DB21-T 2827.5-2017畜禽疫病防治与净化技术规范 第5部分：鸡白痢平板凝集试验操作技术规范

ICS11.220

B41

备案号：58540-2018DB21

辽宁省地方标准

DB21/T2827.5—2017

畜禽疫病防治与净化技术规范

第5部分：鸡白痢平板凝集试验操作技术

规范

Technicalspecificationsofpreventionanderadicationofanimalepidemicdisease

Part5:Technicalspecificationsoftheoperationinplateagglutinationtestonpullorum

disease

DB21/T2827.5—2017

前言

标准《畜禽疫病防治与净化技术规范》按照GB/T1.1-2009给出的规则起草，分为七个部分：

——猪繁殖与呼吸综合征美洲经典株与高致病性变异株病毒RT-PCR鉴别检测方法

——动物炭疽防治技术规范

——猪伪狂犬病防治技术规范

——规模猪场蓝耳病免疫净化技术规范

——鸡白痢平板凝集试验操作技术规范

——种鸡场鸡白痢净化技术规范

——鹅血清HA-HI抗体检测技术规范

本部分为标准《畜禽疫病防治与净化技术规范》的第5部分

本部分由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。

本部分由辽宁省畜牧兽医局归口。

本部分负责起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心，辽宁省动物医学研究院。

本部分主要起草人：王宏燕，顾贵波，薛树山，石霖，闫海滨，高原，何利昆，兰德松，邓文超，

孙世宇，郑洪玲，孟祥菲，王竹，关淼。

II

DB21/T2827.5—2017

畜禽疫病防治与净化技术规范

第5部分：鸡白痢平板凝集试验操作技术规范

1范围

本标准规定了鸡白痢检测的全血平板凝集试验、血清平板凝集试验和种蛋蛋黄平板凝集试验的技术

要求。

本标准适用于鸡白痢的现场检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T536-2002鸡伤寒和鸡白痢诊断技术

3实验准备

3.1实验材料

3.1.1鸡白痢鸡伤寒多价染色抗原、强阳性血清、弱阳性血清、阴性血清。

3.1.2透明塑料薄膜：A4纸规格。

3.1.3衬板：在A4纸上，分割出96个方形区域，每一个方形区域里有一个直径为2cm的圆，该圆形

区域即为凝集试验的反应区。凝集试验时，涂布成该圆形区域大小的面积。

3.1.4移液器、枪头、酒精棉球、注射器、15mL离心管、1.5mL离心管、手电筒。

3.2实验样品

3.2.1全血制备

用酒精棉球对鸡的翅静脉或鸡冠进行消毒后，用针头刺破鸡的翅静脉或鸡冠，用移液器吸取0.05mL

血液备用。

3.2.2血清制备

将鸡侧卧保定后，用酒精棉球消毒翅静脉窝区后，在距离翅静脉窝大约0.3cm处，使针管与近心端

保持45度进针，稍稍将针头轻插进血管，轻拉活塞，当有血液开始被吸出后，保持注射器位置不动，让

血液缓缓吸入注射器针管内，达到所需的采血量后，用棉球压迫血管上的伤口约30s止血，将针头拔掉，

把注射器内的血液徐徐注入15mL离心管，不能有气泡，也不能振荡。逐一编号，仔细核对，倾斜放置。

血液样品夏天在常温下，冬天在25℃～37℃温箱中放置1h左右，即可析出血清，将血清吸入1.5mL

离心管备用。

3.2.3卵黄制备

1

DB21/T2827.5—2017

用碘酒和酒精棉球对种蛋表面进行消毒，在种蛋的小端，用镊子打破蛋壳，留一个蚕豆大小的孔，

把蛋清流尽，用移液器吸取0.5mL蛋黄，放入1.5mL离心管中，吸取等量的生理盐水加入离心管中，

与蛋黄充分混匀，吸取0.05mL卵黄稀释液备用。

3.3实验操作

3.3.1将透明塑料薄膜放在衬板上，使透明塑料薄膜与衬板完全重合，衬板上的凝集反应区域（直径

为2cm的圆形区域）即可透过塑料薄膜呈现在操作者面前；

3.3.2移液器吸取0.05mL的抗原滴在圆形反应区域的中心；

3.3.3用移液器吸取0.05mL血液（或血清或卵黄），滴在抗原上，然后用枪头将抗原和血液混合均

匀，并涂布成衬板上圆形区域大小；

3.3.4反应在20℃～25℃条件下进行，反应2min，用手电筒反照塑料薄膜即可判定结果；

3.3.5设置阴性血清、强阳性血清、弱阳性血清的对照反应。

3.4结果判定

3.4.1凝集反应判定标准

3.4.1.1100%凝集（＋＋＋＋）：紫色凝集块大而明显，混合液稍浑浊；

3.4.1.275%凝集（＋＋＋）：紫色凝集块较明显，混合液有轻度浑浊；

3.4.1.350%凝集（＋＋）：出现明显的紫色凝集颗粒，但混合液较为浑浊；

3.4.1.425%凝集（＋）：仅出现少量的细小颗粒，而混合液浑浊；

3.4.1.5不凝集（－）：无凝集颗粒出现，混合液浑浊。

3.4.2在2min内，强阳性血清与抗原呈现100%凝集（＋＋＋＋），弱阳性血清与抗原呈现50%凝集

（＋＋），阴性血清与抗原不发生凝集反应（－）。

3.4.3在2min内，被检全血（或血清或卵黄）与抗原出现≥50%凝集，则为阳性，不发生凝集反应

则为阴性，凝集反应＜50%则判为可疑，将可疑鸡隔离饲养一个月后，再做检测，若仍为可疑反应，则

判为阳性。

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2

DB21/T2827.5—2017

目次

前言................................................................................II

1范围...............................................................................1

2规范性引用文件.....................................................................1

3实验准备...........................................................................1

3.1实验材料.........................................................................1

3.2实验样品.........................................................................1

3.2.1全血制备.......................................................................1

3.2.2血清制备.......................................................................1

3.2.3卵黄制备.......................................................................1

3.3实验操作.........................................................................2

3.4结果判定.........................................................................2

I

DB21/T2827.5—2017

目次

前言................................................................................II

1范围...............................................................................1

2规范性引用文件.....................................................................1

3实验准备...........................................................................1

3.1实验材料.........................................................................