第五节临床常用免疫学检查课件

第五节 临床常用免疫学检查1临床常用免疫学检查2血清免疫球蛋白检测血清补体检测细胞免疫检测

肿瘤标志物检测自身抗体检测器官与骨髓移植的检测34二．免疫球蛋白（IgA）5正常人血清中IgA含量占血清总Ig的10%~15%，仅次于IgG为（710~3350mg/L）。IgA分为血清型IgA与分泌型（SIgA）两种。分泌型（SIgA）的免疫功能更重要，具有保护黏膜的功能，与局部感染、炎症、肿瘤等病变密切相关。【临床意义】增高：IgA型MM、慢性炎症、类风关、肝硬化、肾病等降低：选择性IgA缺乏症、重链、轻链病、呼吸道感染、三．免疫球蛋白（IgM）6IgM是分子量最大的Ig，为950000，约占血清总Ig的10%，以五聚体形式存在，它不能透过血管璧，主要分布在血管内，有防止败血症的发生的重要作用。人体感染之后，IgM出现最早。【临床意义】增高：初期病毒感染、自身免疫病，原发型巨球蛋白血症。减低：IgG型或IgA型MM、先天性免疫缺陷病、淋巴系统肿瘤、肾病综合症、免疫抑制剂治疗后。四．免疫球蛋白（IgE）7IgE仅占血清总Ig的0.002%。是一种亲细胞抗体，主要的生物学功能是参与I

型变态反应。此外，还参与抗寄生虫感染等。【临床意义】增高：IgE型MM、重链病、肝病、自身免疫病、各种过敏性疾病、寄生虫感染、免疫复合物引起的肾炎等，减低：先天性和获得性丙种Ig缺陷病、恶性肿瘤、微血管扩张共剂失调症、长期可的松治疗。五种免疫球蛋白的生物化学特性8免疫球蛋白 血清含量

/L

占血清Ig%

沉降系数

电泳位置 抗原结合价

产生顺序IgG8~16g/L70~807ra-a122血清型IgA710~3350mg10~156.6~14ra-βa23分泌型IgA不等43IgM0.48~2.12g5~1018~19r1--β1101IgD0.6~0.2mg0.02~17r124IgE0.1~0.9mg0.0028r125五．血清M蛋白9M蛋白或称单克隆免疫球蛋白，由浆细胞异常增殖所产生的，具有相同分子结构和电泳迁移率免疫球蛋白，但不具有抗体活性。[参考值]

蛋白(免疫)电泳、免疫比浊：正常人为阴性【临床意义】多发性骨髓瘤：IgG型＞IgA型，IgD和IgE罕见巨球蛋白血症：大量的单克隆IgM重－轻链病：Ig重链（γ、α、μ）；单克隆游离轻链半分子病：由一条重链和一条轻链组成的单克隆Ig片段异常增生7SIgG病：恶性M蛋白病血清补体检测10补体(complement,C)是一组具有酶原活性的糖蛋白,是抗体发挥溶细胞作用的必要条件。按先后顺序分别称为C1(C1q

、C1r

、C1s)~C9

。参与旁路途径中的成分则以因子命名，如B、D、P、H、I等。在炎症组织内的补体有90%是血清中扩散而来，补体+体液因子+免疫细胞共同参与机体的抗感染免疫反应。具有介导细胞溶解、调理吞噬、免疫黏附以及参与炎症反应引起的机体免疫损伤等作用。免疫复合物既能启动补体系统活化途径，也能启动补体替代途径。补体系统的基本特征：11补体作用无特异性，与反应体系中的抗原—抗体复合物结合。补体系统有两个放大系统，一是由少量C1q引起酶级联反应，使许多C3分子被分解；另一个是C3转化酶的正调节作用。不稳定性，一些补体成分（如C1、C2、C5、C8）性质不稳定，经56oC30min处理就丧失活性。即使在10oC下，其活性不能保持3~4d，故需放置-20oC以下保存。连锁反应，补体成分以非活性蛋白前体存在于血浆中，当补体第1个成分被激活后，依次地活化直至最后一个补体成分。被激活的成分具有酶或其它生物学活性。作用的两面性，激活的补体有生理和病理方面作用，前者表现为抗感染防御，溶解病原体，清除免疫复合物和调节免疫功能等作用；后者表现为引起组织损伤，参与免疫病理过程。一.

总补体溶血活性（CH50）测定原理：补体（C1~C9）能使溶血素（抗体）致敏的绵羊红细胞溶解。既抗原抗体复合物激活待测血清中的C1，从而引起补体传统活化途径的连锁反应，最终导致羊红细胞溶解。补体溶血程度与活性相关，呈一特殊的S

曲线。一般以50%溶血作为检测终点（即CH50）。【临床意义】活性增高：急性炎症、感染、组织损伤、恶性肿瘤等活性减低：各种免疫性复合物性疾病，合成不足见于急慢性病毒性肝炎和遗传性补体成分缺陷症等。12二.

补体C3检测13补体C3

是一种由肝脏合成的β2-球蛋白，在补体系统中含量最高，是传统和旁路途径被激活的关键物质。【临床意义】增高：急性炎症、传染病早期、肿瘤、排异反应等。减低：急性肾小球肾炎、部分自身免疫病患者。血清补体C3活性的检测对疾病的进程和疗效判断提供了重要的依据。三.补体旁路B因子检测14补体旁路B因子是一种不耐热的β-球蛋白。B因子是补体旁路活化途径中的一个重要成分，又称C3激活剂前体。【临床意义】增高：某些自身免疫性疾病、肿瘤、肾病综合症等减低：肝病、急性肾小球肾炎、自身免疫性溶血性 贫血等肿瘤标志物检测15恶性肿瘤是给人类带来深重苦难的疾病，严重威胁着人类健康。据统计，我国每年约有160万人患肿瘤，100万人以上死于肿瘤。肿瘤的及时发现与诊断，对于肿瘤患者提高治愈率及延长生命是至关重要的。肿瘤的诊断除了临床、影象学、病理外，临床实验室辅助检测手段，主要是测定肿瘤患者血液和体液中的肿瘤标志物。一．肿瘤的概念肿瘤（tumor）是细胞呈现不能控制和进行性生长为特征的一类异常肿块。肿瘤的细胞生物学行为：生长缓慢、有完整包膜、与周围组织良性肿瘤 分界清楚和不发生转移肿瘤恶性肿瘤生长快、无完整包膜、向邻近组织侵润生长和向远处转移，严重危害人的生命16肿瘤标志物（tumormarker,TM）是指在肿瘤的发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身所产生的或者是由机体肿瘤细胞反应而产生的，反映肿瘤存在和生长的一类物质，包括蛋白质、激素酶（同工酶）、多胺及癌基产物等。可用生物化学、免疫学及分子生物学等方法进行测定。对肿瘤的辅助诊断、鉴别诊断、疗效观察、病情监测以及预后的评价具有一定的价值。17肿瘤标志物定义：二.

蛋白质肿瘤标志物的检测18（1）甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）[参考值] RIA

和ELISA法；成人<25μg/L是胎儿早期由肝脏合成的血清中主要的蛋白质。胎儿在12~16周时血浆中含量可达到3000μg/L，随后逐渐降低，出生后AFP合成很快受抑制，周岁婴儿的浓度接近成人水平。一般健康成人血浆AFP

浓度<20μg/L

。当肝细胞或生殖腺胚胎组织发生恶性病变时，有关基因重新激活，原来已丧失合成aFP能力的细胞重新开始合成，血中aFP含量升高。[临床意义]19成人血清AFP升高见于：原发性肝癌(70-90%)可在症状出现前6-12个月作出诊断

大于300μg/L，是原发性肝癌重要的指标。但约有18%的病人AFP不升高病毒性肝炎，肝硬化患者AFP浓度有不同程度升高，但其水平通常低于300μg/L。（

3

）

生殖腺胚胎癌

（睾丸癌、卵巢癌、畸胎瘤 等），胃癌或胰腺时AFP升高。（4）孕妇血清AFP增高

中期达高峰，多<

400μg/L.当大于300ug/L时，可反映胎儿宫内死亡、遗传缺陷、先天性神经管畸形、无脑儿、唇裂等。二.蛋白质肿瘤标志物的检测20（2）癌胚抗原（Carcinoembryonic

antigen，CEA）[参考值]

ELISA法和RIA法

；

＜15

μg

/L1965

年首先自人大肠癌组织发现，是胚胎性致癌抗原。主要存在于胎儿消化道上皮组织、胰脏和肝脏。正常CEA入胃肠道。而肿瘤细胞分泌的CEA则进入血液和淋巴液，故血中CEA增高。吸烟者中约有3.9%

的人ECA>15

μg/L。[临床意义]21消化道恶性肿瘤：整个胃肠道恶性肿瘤均可增高。非消化道恶性肿瘤：如卵巢癌、乳腺癌、肺癌等也有不同程度升高。CEA连续随访监测，可用于恶性肿瘤手术后或化疗患者的疗效观察及预后判断。一般情况下，病情好转时血清ECA浓度下降，病情恶化时升高。CEA与其它肿瘤标志物结合测定可提高癌肿的检出率。检测胸、腹水或胃液的CEA含量对鉴别诊断有意义。非肿瘤性疾病：肠道憩室、直肠息肉、结肠炎、肝硬化、肝炎和肺部疾病ECA也有不同程度的升高，但阳性率较低。大量吸烟者、妊娠也可增高。二.蛋白质肿瘤标志物的检测（3）前列腺特异性抗原(Prostate

specific

antigen，PSA)血清PSA分子形式：复合型PSA

(t-PSA)

参考值

<

4.0μg/LF/T比值＞0.25游离型PSA

(f-PSA)

参考值

<

1μg/L（

PSA

）是一种仅由前列腺上皮细胞分泌的糖蛋白，当正常腺管结构遭到良性、恶性肿瘤或炎症的破坏时，其血浆中PSA水平升高。正常人血清中PSA<4ug/L。注意：采集病人的血清标本前，若进行前列腺按摩，将导致血清PSA升高。22[临床意义]23前列腺癌患者可见血清PSA浓度升高。t-PSA血清浓度和阳性率随着病程的进展而增高，因此，PSA可作为监测前列腺癌病情变化和疗效的重要指标。前列腺肥大、前列腺炎，也可见t-PSA和f-PSA水平轻度升高，必须结合其它检查进行鉴别。单独使用t-PSA和f-PSA升高来诊断前列腺癌时很难排除前列腺增生症，特别是当

t-PSA

在

5

μg

/L-10

μg /L

时。此时应用

t-PSA和f-PSA来判断。t-PSA/f-PSA<10%提示前列腺癌，t-PSA和f-PSA比值>25%时提示前列腺增生症。二.

糖脂类肿瘤标志物检测24（1）CA19-9、CA50CA19-9在消化道腺癌病人血清中的浓度可明显升高，是胰腺癌和胆管癌的肿瘤标志物。（2）CA125CA125是存在于卵巢肿瘤的上皮细胞内的糖蛋白类相关抗原，作为卵巢癌的辅助诊断是个重要的标志物。（3）CA15-3CA15-3是乳腺细胞上皮表面糖蛋白的变异体，因为对乳腺癌有一定的特异性，尤其晚期乳腺癌100%，故作为诊断乳腺癌的重要标志物。部分肿瘤标志物选择范围：25癌种睾丸肿瘤膀胱肿瘤前列腺癌乳腺癌、宫颈癌结直肠癌肝癌、胰腺癌肺癌卵巢癌白血病、淋巴瘤肿瘤标志物选择顺序β-HCG、AFP,、AKP、CEAABO(H)、CEA、TPAPSA(包括T-PSA、F-PSA及f/t)、PAPCA153、CA125、CEA、72-4CEA、CA19-9、CA50、CA125、CA242AFP、CEA、CA50、CA19-9、APTCA50、CEA/SCC、NSE、SYFRA-211CA125、CA50、β-HCG、CEA白细胞分化抗原病毒性肝炎标志物26乙型病毒性肝炎标志物检验★机体感染HBV后产生3种不同的抗原抗体系统乙型肝炎病毒表面抗原抗体（HBsAg、HBsAb）乙型肝炎病毒核心抗原抗体（HBcAg、HBcAb）乙型肝炎病毒e抗原抗体（HBeAg、HBeAb）HBcAg存在于肝细胞核内，不游离于血清中，不作常规检查参考值均为阴性27各标志物阳性的临床意义★281.HBsAg为HBV感染的指标★

感染后1~2个月出现，持续数周、数月、数年，甚至终身提示可能的感染，如阳性可作为传染性的标志之一HBsAg+乙型肝炎

潜伏期和急性期慢性迁延性肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化、肝癌慢性

HbsAg携带者292.抗-HBs阳性为一种保护性抗体，对HBsAg有一定的中和作用★在HBsAg转阴后出现，可持续多年， 其滴度与保护作用相平行曾感染过HBV，有一定的免疫力，现已恢复接种乙肝疫苗后被动性获得抗 HBs抗体303.HBeAg阳性是病毒复制、传染性强的指标★31急性肝炎