i=1~n)(孩子带有i基因，母亲不带该基因，父亲也不带此基因的概率和)

累积多个多态性基因座的非父排除率Pc=1-(1-p1)(1-p2)(1-p3〕..(1-pn)Pn=各单个基因座的非父排除率单亲案基因座PE值的计算同一个基因座的PEM值比三联体案时低。基因座单亲案非父排除率（PEM）双亲案非父排除率（PE）单基因座累积单基因座累积CSF1PO0.3110.3110.5650.565D16S5390.3990.5860.4740.771190D7S8200.4480.7710.5900.906187D13S3170.3990.8630.4430.947746D5S8180.2760.9010.4510.971312D13S13580.4140.9420.5800.987951D8S11790.4490.9680.6900.996264D18S510.5070.9840.7390.999025D21S110.5120.9920.6820.999690FGA0.5340.9960.7380.999918TH010.3810.9980.5360.999962TPOX0.2560.9980.3500.999975vWA0.4630.9990.6400.999991

算术均数：0.411

算术均数：0.575

表.13个CODIS基因座的非父排除率第二节、父权指数争议父与孩子之间所检测的基因型组合不违反Mendel’sLaw时，就有两种可能性〔或“主张〞，proposition；分别由原告和被告提出〕：第一，该争议父是孩子的亲生父亲〔biologicalfather，以下简称生父〕；〔原告〕第二，他是该人群中的随机男子〔偶然具有孩子生父的基因型组合，以下称随机男子〕。〔被告〕父权指数〔PI值〕

(paternityindex)定义：将原告与被告“主张〞真实的可能性〔概率〕进行比较，得到的值就是似然率〔likelihoodratio,LR〕，此值即为父权指数。PI是一种似然比〔两种互相排斥的假设的比值〕。

××父权指数原义公式Hp代表争议父“是生父的假设〞，Hd代表“是随机男人的假设〞；E代表遗传学证据，I代表非遗传学上的相关证据〔或信息〕。

代表前概率。父权指数的计算公式用公式表示：Hp表示该争议父亲〔AF〕是真父亲的假设；Hd表示该争议父亲〔AF〕是随机男子的假设。Gc表示孩子的基因型。

父权指数

Paternityindex假设为真三联〔争议父母子三联triplet〕/随机男人组成的假三联概率的比值(相当于倍数)。

在不违反Mendel’sLaw时，PI>1。(具体计算公式参考?法医物证学实验指导?)计算时PI值=父传等位基因的概率/随机男人传该等位基因的概率第三节、前概率

(priorprobability)进行遗传标记检查前所能找到的其他证明该事件真实性的证据有力的程度。如果能够证明争议父亲是孩子亲生父亲的其它证据有力，那么前概率高；如果缺乏其它证据，那么前概率低。前概率的符号为p显然，对于在遗传标记检查前的证据难于估计，只能以0.5来表示。第四节、父权概率paternityprobabilityW值(德文Vate.schafts.w,父权关系的可能性)，易于理解，以小数表示W=PI/(PI+1)〔前概率为0.5〕W≥0.9999时,出现误判的概率极低!代表前概率，设=0.5父权概率的计算公式第五节

矛盾基因座的PI计算方法

(AABB建议－2002)1.直接用突变率作PI。2.用突变率作为传递概率〔即用突变率作为PI=X/Y中的X〕。3.用Brenner’s方法。4.用一个常数〔0.002或者0.003〕。5.用突变率除以平均非父排除概率〔54％的实验室用这一方法〕。6.Ayres介绍的方法，要用到发生突变的等位基因突变为孩子所拥有等位基因的突变率，而这突变率目前尚无相应的群体调查资料。第五局部判断标准和结论

判断标准和结论检测STR基因座的起码数量；PI值。〔以起码的基因座数为底线〕1.双亲案2.单亲案3.单亲案结论的特殊性第一节亲子鉴定标准的开展1.早期〔1990年前〕标准W值>0.9973〔相当于PI值>371〕2.中期〔2000年前〕标准W值>0.9993.现在〔2000年后〕标准W值>0.9999双亲案15个STR基因座单亲案18个STR基因座或以上第二节

应该检测多少基因座?PI值？要求PI值≥10000，那么三联体案至少要检测13个STR基因座；本实验室至少要检测15个STR基因座;移民至台湾的要求检测16个基因座.(三联体案时，单个STR基因座的PE≥0.5714)第三节

否认父权的根据1.基因遗传违反遗传规律常染色体STR,SNPs—单倍型违反

Mendel’sLawY染色体不遵循男性伴性遗传mtDNA不遵循母系遗传

2.问题：①突变如何影响判断?

②需要考察单个基因座的排除非父的效能—非父排除率.否认父权的标准1.双亲案矛盾STR基因座≧4个。2.单亲案矛盾STR基因座≧3个。3.PI值<1/1000。第四节

错误否认父权的风险1.检测标本掉错；2.检查表现型时,可能出现的风险表现型物质的表达受影响:发育方面:婴儿期，生理和病理方面:月经期(HLA)，某些疾病，如肿瘤(获得性B抗原).HLA的交叉反响3.遗传变异错误否认父权的风险4.质量体系的缺陷1〕检测抗原时可能出现的弱抗原、交叉反响2〕使用试剂的效能低(生化试剂无效,如电泳缓冲液,显色剂失效等，如抗体的效价低-需要标定,HLA多种来源的抗体,单克隆抗体的弊病)3〕指示剂无效-HLA测定时淋巴细胞死亡,免疫抑制试验时RBC不新鲜;4〕对照不正确。

错误否认父权的风险

防止风险的方法:质量控制(标准化)和增加检测工程第五节

父权肯定检测工程完全符合遗传规律,可以考虑。需要多少个工程？是否检测工程中,只要有1个基因遗传出现矛盾,即可以否认亲权关系?作出肯定结论，需要什么条件?根据Bayes定理,考虑父亲和非父的前概率均为0.5,三联体案“肯定〞或“支持〞结论检测15个STR基因座〔PE>0.5714〕未发现矛盾基因座。或有1个矛盾基因座，检测至少19个基因座。或有2个矛盾基因座，检测至少28个基因座。4.有3个矛盾基因座，检测35个或更多基因座。上述条件下,计算PI值均大于10000。出现3个矛盾基因座时，应该用其它方法进一步鉴定。单亲案结论(使用的STR基因座的PE>0.411)

结论：“不排除亲生关系〞1.最少检测18个STR基因座，未见矛盾现象；2.检测29个STR基因座,只见1个STR基因座矛盾；3.检测41个STR基因座,只有2个STR基因座矛盾；PI值>10000。因为无法排除该单亲没有近亲属(父、兄弟姐妹)顶替的可能性。单亲案结论的陷阱(1)基因座男1(爷)男2(父)男3(子)母D3S135816/171616/1715/17TH017/877/99D21S1129/31.231.2/32.231.231.2/34D18S511713/1716/1716/20PentaE14/1712/1717/2018/20D5S81810/1110/1110/1110D13S31711/128/1212/138/13D7S8208/108/118/1311/13FGA19/2322/2322/2422.2/24D16S5399/1212129/12CSFIPO10/1110/1210/1111/12PentaD98/99/1110/11vWA14/18181816/18D8S117914/151512/1512/17TPOX8/118/1188单亲案结论的陷阱(2)-银染基因座爷父子母D2S1328(bp)153153/169153153D3S1359(bp)209/213213/261213213/217D3S1539(bp)301/313301/313301/305305/309D8S38410/1110/1111/1211/12D11S554(bp)245/249237/245245/253237/253D12S391(bp)213/225213/233213/245237/245D13S631(bp)205/209205201/205201D16S690(bp)340/364312/364348/364344/348D18S386(bp)394/422386/394382/394382/414D18S53511/1411/1511/1616D19S25312/131212/1312/13D19S433(bp)210/222210/218210/218210/214D20S8514/1515/1610/1510/13D21S1411(bp)287/305305/309303/305295/303FES/FPS11/1212/131211/12无法否认争议的单亲有近亲属时,不能下“肯定〞的结论。第六节亲子鉴定的辅助方法1.单母子关系确实定〔支持度〕加做mt-D-loop测序(pseudohaplotype)和异质性2.单父子关系的认定〔支持度〕加做Y-Chromosome检测,Y-STR单倍型，Y-SNPhaplogroup3.兄弟关系〔可计算同胞指数参考〕Y-STR,auto-chr-STR,mt-D-loop序列及异质性4.姐妹关系〔可计算同胞指数参考〕X-STR单倍型遗传mtDNA序列及异质性,auto-chr-STR

5.

姑-侄甥、叔-侄、姨-外甥、舅-外甥关系

叔侄之间的关系确定检查Y-chr的单倍型。

姨、舅与外甥的关系确定

mtDNA序列及异质性

6.

隔代亲缘关系认定

亲子鉴定辅助方法中山大学法医学鉴定中心2021年底以前进行的15000亲权鉴定中，均按照以上原那么进行检验和鉴定，均做到15个以上的STR基因座，在发现4个矛盾基因座时，下排除结论。发现1个和2个矛盾基因座时，分别检验25个STR基因座。共发现突变105例〔Promega试剂盒，ABI377检测，银染复核〕，其中两个基因座发生突变的3例，没有发现有3个矛盾基因座的案例。没有发现有争议的案例。第六局部

遗传变异1、表现型变异2、基因/DNA突变3、STR突变4、mtDNA控制区的变异第一节

遗传表现型的变异原因：1.表型物质表达受影响:发育方面:婴儿期许多血型物质尚未形成，生理和病理方面:月经期(HLA)，某些疾病，如肿瘤(获得性B抗原).HLA的交叉反响,抗原表达水平低—弱抗原。

第二节遗传表现型的变异2.基因的变异1)沉默基因(nullgene)2)cis-AB,3)Oh

4)遗传变异:B+OA

注意:一般基因表达相对稳定GACGCGCGnt261297526657703796803930A1GGGATCAABdelACGCGCGO1delGCGCGCGO1VGGGGCGCGO2Exon6Exon7ABO血型基因结构示意图FrameshiffA、B特异性决定于Exon7O特异性因于nt261缺失而移码〔frameshiff〕致没有相应糖基转移酶B

OOOCrossingoverE6E7AOB基因的E6与O基因的E7重组成A基因B型父与O型母，生出A型孩子ABOOUnequalCrossingover

E6E7E7

CisABB基因E6+E7与A基因的E7重组成Cis-AB基因第二节

STR突变1.

STR基因座两翼序列的变异；

2.重复序列内的变异：1.STR基因座两翼序列变异7repeats8repeatsAATG引物结合序列变异其中一个等位基因的引物结合序列变异，该等位基因无法控增，原来的杂合子就变成了假纯合子。用进口试剂(民族差异)出现的结果

D8S1179位点分型缺失举例检材ProfilerPlus分型单位点分型丢失的等位基因父11010母11313/1515子11414/1515父210/1110/11母21010/1414子210/1310/13父31111/1616母310/1510/15子31010/1616特点：缺失者都表现为假纯合子〔dropout〕3〕核心序列之间插入序列的变异2〕等位基因在等位基因阶梯(ladder)以外〔相关资料的群体样本太小〕1〕核心序列重复次数的增加或减少One-step,two-step,multi-stepmutation

STR遗传变异的分类4〕核心序列碱基置换

非重复次数的遗传变异2.STR重复序列内变异父亲母亲子1子2子3vWA基因座突变举例父

母子1子2子3STR核心序列的变异〔举例〕基因座父母子ACTBP220/26.228.2/29.221/29.213.1/1415/31.214.1/31.217/3527.2/29/218/27.2FGA21/2322/2522/2424/2622/2522/25D2128/3027/3128/30vWA14/1918/1918/2017/1916/1716/18＋1－1＋2－2其它共计CSF1PO0.750.220.030.0080148FGA0.490.500.0050.0050220TH010.250.2500.507TPOX0.50.330.010.1606vWA0.640.340.010.0070.003295D3S13580.540.450.00200.008118D5S8180.580.380.0300.01172STR不同突变形式所占比例〔％，来源于AABB〕(.97)(.99)(.50)(.83)(.98)(.99)

(.96)＋1－1＋2－2其它共计D7S8200.620.340.010.020.01106D8S11790.460.520.020.000.00112D13S3170.650.330.0230.000.00188D16S5390.680.310.000.000.0086D18S510.500.470.0090.0170.000129D21S110.3500.6100.0200.0090.009113D7S8200.6200.3400.0100.0200.010106STR不同突变形式所占比例〔％，来源于AABB〕变异超过2个核心序列的发生率很低(≤0.01)！基因座父系突变率（％,10-3~10-4）D7S820D8S1179D13S317D16S539D18S51D21S11平均（13个基因座）0.150.260.150.080.30.240.17突变等位基因来源的性别比较父：母＝4.075：1父母差异具显著意义〔Z检验，P<0.001〕由于雄性生殖细胞的繁殖分裂非常频繁,特别是DNA复制和染色体分裂时,易发生突变。(67.9%)(16.7%)STR序列的遗传变异小结1.STR基因座两翼序列的变异造成等位基因的漏失，将杂合子误判为纯合子。如D8S11792.STR核心序列的变异〔增加或减少〕one,two,multiple-stepmutation1个、2个重复序列突变占95%、99％以上；父系突变是母系的4倍以上；等位基因组成愈复杂，突变时机愈高。Schematicofstutterproductformationprocess-itmaybethemechanismofSTRmutationWalshetal(1996)NucleicAcidsRes.24:2807-2812SlippedStrandMispairingModel12345123456NormalSTRAlleleReplicationRepeatunitbulgesoutwhenstrandbreathingoccurs基因座父系突变率（％,10-3~10-4）CSF1POFGATH01TPOXVWAD3S1358D5S8180.130.290.020.020.340.110.15广东地区人群(6365家系)15个常染色体STR基因座的突变率

基因座例数突变率（%）观察杂合度统计检验

CSF1PO220.1680.7371.基因座间突变率差异的χ2检验：χ2＝92.471，df＝14，P<0.001D3S1358180.1370.722D5S818120.0910.776D7S820120.0910.763D8S1179220.1680.846D13S31730.0230.793D16S539110.0840.781D18S51270.2060.858D21S11250.1910.8182.观察杂合度与突变率的Prarson相关性检验：r＝0.681，P＝0.005规律:等位基因组成越复杂-突变率越高FGA290.2210.863PENTAD30.0230.792PENTAE260.1980.907TH0110.0080.682TPOX10.0080.594VWA280.2130.798合计2400.1230.782核心序列个别碱基突变举例D20S85的等位基因

8~13:AAAGAAAGAGAAAGAAAGAAAG[AAAG]8~137A:AAAGAAAGAGAAAGAAAGAAAG[AAAG]77B:AAAGAAAAAGAAAGAGAAAGAG[AAAG]76:AAAGAAAAAGAAAGAGAAAGAG[AAAG]6选择STR基因座的原那么1.各自独立遗传的原那么;2.非父排除率〔多态性〕高;3.等位基因间的差异有规律，不易混淆;4.群体遗传资料充分，符合Hardy-Weinberg’sequilibrium;遗传变异概率低。亲子鉴定结果举例：如何判断？检测的基因座争议父争议子争议母D3S1358113，1615，1615，17TH017，97，87,8D21S1131,33.230.2,3130.2,31.2D18S5113,1512,1612,13PentaE5,225,1111D5S81811,1211,1210,11D13S317128,128,11D7S8208,1111,128,12D16S5399,139,1110,11CSFIPO10,121211,12PentaD11,999vWA14,1914,1914,18D8S117912,1311,1311,16FGA19,2619,24.224,24.2出现矛盾STR基因座的概率和似然比

(以CODIS基因座为根底)检测STR基因座数矛盾基因座数P（非父）

P（父）

似然比(≈PI值)9loci04.9×10-40.98462.0×10315.9×10-30.01532.623.1×10-2

0.0001

0.00330.0974.3×10-7

4.4×10-6

40.1941.1×10-9

5.7×10-9

13loci01.7×10-5

0.97785.9×104

12.9×10-4

0.021976.8022.3×10-3

0.0002

0.09930.0111.4×10-6

0.000140.0376.2×10-9

1.7×10-7

出现矛盾STR基因座的概率和似然比

(以CODIS基因座为根底)检测STR基因座数矛盾基因座数P（非父）P（父）

似然比(≈PI值)15loci03.0×10-6

0.97443.2×105

16.1×10-5

0.0252444.325.7×10-4

0.0003

0.53933.3×10-3

2.3×10-6

0.000740.0131.2×10-8

9.0×10-7

17loci05.6×10-7

0.97111.7×106

11.2×10-5

0.02942.3×103

21.3×10-4

0.0004

2.939.0×10-4

3.4×10-6

3.8×10-3

44.2×10-3

2.1×10-8

4.9×10-6

mtDNA的异质性

(heteroplasmy)定义：同一个体有2套以上的mtDNA序列

DNA的遗传变异

一．

变异是绝对的，是进化的前提，是生物多样性的根底二．

遗传是相对的据AABB(AmericanAssociationofBloodBank)统计，在310490例亲权鉴定中，发现了47例〔0.015％〕两个基因座发生突变，5例〔0.002％〕3个基因座发生突变〔包括突变率更高的遗传标记，如小卫星DNA〕。第七局部亲权鉴定的风险评估亲权鉴定的风险评估1.检材是否真实

有无当事人顶替可能？

2.技术的科学性

实验室的质量是否得到控制？试剂、仪器的有效性、可靠性2.1分析表现型时可能发生的；表达水平低导致2.2分析DNA时可能发生的；STR分型技术是否正确

？对照正确？亲权鉴定的风险评估3.有无遗传变异4.分析依据是否可靠使用的群体资料是否为当事人所属群体，是否符合HWE？；是否与生父/生母有近亲关系？5.结论的科学性肯定—“支持〞，“不排除〞否认—“排除〞犯罪DNA数据库相关故事丽迪亚.菲切尔德在一次例行检查后，被告知“你的DNA与孩子的不匹配〞，不信，然后又作了第三次检验。每次结果都相同。警方将丽迪亚告上法庭，指控她窃取别人的孩子。法庭认为医院的出生证明全部是伪造的，决定将孩子送孤儿院或找人领养。数周以后，她的后一个孩子出生时，她将法庭鉴证人员请到现场。孩子出生数分钟以后，鉴证人员提取了孩子的血样，随即进行DNA鉴定。结果也说明这个孩子不是丽迪亚亲生〔生物学〕的。作了进一步检查，说明她有2套DNA－其中1套占主导地位，另一套只出现在某些器官中。从她的卵巢取样时，她的DNA那么和孩子们的完全匹配。〔环球时报20060307〕亲权鉴定的

辅助技术利用Y染色体—STR单体型或利用X-STR单体群分析CasesDYF155S1locus7Y-STRlociType1Type4Allele(bp)cDYS456DYS464DYS527DYS531DYS709DYS448DYS522uncle155-1-(-1)-17133-1418051513-14-15-1621-2511161911nephew155-1-(-1)-13133-1215051513-13-15-1521-2311161913grandpa155-15133-1118051512-13-15-1520-2211151711grandson155-15133-1118051512-13-15-1520-2211151711Brother1230-15133-1320051512-13-14-1621-2410141910Brother2230-15133-1320051512-13-14-1621-2410141910Brother3205-17133-721051612-13-13-1320-23121521113宗缺父亲的亲权鉴定案例(Y－DNA单倍型)检测结果：利用线粒体DNA分析

mtDNA的异质性

(heteroplasmy)定义：同一个体有2套以上的mtDNA序列mtDNA的异质性利用mtDNA控制区异质性规律

作亲缘关系鉴定1.同一个体的不同组织之间出现的异质性位点最多3个。因此两个样本之间不一致的位点到达4个或更多,该两个样本不是来自同一个体或没有母子关系;2.如果被鉴定人之间具有相同位点和数量的异质性位点，且这些位点的发生率很低时，应该确定他们之间的母子或母系亲缘关系。mtDNA控制区异质性规律(1)1.异质性在汉族人群中发布广泛,达34%(51/150);2.异质性在人体在组织器官中发布广泛:脑〔33.3%〕;心肌(32%);骨骼肌(28%);毛发(26%);肝脏(24%);血液(20%);骨骼组织(14.7%)等都可以检测到。3.共检出36个异质性位点(150例),分布顺序为:HVI区(18/36),HVII(10/36),HVIII(7/36)。－－多态性位点多的区段异质性发生率高。mtDNA控制区异质性规律(2)4.所检查的个体中,异质性位点最多3个。提示:两两比对中,不一致的位点到达4个或更多,该两个样本不是来自同一个体;5.同一个体的异质性位点,在不同组织之间的检出率不同;但在同一组织中的检出率是相同的。提示:作两份检材的比对时，应使用相同的组织检材。6.异质性位点的遗传具有相对稳定的倾向，即同一母系的不同个体之间异质性位点相同。提示：异质性位点的检测可以用作亲缘关系的鉴定。用mtDNA确定身份的历史人物mtDNAhelpedtoidentifytheremainsof:CzarNicholasII(Russia),KingLouisXVII(France)outlawJesseJames(USA)法医学史上的一页TsarNicholasII遗骸的身份鉴定----第一例运用mtDNA异质性确证身份的案例

(nt16169C/T)NicholasIIN-II的哥哥N-II在世的母系亲属突变位点突变例数该位点总检测例数突变率D3S13592例1个重复单位突变3270.6116%D5S8184例1个重复单位突变11270.3549%D6S9392例1个重复单位突变171