临床检验基础课件

白细胞计数

白细胞计数无色有核细胞，分为中性粒细胞，嗜酸粒细胞，嗜碱粒细胞，淋巴细胞和单核细胞五种。一．白细胞计数

是测定单位体积（通常是每升）血液中各种白细胞的总数。

白细胞成熟过程祖细胞释放入外周血液血循环血管壁

边缘池循环池原粒细胞早幼粒中幼粒晚幼粒杆状核分叶核成熟池(髓内)分裂池(髓内)贮备池(髓内)白细胞演变过程二、显微镜计数法原理：用稀乙酸将血液稀释并破坏红细胞，混匀后，滴入计数盘中，在显微镜下计数一定范围内的白细胞数，经换算求得每升血液中白细胞总数。器材和试剂白细胞稀释液：冰乙酸2.0ml10g/L亚甲蓝数滴蒸馏水加至100ml

器材：普通光学显微镜、计数板、微量吸管、盖玻片、采血针、棉球、试管血标本采集静脉采血法毛细血管采血法改良计数板结构思考：计数板结构操作

a.加白细胞稀释液0.38ml于一小试管中

b.用微量吸管吸取20ul末梢血。

c.擦去微量吸管外余血，将其插入稀释液底部，轻轻将血放出，并吸取上清液洗涤微量吸管2~3次（注意每次不能冲浑稀释液），混匀。

d.用微量吸管或玻璃棒取混匀的细胞悬液1滴，充入计数池与盖片的缝隙中，静置2-3min，使白细胞下沉。

e.低倍镜计数四角4个大方格内白细胞总数。压线细胞及细胞计数路线计算

X/4×10×20×106/L=白细胞/L式中：在法定计量单位制中用△.△△×109/L表示

X：为4个大方格内白细胞总数。

÷4：为每大方格（即0.1ul）内白细胞平均数。

×10：1个大方格的容积为0.1ul，换算成1ul。

×20：血液的稀释倍数。

×106：将ul换算成L正常参考值成人：（4-10）×109/L新生儿：（15-20）×109/L6月-2岁：（11-12）×109/L6.注意事项

⊙采血时不能挤压过度，因此针刺深度必须适当。

⊙在大方格内压线细胞应按计数原则计数。

⊙稀释液要过滤，小试管、计数板须清洁，以免杂质、微粒等被误认为细胞。

⊙充池前的摇匀要注意，气泡不能太多。

⊙加盖玻片方式：“推式”，不要“盖式”。３、质量考核与评价（1）经验控制

与红细胞数比较

RBC:WBC=500:1

WBC(×109/L)WBC/highpower,HP4~72~47~104~610~136~1013~1810~12

与白细胞分布密度比较１、参考值范围

成人（4～10）×109/L

儿童（5～12）×109/L6月~2岁(11～12）×109/L

新生儿（15～20）×109/L一、名词解释白细胞计数二、填空外周血五种白细胞包括（）、（）、（）、（）、（）。三、是非题1.晚幼粒细胞向杆状粒细胞发育只有形态的改变，没有数量的增加。2.白细胞计数是指测定单位体积外周血中嗜中性粒细胞和淋巴细胞的总和。四、选择题1.成人白细胞参考值是

A（4~10）×109/LB（11~12）×109/LC（5~12）×109/LD（15~20）×109/L练习题红斑狼疮细胞(LE)检查

系统性红斑狼疮（systemiclupuserythe-matosus,SLE)是一种常见自身免疫性疾病，其发生率：国外约50/10万人我国70/10万人黑人及亚裔人群发病率高于欧美人一、概述特点累及多系统、多脏器皮肤、肾脏、血液、神经系统等具有多种自身抗体多见于青年女性，男女之比约为

1:9发病年龄高峰

13~40岁，>60岁约5%临床表现发热：可为唯一首发症状皮肤：面部蝶形红斑、盘状红斑骨、关节：骨无菌性坏死心脏：肾脏：神经系统：消化系统：口腔黏膜溃疡目前仍未真正明了，多因素参与免疫机制缺陷自身抗体、免疫复合物形成和沉积、免疫调节障碍等遗传因素雌激素环境因素病毒感染、药物、阳光和紫外线测定方法及评价1.LE细胞显微镜检查

1948年由Hargraves发现

LE形成需要的条件患者血清中存在LE因子受损或退变的细胞核，即被LE因子作用的核具有吞噬活性的白细胞LE的三种形态

必须找到典型的吞噬体才能报告阳性结果游离均匀体花形细胞簇吞噬体自身抗体：多种多样抗核抗体抗ds-DNA抗体抗Sm抗体2.免疫学检查法临床意义发现LE细胞，结合临床表现方可诊断SLE未找到LE细胞，应进一步做免疫学检查临床意义红细胞沉降率的测定

（ErythrocyteSedimentationRate,ESR）红细胞沉降率的测定

（ErythrocyteSedimentationRate,ESR）

指红细胞在一定条件下的沉降速率。ESR用于一些疾病的鉴别诊断及病情观察；亦是反映红细胞聚集性的一项常用指标之一概念

1）缗钱状红细胞形成期：约数min～10min。

2）快速沉降期：形成缗钱状红细胞下降，约40min。

3）细胞堆积期：细胞堆积在试管底部。ESR分三个时期测定方法及评价1.魏氏法：ICSH推荐的参考方法，为血沉测定的标准方法。

2.潘氏法：适用于儿童临床应用少

3.血沉仪法：能够得到动态血沉结果，并绘出血沉曲线，有利结果分析，应用逐渐增多１、红细胞因素：1)RBC的数量：2)红细胞形态：3)红细胞的聚集状态：影响血沉的因素缗钱状缗钱状２、血浆因素：红细胞能相当稳定的悬浮于血浆中，这一特性称为红细胞的悬浮稳定性。这种稳定，决定于血浆中白蛋白与球蛋白、纤维蛋白原的比例。

纤维蛋白原、球蛋白、胆固醇等可引起血沉增快。

白蛋白、糖蛋白、卵磷脂使血沉减慢。操作魏氏法：取静脉血1.6ml，按4:1比例与柠檬酸钠溶液（0.4ml）混匀，然后吸入清洁、干燥的标准魏氏血沉管，并调至“0”刻度处。血沉管在室温下（18～25℃）严格垂直放置。避免阳光直照、振动和血液外溢。1h后，读出血浆凹液面底部至沉降红细胞柱顶部之间距离，即为血沉结果。

魏氏法成年男性：0~15mm/h

成年女性：0~20mm/h

潘氏法成年男性：0~10mm/h

成年女性：0~12mm/h参考值临床意义

Clinicalsignificance

（一）生理变化新生儿红细胞含量较高而纤维蛋白含量低，血沉较慢12岁以下儿童红细胞生理性低下，血沉较快老年人随着年龄的增长（50岁以后）纤维蛋白含量逐渐增高血沉开始高于青壮年时期，女性高于男性ESR的临床意义（二）病理性血沉加快各种炎症组织损伤恶性肿瘤自身免疫性疾病高球蛋白血症高胆固醇血症贫血

ESR是一项灵敏但缺乏特异性的指标，很多疾病均表现为ESR加快，但对无症状人群的筛检率很低，约4％~8％.

故ESR不能用来诊断疾病，亦不能作为健康人群的筛检指标。血沉检测的适应征

1.急性与慢性感染、炎症的鉴别诊断2.结核病、风湿病的病情观察3.组织损伤与坏死的鉴别4.恶性肿瘤与良性肿瘤的鉴别注意

血沉变化大多是由于血浆中蛋白质变化所致，而这种变化一旦发生并不能迅速消除，因此复查血沉的间隔时间不宜太短，至少应间隔1周以上红细胞计数、血红蛋白测定

红细胞检查一、红细胞计数-----基本项目(redbloodcellcount，RBC)

[检测原理]

1．手工显微镜法:稀释、计数、换算。

一、红细胞计数-----基本项目(redbloodcellcount，RBC)

[检测原理]

2．血液分析仪法:电阻抗法，

流式细胞术激光检测法。显微镜计数法1.原理2.试剂a.Hayem稀释液：较传统稀释液氯化钠---调节渗透浓度，硫酸钠---调节渗透浓度，防止红细胞聚集，氯化高汞---防腐剂，有毒缺点：a.如遇高球蛋白血症或自身凝集素增高患者，红细胞易凝集或形成串钱状，影响计数。

b.枸橼酸钠稀释液：应用广泛

c.普通生理盐水:急诊3.操作

a.取小试管一支，准确加入红细胞稀释液2.0ml。

b.毛细血管采血，取血10ul，稀释200倍。

c.混匀，充池，静置2min后以低倍镜计数中间大方格的四角和中央5个中方格内的红细胞4.计算红细胞数/L=5个中方格内红细胞×5×10×200×106/L

或×1012/L5个中方格内红细胞数1005.报告方式

RBC（/L）=.×1012/L6.注意事项

a.红细胞数量较多，在计数时应按计数原则计数

b.防止血液凝固，并要充分混匀7.正常参考值男性:（4.00-5.50）×1012/L女性:（3.50-5.00）×1012/L新生儿:（6.00-7.00）×1012/L示教方法学评价

[质量保证]

参考值

①成年：男性(4.09～5.74)X1012/L，女性(3.68～5.13)X1012/L。②新生儿(5.2～6.4)X1012/L。③婴儿(4.0～4.3)X1012／L。④儿童(4.0～4.5)X1012／L。

1．生理性变化

(1)年龄与性别的差异：

(2)精神、激素因素：

(3)剧烈体力运动和劳动：

(4)气压降低：

(5)妊娠中、后期：临床意义

2．病理性变化(1)增多：

1)相对性增多：血液浓缩如呕吐、高热、腹泻等

2)绝对性增多：①继发性增多：组织缺氧：EPO代偿性增高，心肺疾病、先心、异常Hb等；

EPO非代偿性增高：如肾癌、肝癌、子宫肌瘤、卵巢癌等。②原发性增多：如真红、良性家族性红细胞增多症等临床意义

2．病理性减少通过红细胞计数、血红蛋白测定或血细胞比容测定就可确定有无贫血。按病因，可将贫血分成红细胞生成障碍、过度破坏丢失(失血)。临床意义

2．病理性减少

1)红细胞生成减少：骨髓功能衰竭的再生障碍性贫血造血物质缺乏或利用障碍肾性贫血缺铁性贫血铁粒幼细胞贫血巨幼细胞贫血临床意义

2．病理性减少2)红细胞破坏过多：①红细胞内在缺陷：膜缺陷遗传性球形红细胞酶缺陷G-6-PD缺乏症血红蛋白异常地贫②红细胞外在异常：免疫反应如新生儿溶血病机械性损伤如红细胞破碎综合征高温烧伤、药物和毒物、疟疾和细菌所致溶贫、脾功能亢进所致溶血性贫血。临床意义

2．病理性减少3)红细胞丢失(失血)：如急性、慢性失血性贫血。药物引起贫血：①抑制骨髓的药物如阿司匹林②维生素B12、叶酸吸收如口服避孕药、异烟肼③铁吸收障碍药物如皮质类固醇④溶血的药物如头孢类、氨基甙类抗生素

临床意义

红细胞计数医学决定水平：①高于6.8×1012／L，应采取相应的治疗措施。②低于3.5×1012／L

为诊断贫血的界限，应寻找原因。③低于1.5×1012／L

应考虑输血。二、血红蛋白测定(hemoglobinconcentrationdetermination)

血红蛋白(血色素，Hb或HGB)是一种微红色的胶体物质，分子量为64458。是一种呼吸载体，每克血红蛋白可携带氧1.34毫升．成人红细胞总量约有600g血红蛋白，可携氧800毫升。(一)血红蛋白分子结构及成分

FEPFe++血红素珠蛋白Hb(一)血红蛋白分子结构及成分组成Hb的多肽链两大类：①α类链：αζ和θ链；②非α链：βδγε链。

α链由141个氨基酸组成，

β链由146

个氨基酸组成。(一)血红蛋白分子结构及成分每个Hb分子由2条α类肽链和2条β类肽链组成，每条珠蛋白肽链含有1个亚铁血红素。(一)血红蛋白分子结构及成分在正常状态，机体有99％Hb的铁原子呈Fe2+状态，称为还原Hb，1％的Fe3+为高铁血红蛋白，只有亚铁状态的Hb才能与氧结合，此时称氧合血红蛋白

(二)血红蛋白的合成激素的调节①红细胞生成素，②雄激素。在人体不同生长时期，Hb种类与比例不同：出生后不久β与γ链合成大致等，出生后3个月HbA（α2β2）＞95%，

HbF（α2γ2）≤1％。出生后HbA2（α2δ2）占Hb总量的2～3％。

氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法

除了硫化血红蛋白外各种血红蛋白

高铁氰化钾氧化

高铁血红蛋白，

CN-结合稳定的棕红色复合物氰化高铁血红蛋白。540nm处有一吸收波峰，用分光光度计测定换算成每升血液中的血红蛋白浓度，或制备标准曲线供查阅。检测原理

氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法

反应在18-25℃中进行，加入非离子表面活性剂可加快红细胞的溶解，减少脂蛋白沉淀产生的溶液浑浊。

检测原理方法学评价方法学评价常用的比色法氰化高铁血红蛋白(hemiglobincyanide，

HiCN)测定法十二烷基硫酸钠(sodiumdodecylsulfatehemoglobin，

SDS-Hb)测定法碱羟血红蛋白(alkalinehaematindetergent，

AHD575)测定法、叠氮高铁血红蛋白(HiN3)测定法溴代十六烷基三甲铵(cetyltrimethylammoniumbromide，

CTAB)测定法等。国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐HiCN测定法作为Hb测定标准法。

[质量保证]采血部位不同的采血部位结果不同，静脉血比毛细血管血的结果低10％～15％。

[参考值]①成年：男性：131—172g／L；女性：113—151g／L；②新生儿：180—190g／L。③婴儿110—120g／L④儿童120—140g／L

⑤老年(70岁以上)：男性：94—122g／L；女性：87—112g／L。

[临床意义]临床意义和红细胞计数相似，但对贫血程度的判断上优于红细胞计数。

[临床意义]需注意：

①在某些病理情况下，血红蛋白和红细胞的浓度不一定能正确反映全身红细胞总容量的多少。②

在某些贫血，RBC和Hb减少不一致，同时测RBC和Hb

，对诊断更有意义。

①血液总容量改变：大量失血早期②全身血浆容量改变：失水或水潴留血液浓缩或稀释影响因素

1．显微镜分析法采用人工显微镜法血涂片染色观察，是仪器法校准的参考方法和检测的复核方法。

2．计算机图像分析建立统计模型，以正常红细胞形态为参比、作出分析，可用于与红细胞形态变化疾病的辅助诊断。3.血液分析仪法提供红细胞数量及其他相关参数，对异常结果报警，但不能提供确切信息，需用镜检血涂片核实。

检测原理及方法学评价

1.有合格的血液细胞形态检验人员2.选择细胞分布均匀区域进行镜检3.注意完整规范的检查顺序低倍镜细胞分布和染色油镜细胞形态,是否存在其他异常细胞4．减少人为影响因素全片浏览质量保证复习题一、名词解释红细胞计数红细胞显微镜计数二、填空：原始红细胞经（）、（）、（）、（）各阶段，最终发育为成熟红细胞，入血后红细胞的平均寿命为（）天。三、是非

1.一般情况下，红细胞计数包括白细胞。

2.网织红细胞属完全成熟红细胞。

小结我们本节课所讲的内容主要是红细胞的计数和血红蛋白的测定方法，我们不仅要掌握红细胞的发育阶段，还要掌握红细胞计数的原理及正常参考范围。在血红蛋白测定中我们要知道血红蛋白的组成，氢化高铁血红蛋白测定法的原理，还要牢记红细胞和血红蛋白测定的临床意义！复习题一、名词解释贫血血红蛋白测定二、填空1、在正常情况下，血液中血红蛋白主要为（）和（），以及少量的（）和（）。2、氰化高铁血红蛋白测定法，除（）外各种血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白。三、是非题1.血红蛋白测定可用于了解贫血的程度，红细胞数量和形态可了解贫血的类型。四、选择正常成年男性血红蛋白参考值是A110~150g/LB120~160g/LC170~200g/LD120~150g/L红细胞形态检查

1．正常红细胞形态双凹圆盘形大小均一，平均7.2μm(6.7-7.7μm)；淡粉红色，Hb充盈良好，中央部位为生理性淡染区，大小约为直径的1／3；胞质内无异常结。临床意义4．红细胞内出现异常结构寄生虫：疟原虫、微丝蚴、杜利什曼原虫等时，红细胞异常形态新方法分为：①异常红细胞②血红蛋白形成不足③红细胞形成后损伤④刺红细胞和红细胞碎片⑤红细胞增生性变化⑥其他异常。

1、红细胞计数有哪些方法?红细胞显微镜计数法原理如何?

红细胞计数参考方法是什么?2．血红蛋白测定有哪些方法?WHO和ICSH推荐何种参考方法?

3．简述氰化高铁血红蛋白测定法的实验原理?4．有哪些人为原因可造成红细胞形态异常?思考题小结小结本章节学习了红细胞的形态检查，这些是我们必须要掌握的内容，对于异常形态的红细胞我们要知道在哪些疾病中常见那种异形红细胞，异常红细胞有助于我们对疾病的鉴别。复习题简述正常红细胞形态。简述异常红细胞形态。网织红细胞计数（reticulocyte,Ret）网织红细胞（reticulocyte）计数界于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡阶段细胞。因其胞质中残存的核糖核酸经碱性染料活体染色后，呈现点状或线网状结构，故名网织红细胞。

网织红细胞的形态特点和分型Ret通常较成熟红细胞稍大，直径8.0～9.5微米。HeiLmyer分型（五型）NCCLS和ICSH分型（四型）外周血哪型多？花冠型丝球型网型

破网型点粒型HeiLmyer分型(二)染色原理网织红细胞内RNA的磷酸基（带负电荷）能与灿烂甲酚蓝、新亚甲蓝等碱性染料的有色反应基团（带正电荷）结合，形成核酸与碱性染料复合物的多聚体，凝成颗粒，其颗粒又联缀成线，而构成浅蓝或深蓝的网织状结构。１、计数方法（1）手工方法：米勒（Miller）窥盘法该方法可明显提高计数的准确性和准确性.

B31A将Miller窥盘放在显微镜目镜中,通过窥盘中大小方格间的9比1比例关系计算RBC数和网织RBC。抗凝全血噻唑橙染色，用流式细胞仪分析样本中10000个细胞，报告网织红细胞%和平均荧光强度。荧光强度越强，细胞越幼稚。流式细胞仪分析简便，结果精确、灵敏，消除了取样带来的误差。（２）流式细胞仪法：成人：0.005～0.015（0.5%～1.5%)新生儿：0.03～0.06绝对值：(24～84)×109/L２、参考值（1）评价骨髓增生能力，判断贫血类型再障时，明显降低。绝对值低于15×109/L可做为急性再障的辅助诊断指标。失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明显高于正常。营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持正常、轻度升高或降低。３、临床意义

（2）评价疗效

网织红细胞反应：IDA或巨幼细胞贫血分别给予铁剂、维生素B12或叶酸治疗3-5d后，网织红细胞计数值开始上升，7-10d达到最高(10%左右)；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、血红蛋白开始升高。 骨髓移植、EPO治疗后：若骨髓开始恢复造血功能，网织红细胞计数值上升。３、临床意义（3）放、化疗监测机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制，早期HFR和MFR降低，然后才检测到网织红细胞的降低。而停止放、化疗，骨髓功能恢复后，又见上述指标依次上升。３、临床意义（Reticulocyteproductionindex,RPI）病人网织红细胞/d*病人PCV/正常人PCV（男0.45，女0.40）意义：＞3提示溶血性贫血或急性失血性贫血；＜1提示为骨髓增生低下或红细胞系成熟障碍性贫血。网织红生成指数小结本章节我们学习了网织红细胞计数，我们要知道网织红是哪个阶段的红细胞，它的升高表示什么，它的减低又代表什么，熟练掌握有助于对疾病的鉴别诊断！复习题一、名词解释：网织红细胞二、填空依据ICSH的定义，网织红细胞分（）（）（）（）型。三、是非题1、网织红细胞是幼稚红细胞。2、再生障碍性贫血网织红细胞降低。3、溶血性贫血网织红细胞增多。4、网织红细胞是反映骨髓造血状态的指标。四、选择题1、成人网织红细胞的相对参考值：A0.5%～1.5%B0.5%～1.0%C0.5%～2.5%D0.1%～1.5%五、简述网织红细胞的临床意义。

血栓与止血一般验验

TestOfThrombusAndHemostasis血管中流动的血液为什么不凝固破损的血管为什么能止血生理状态下机体内存在着复杂的凝血系统和抗凝系统凝血血栓抗凝出血几个概念出血：血管损伤后，血液自血管内溢出或滚出称为出血止血：自发的阻止出血和维持体内血液呈溶胶状态的一系列过程称止血。凝血：血液由溶胶状态转变为凝胶状态称为凝血血栓形成：在某些因素作用下，活体血管内或心腔中形成纤维蛋白块或出现血凝块的过程称为血栓形成血栓：血栓形成所产生的纤维蛋白或血凝块称为血栓。对活体而言，血液在血管内流动的中止就是血栓，因而止血是发生血栓的基础。止血与血栓的基础理论：

人们把血管、血液有形成分、血浆凝固和调节凝固物质、血液循环与血管构成的血流特性，归结于止血与血栓的基础理论。止血与血栓的检验：就是对上述参与因素的检验。作为一个临床医生如何正确选择实验室检查项目如何正确判断检验结果首先应弄清正常的凝血与抗凝机制正常止血机能两个方面四个因素凝血机制抗凝机制血管壁（vesselwall）血小板（platelet）凝血系统（coagulationsystem）抗凝及纤溶系统（anticoagulationandfibrinolytic）凝血与抗凝机制的病理生理基础止凝血机制

血管壁止血血小板止血凝血系统激活血管的止血作用血管的收缩血小板的激活凝血系统的激活局部血粘度的增高

血管与止血（一）结构：1.内皮层：由单层内皮细胞组成，可产生或释放ET（血管长效收缩）、PGI-2（抑制血小板聚集）、vWF、t-PA、TM、PAI-1、EPCR、AT-Ⅲ。2.中膜层：由基底膜、胶原、平滑肌、弹力纤维等组成，含丰富的TF、PGI-2合成酶等。3.外膜层：由结缔组织组成，起支持和分隔作用2.内皮细胞的作用血管壁完整时，内皮细胞主要表现其抗血栓活性内皮细胞的作用（2）当尽管壁受损时，内皮下组织暴露时，血小板迅速粘附于受损处，内皮细胞受到刺激释放一些有利于止血。激活外源性凝血途径激活内源性凝血途径继而，内皮细胞释放一些纤溶促进物质，溶解局部形成的血栓，修复血管壁，以恢复血管的流通性。止血过程血管损伤血管收缩胶原暴露组织因子释放出血凝血酶血肿压迫血管血流减慢血小板血栓止血血栓止血纤溶酶血管再通血小板

粘附聚集释放血小板作用(1)血小板粘附功能(2)血小板聚集功能(3)血小板的释放反应(4)促凝作用（5）血块收缩功能（6）维护血管内皮的完整性

1.粘附功能（adhesionfunction）

指血小板具有粘附于血管内皮下胶原及其他异物表面的能力

需要物质GPIb-ⅨvWF

III型胶原纤维结合蛋白（Fn）二、血小板的止血功能功能聚集

血小板膜蛋白的作用GPIaCD49b与GPIIa复合，是胶原的受体GPIbCD42c与GPIX复合，vWF受体GPIcCD49f与GPIIa复合，Fn与层素受体GPIIaCD29与GPIa和Ic复合，胶原Fn受体GPIIb/IIIaCD41aFg的受体，也是vWF和Fn受体GPIVCD36TSP的受体GPV凝血酶的受体GPIXCD42a同GPIb粘附

指活化后的血小板与血小板之间相互连接的特性

参加因素GPIIb/IIIa纤维蛋白原钙离子聚集诱导剂：

ADP、肾上腺素、TXA2、花生四烯酸2.聚集功能（aggregationfunction）IIbIIb粘附与聚集的结果血小板大量聚集、粘附于血管破损处形成白色血栓暂时止血3．释放功能：(releasereaction)

指血小板在诱导剂的作用下，将胞浆内特殊颗粒中的内含物释放出血小板的反应

-颗粒·

致密颗粒·

溶酶体与血小板粘附、聚集、炎症反应、创伤修复动脉粥样硬化等作用有关PF3提供凝血因子催化表面4．血小板促凝活性

5．血块收缩功能血凝块血小板血栓收缩蛋白纤维蛋白网收缩血清被挤出血块缩小加固血小板止血功能（小结）①维持血管壁的完整性，毛细血管的通透性②粘附、聚集在血管破损处，形成白色血栓③释放活性物质，促进血小板聚集，增强血管收缩④促进凝血过程⑤血块收缩，形成稳固血栓一期止血血管壁的反应性收缩血小板粘附、聚集形成白色血栓凝血：血液凝固简称凝血；指血液从流动的溶胶状态转变为不流动的凝胶状态的过程。凝血的步骤：凝血活酶形成凝血酶原凝血酶形成纤维蛋白原纤维蛋白形成多种凝血因子作用下目前公认的凝血因子共14个，按罗马字命名的有12个，尚有高分子量激肽原(HMWK)，激肽释放酶原(PK)大多数由肝脏产生，其中II、VII、IX、X合成依赖于Vitk，称Vitk依赖因子正常情况下，所有因子都处于无活性状态三、凝血因子及血液凝固机制

凝血因子生理条件下，凝血因子一般处于无活性状态。

14个凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ、ⅩⅢ（其中Ⅵ是Ⅴ的活化形式已被废除）、激肽释放酶原(PK)、高分子激肽原（HMWK）。其中Ⅲ因子是组织因子、Ⅳ因子是钙离子，除组织因子外其他因子均存在于血浆内。

其中Vk依赖因子4个Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ

（一）依赖维生素K凝血因子FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ：共同特征：

N末端含有γ羧基谷氨酸残基，此羧基依赖VitK在合成的最后环节转接上去。合成部位：肝脏

维生素K1广泛分布于绿色植物及动物肝脏中，K2则是人体肠道细菌的代谢产物，在鱼肉中也较丰富。由于肠道梗阻、腹泻等原因引起脂类消化吸收不良，或在长期服用广谱抗菌素抑制了肠道细菌生成的情况下，易引起维生素K的缺乏。新生儿肠道中无细菌，很少合成维生素K，摄入量也不足，易缺乏。

（二）接触系统因子FⅪ、FⅫ、PK、HMWK：共同特征：

①可被液相物质（Ⅱa）或固相物质（体外带负电荷）激活。

②活化后的因子能接触激活其他因子。

③可参与纤溶和补体系统的活化。

④缺乏：无出血，而有血栓形成及纤溶活性下降的趋势。合成部位：肝脏ⅫⅫa

胶原固相激活激肽释放酶HMWK激肽激肽释放酶原XIIfXIXIa纤维蛋白原前激活物纤溶酶原激活物

酶八、辅三、底物一II、VII、IX、X、K依赖肝脏合成血中全I、II、V、VIII血清无

因子Ⅰ（即纤维蛋白原，fibrinogen,

Fg）：血浆中浓度为2.0~4.0g/L。其功能除直接参与凝血过程外，还参与动脉粥样硬化及肿瘤血行转移等，Fg水平升高还是诱发心、脑血管疾病发病的重要因素。

FII(凝血酶原)是单链糖蛋白，分子量68,000，血浆浓度200mg/L。凝血酶原活化肽是近年来许多研究的主要内容。1985年Covers-Riemslag等发现，凝血酶原活化肽在凝血酶原激活过程中起调节作用。1987年Pieters等报道，它具有中和肝素的作用。

组织因子TF又称为组织凝血活酶,广泛存在于人体和动物组织细胞中，特别在脑、肺和胎盘组织中含量丰富，属于糖蛋白，

因子Ⅳ（即钙离子，Ca2+）：在凝血过程中Ca2+参与FⅪ与FXIII的活化，参与FⅨa与FⅧa、TF和FⅦa、FⅩa与FⅤa等复合物的活化。

因子V（factorV,

FV）：亦称易变因子

FV是FXa的辅因子，参与凝血酶原的激活。因子VII（factorVII，FVII）它是由TF介导的外源性凝血激活途径的启动酶。

因子VIII（factorVIII，FVIII）血友病A缺乏FVIII，可根据血浆FVIII：C活性分为重症（1％），中等度（1~5％）和轻度（5~25％）。

vWF系一种多聚体，成熟vWF是不均一蛋白，vWF有两方面的功能，第一作为血浆中凝血因子Ⅷ的载体，第二促进血小板粘附于受损血管壁。vWF的缺乏可导致血管性血友病（vWD）。

因子IX（factorIX，FIX）FIX又称抗血友病B因子，是单链糖蛋白，分子量57000，血浆浓度约80nmol/L。FIX可被FIXa或TF－FVII(a)复合物激活，两者反应都需要钙离子的存在。

因子X（factorX，FX）FX(又称为Stuart-Prower因子)FX既可被多成分酶复合物FX酶（tenase,由FIXa、FVIIIa、钙离子和磷脂组成）激活，又可被TF－FVIIa复合物激活。

因子XI（factorXI,FXI）：

因子XII（factorXII,FXII）：接触因子，

FXII缺陷不像其他凝血因子缺陷，病人无任何出血症状，实际上从那时起，接触活化凝血理论（内源凝血活化途径）就已面临着严峻挑战，现在发现TF-Ⅶa复合物可使FⅨ活化成FⅨa.，启动内源性凝血系统

前激肽释放酶（prekallilarein,PK）高分子量激肽原（highmolecularwightkininogen,HMWK）未正式命名的两个凝血因子因子I，纤维蛋白原因子II,凝血酶原因子III,组织凝血活酶因子IV,钙离子因子V,易变因子，前加速素因子VII,稳定因子，血清凝血酶原因子VIII,抗血友病球蛋白(AHGA),抗血友病因子（AHF)甲因子IX,抗血友病因子乙(AHFB)因子X,前期加速素，STUART因子因子XI,抗血友病因子丙因子XII,接触因子因子XIII,纤维蛋白稳定因子记忆方法：纤凝组钙、易变稳定甲乙加丙、接触稳定

二.凝血因子的功能及其分子基础（一）纤维蛋白形成的基础（二）凝血酶形成的基础（三）凝血活化的基础三.凝血机制（一）内源凝血途径（二）外源凝血途径（三）共同途径ⅫⅪⅨⅩa-Ⅴa-Ca2+-PF3ⅩⅢaⅫaⅪaⅨaⅩProthrombinThrombinFibrinogenFIBRINCLOTFibrinmonomerFigure3.COAGULATIONCASCADEⅧa-phospholipid-Ⅸa-Ca2+内源凝血系统（一）内源凝血途径（intrinsicpathway）FⅦa

+TF固、液Ⅹa-Ⅴa-Ca2+-PF3ⅩⅢaⅩProthrombinThrombinFibrinogenFIBRINCLOTFibrinmonomerFigure3.COAGULATIONCASCADETissuefactor（TF）ⅦⅦaⅦa-TF-Ca2+外源凝血系统（二）外源凝血途径（extrinsicpathway）Ⅹa-Ⅴa-Ca2+-PF3ⅩⅢaⅩProthrombinThrombinFibrinogenFIBRINCLOTFibrinmonomerFigure3.COAGULATIONCASCADE共同途径（三）共同途径ⅫⅪⅨⅩa-Ⅴa-Ca2+-PF3ⅩⅢaⅫaⅪaⅨa+Ⅷa

+PF3ⅩProthrombinThrombinFibrinogenFIBRINCLOTFibrinmonomerTissuefactor（TF）ⅦⅦaⅦa-TF-Ca2+Figure3.COAGULATIONCASCADECa2+内源凝血系统外源凝血系统共同途径

IIaCa2+

VIII---------------VIIIaIIIPlt------------------PF3Ca2+

IIaXaV——————————————VaCa2+正常凝血过程（瀑布学说）PF3

磷脂

凝血酶原(II)凝血酶(IIa)

纤维蛋白原(I)可溶性纤维蛋白稳固性纤维蛋白

[内源性途径]胶原等带负电荷表面PKaPKXII——————XIIaHMWK[外源性途径]组织损伤释放组织因子（III）XIXIaIIaIXIXaVIIaVIIXIIIXIIIa参加因子：所需时间：X

Xa（凝血旁路）VIII、IX、XI、XIIV、X、II、IIII、VIICa2+、PF3、磷脂3~8min二期止血内源性凝血途径：XIIXIIXVIIICa2+及PKHMWK外源性凝血途径:IIIVIICa2+共同凝血途径IIIVX四、正常抗凝及纤溶系统（一）细胞抗凝机制单核-巨噬细胞吞噬清除凝血过程有关物质和产物（二）体液抗凝机制

血液中存在多种抗凝物质及抗凝系统

1．抗凝血酶III（antithrombinIII，AT-III）

AT-III灭活IIa、IXa、Xa、Ⅺa、

XIIa、激肽释放酶肝素

2.组织因子途径抑制物

(tissuefactorpathwayinhibitorTFPI)

TF

ⅦaⅩaTFPI灭活Ⅶa、TF、Ⅹa

TF

Ⅶa3.蛋白C系统蛋白C（ProteinC,PC）蛋白S（ProteinS,PS)血栓调节素（thrombomodulin,TM）活化蛋白C抑制物(activatedproteinCinhibitor,APCI)（三）纤维蛋白溶解系

（fibrinolysis，纤溶系统）

主要作用：分解纤维蛋白（原），清除血管内由于纤维蛋白沉积引起的阻塞，保持血流通畅最重要的生理性抗凝系统XIIaPK纤溶酶原纤溶酶u-PAt-PA＋＋纤维蛋白原纤维蛋白单体稳固纤维蛋白

纤溶酶纤溶酶纤溶酶

Bβ1-42Bβ15-42

D二聚体、多聚体A、B、C、HA、B、C、HX、Y、D、EX’、Y’、D’、E’X’、Y’、D’、E’

被降解的纤维蛋白（原）产物统称为FDP

凝血因子

纤溶系统血小板抗凝系统血管内皮细胞

血栓与止血一般验验

TestOfThrombusAndHemostasis血管中流动的血液为什么不凝固破损的血管为什么能止血生理状态下机体内存在着复杂的凝血系统和抗凝系统凝血血栓抗凝出血几个概念出血：血管损伤后，血液自血管内溢出或滚出称为出血止血：自发的阻止出血和维持体内血液呈溶胶状态的一系列过程称止血。凝血：血液由溶胶状态转变为凝胶状态称为凝血血栓形成：在某些因素作用下，活体血管内或心腔中形成纤维蛋白块或出现血凝块的过程称为血栓形成血栓：血栓形成所产生的纤维蛋白或血凝块称为血栓。对活体而言，血液在血管内流动的中止就是血栓，因而止血是发生血栓的基础。止血与血栓的基础理论：

人们把血管、血液有形成分、血浆凝固和调节凝固物质、血液循环与血管构成的血流特性，归结于止血与血栓的基础理论。止血与血栓的检验：就是对上述参与因素的检验。作为一个临床医生如何正确选择实验室检查项目如何正确判断检验结果首先应弄清正常的凝血与抗凝机制正常止血机能两个方面四个因素凝血机制抗凝机制血管壁（vesselwall）血小板（platelet）凝血系统（coagulationsystem）抗凝及纤溶系统（anticoagulationandfibrinolytic）凝血与抗凝机制的病理生理基础止凝血机制

血管壁止血血小板止血凝血系统激活血管的止血作用血管的收缩血小板的激活凝血系统的激活局部血粘度的增高

血管与止血（一）结构：1.内皮层：由单层内皮细胞组成，可产生或释放ET（血管长效收缩）、PGI-2（抑制血小板聚集）、vWF、t-PA、TM、PAI-1、EPCR、AT-Ⅲ。2.中膜层：由基底膜、胶原、平滑肌、弹力纤维等组成，含丰富的TF、PGI-2合成酶等。3.外膜层：由结缔组织组成，起支持和分隔作用2.内皮细胞的作用血管壁完整时，内皮细胞主要表现其抗血栓活性内皮细胞的作用（2）当尽管壁受损时，内皮下组织暴露时，血小板迅速粘附于受损处，内皮细胞受到刺激释放一些有利于止血。激活外源性凝血途径激活内源性凝血途径继而，内皮细胞释放一些纤溶促进物质，溶解局部形成的血栓，修复血管壁，以恢复血管的流通性。止血过程血管损伤血管收缩胶原暴露组织因子释放出血凝血酶血肿压迫血管血流减慢血小板血栓止血血栓止血纤溶酶血管再通血小板

粘附聚集释放血小板作用(1)血小板粘附功能(2)血小板聚集功能(3)血小板的释放反应(4)促凝作用（5）血块收缩功能（6）维护血管内皮的完整性

1.粘附功能（adhesionfunction）

指血小板具有粘附于血管内皮下胶原及其他异物表面的能力

需要物质GPIb-ⅨvWF

III型胶原纤维结合蛋白（Fn）二、血小板的止血功能功能聚集

血小板膜蛋白的作用GPIaCD49b与GPIIa复合，是胶原的受体GPIbCD42c与GPIX复合，vWF受体GPIcCD49f与GPIIa复合，Fn与层素受体GPIIaCD29与GPIa和Ic复合，胶原Fn受体GPIIb/IIIaCD41aFg的受体，也是vWF和Fn受体GPIVCD36TSP的受体GPV凝血酶的受体GPIXCD42a同GPIb粘附

指活化后的血小板与血小板之间相互连接的特性

参加因素GPIIb/IIIa纤维蛋白原钙离子聚集诱导剂：

ADP、肾上腺素、TXA2、花生四烯酸2.聚集功能（aggregationfunction）IIbIIb粘附与聚集的结果血小板大量聚集、粘附于血管破损处形成白色血栓暂时止血3．释放功能：(releasereaction)

指血小板在诱导剂的作用下，将胞浆内特殊颗粒中的内含物释放出血小板的反应

-颗粒·

致密颗粒·

溶酶体与血小板粘附、聚集、炎症反应、创伤修复动脉粥样硬化等作用有关PF3提供凝血因子催化表面4．血小板促凝活性

5．血块收缩功能血凝块血小板血栓收缩蛋白纤维蛋白网收缩血清被挤出血块缩小加固血小板止血功能（小结）①维持血管壁的完整性，毛细血管的通透性②粘附、聚集在血管破损处，形成白色血栓③释放活性物质，促进血小板聚集，增强血管收缩④促进凝血过程⑤血块收缩，形成稳固血栓一期止血血管壁的反应性收缩血小板粘附、聚集形成白色血栓凝血：血液凝固简称凝血；指血液从流动的溶胶状态转变为不流动的凝胶状态的过程。凝血的步骤：凝血活酶形成凝血酶原凝血酶形成纤维蛋白原纤维蛋白形成多种凝血因子作用下目前公认的凝血因子共14个，按罗马字命名的有12个，尚有高分子量激肽原(HMWK)，激肽释放酶原(PK)大多数由肝脏产生，其中II、VII、IX、X合成依赖于Vitk，称Vitk依赖因子正常情况下，所有因子都处于无活性状态三、凝血因子及血液凝固机制

凝血因子生理条件下，凝血因子一般处于无活性状态。

14个凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ、ⅩⅢ（其中Ⅵ是Ⅴ的活化形式已被废除）、激肽释放酶原(PK)、高分子激肽原（HMWK）。其中Ⅲ因子是组织因子、Ⅳ因子是钙离子，除组织因子外其他因子均存在于血浆内。

其中Vk依赖因子4个Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ

（一）依赖维生素K凝血因子FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ：共同特征：

N末端含有γ羧基谷氨酸残基，此羧基依赖VitK在合成的最后环节转接上去。合成部位：肝脏

维生素K1广泛分布于绿色植物及动物肝脏中，K2则是人体肠道细菌的代谢产物，在鱼肉中也较丰富。由于肠道梗阻、腹泻等原因引起脂类消化吸收不良，或在长期服用广谱抗菌素抑制了肠道细菌生成的情况下，易引起维生素K的缺乏。新生儿肠道中无细菌，很少合成维生素K，摄入量也不足，易缺乏。

（二）接触系统因子FⅪ、FⅫ、PK、HMWK：共同特征：

①可被液相物质（Ⅱa）或固相物质（体外带负电荷）激活。

②活化后的因子能接触激活其他因子。

③可参与纤溶和补体系统的活化。

④缺乏：无出血，而有血栓形成及纤溶活性下降的趋势。合成部位：肝脏ⅫⅫa

胶原固相激活激肽释放酶HMWK激肽激肽释放酶原XIIfXIXIa纤维蛋白原前激活物纤溶酶原激活物

酶八、辅三、底物一II、VII、IX、X、K依赖肝脏合成血中全I、II、V、VIII血清无

因子Ⅰ（即纤维蛋白原，fibrinogen,

Fg）：血浆中浓度为2.0~4.0g/L。其功能除直接参与凝血过程外，还参与动脉粥样硬化及肿瘤血行转移等，Fg水平升高还是诱发心、脑血管疾病发病的重要因素。

FII(凝血酶原)是单链糖蛋白，分子量68,000，血浆浓度200mg/L。凝血酶原活化肽是近年来许多研究的主要内容。1985年Covers-Riemslag等发现，凝血酶原活化肽在凝血酶原激活过程中起调节作用。1987年Pieters等报道，它具有中和肝素的作用。

组织因子TF又称为组织凝血活酶,广泛存在于人体和动物组织细胞中，特别在脑、肺和胎盘组织中含量丰富，属于糖蛋白，

因子Ⅳ（即钙离子，Ca2+）：在凝血过程中Ca2+参与FⅪ与FXIII的活化，参与FⅨa与FⅧa、TF和FⅦa、FⅩa与FⅤa等复合物的活化。

因子V（factorV,

FV）：亦称易变因子

FV是FXa的辅因子，参与凝血酶原的激活。因子VII（factorVII，FVII）它是由TF介导的外源性凝血激活途径的启动酶。

因子VIII（factorVIII，FVIII）血友病A缺乏FVIII，可根据血浆FVIII：C活性分为重症（1％），中等度（1~5％）和轻度（5~25％）。

vWF系一种多聚体，成熟vWF是不均一蛋白，vWF有两方面的功能，第一作为血浆中凝血因子Ⅷ的载体，第二促进血小板粘附于受损血管壁。vWF的缺乏可导致血管性血友病（vWD）。

因子IX（factorIX，FIX）FIX又称抗血友病B因子，是单链糖蛋白，分子量57000，血浆浓度约80nmol/L。FIX可被FIXa或TF－FVII(a)复合物激活，两者反应都需要钙离子的存在。

因子X（factorX，FX）FX(又称为Stuart-Prower因子)FX既可被多成分酶复合物FX酶（tenase,由FIXa、FVIIIa、钙离子和磷脂组成）激活，又可被TF－FVIIa复合物激活。

因子XI（factorXI,FXI）：

因子XII（factorXII,FXII）：接触因子，

FXII缺陷不像其他凝血因子缺陷，病人无任何出血症状，实际上从那时起，接触活化凝血理论（内源凝血活化途径）就已面临着严峻挑战，现在发现TF-Ⅶa复合物可使FⅨ活化成FⅨa.，启动内源性凝血系统

前激肽释放酶（prekallilarein,PK）高分子量激肽原（highmolecularwightkininogen,HMWK）未正式命名的两个凝血因子因子I，纤维蛋白原因子II,凝血酶原因子III,组织凝血活酶因子IV,钙离子因子V,易变因子，前加速素因子VII,稳定因子，血清凝血酶原因子VIII,抗血友病球蛋白(AHGA),抗血友病因子（AHF)甲因子IX,抗血友病因子乙(AHFB)因子X,前期加速素，STUART因子因子XI,抗血友病因子丙因子XII,接触因子因子XIII,纤维蛋白稳定因子记忆方法：纤凝组钙、易变稳定甲乙加丙、接触稳定

二.凝血因子的功能及其分子基础（一）纤维蛋白形成的基础（二）凝血酶形成的基础（三）凝血活化的基础三.凝血机制（一）内源凝血途径（二）外源凝血途径（三）共同途径ⅫⅪⅨⅩa-Ⅴa-Ca2+-PF3ⅩⅢaⅫaⅪaⅨaⅩProthrombinThrombinFibrinogenFIBRINCLOTFibrinmonomerFigure3.COAGULATIONCASCADEⅧa-phospholipid-Ⅸa-Ca2+内源凝血系统（一）内源凝血途径（intrinsicpathway）FⅦa

+TF固、液Ⅹa-Ⅴa-Ca2+-PF3ⅩⅢaⅩProthrombinThrombinFibrinogenFIBRINCLOTFibrinmonomerFigure3.COAGULATIONCASCADETissuefactor（TF）ⅦⅦaⅦa-TF-Ca2+外源凝血系统（二）外源凝血途径（extrinsicpathway）Ⅹa-Ⅴa-Ca2+-PF3ⅩⅢaⅩProthrombinThrombinFibrinogenFIBRINCLOTFibrinmonomerFigure3.COAGULATIONCASCADE共同途径（三）共同途径ⅫⅪⅨⅩa-Ⅴa-Ca2+-PF3ⅩⅢaⅫaⅪaⅨa+Ⅷa

+PF3ⅩProthrombinThrombinFibrinogenFIBRINCLOTFibrinmonomerTissuefactor（TF）ⅦⅦaⅦa-TF-Ca2+Figure3.COAGULATIONCASCADECa2+内源凝血系统外源凝血系统共同途径

IIaCa2+

VIII---------------VIIIaIIIPlt------------------PF3Ca2+

IIaXaV——————————————VaCa2+正常凝血过程（瀑布学说）PF3

磷脂

凝血酶原(II)凝血酶(IIa)

纤维蛋白原(I)可溶性纤维蛋白稳固性纤维蛋白

[内源性途径]胶原等带负电荷表面PKaPKXII——————XIIaHMWK[外源性途径]组织损伤释放组织因子（III）XIXIaIIaIXIXaVIIaVIIXIIIXIIIa参加因子：所需时间：X

Xa（凝血旁路）VIII、IX、XI、XIIV、X、II、IIII、VIICa2+、PF3、磷脂3~8min二期止血内源性凝血途径：XIIXIIXVIIICa2+及PKHMWK外源性凝血途径:IIIVIICa2+共同凝血途径IIIVX四、正常抗凝及纤溶系统（一）细胞抗凝机制单核-巨噬细胞吞噬清除凝血过程有关物质和产物（二）体液抗凝机制

血液中存在多种抗凝物质及抗凝系统

1．抗凝血酶III（antithrombinIII，AT-III）

AT-III灭活IIa、IXa、Xa、Ⅺa、

XIIa、激肽释放酶肝素

2.组织因子途径抑制物

(tissuefactorpathwayinhibitorTFPI)

TF

ⅦaⅩaTFPI灭活Ⅶa、TF、Ⅹa

TF

Ⅶa3.蛋白C系统蛋白C（ProteinC,PC）蛋白S（ProteinS,PS)血栓调节素（thrombomodulin,TM）活化蛋白C抑制物(activatedproteinCinhibitor,APCI)（三）纤维蛋白溶解系

（fibrinolysis，纤溶系统）

主要作用：分解纤维蛋白（原），清除血管内由于纤维蛋白沉积引起的阻塞，保持血流通畅最重要的生理性抗凝系统XIIaPK纤溶酶原纤溶酶u-PAt-PA＋＋纤维蛋白原纤维蛋白单体稳固纤维蛋白

纤溶酶纤溶酶纤溶酶

Bβ1-42Bβ15-42

D二聚体、多聚体A、B、C、HA、B、C、HX、Y、D、E