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透射电镜技术

TransmissionElectronicMicroscopyTechnique小组成员李丹李琨郭靖王艳婷曹蕾指导老师吴岩教授2007级电子显微镜技术硕士研究生课程1一、概述电子显微镜是一种高精密度的电子光学仪器，它具有较高分辨本领和放大倍数，是观察和研究物质微观结构的重要工具。为人类认识世界开辟了更广阔的天地。2二、透射电镜的结构及原理

目前，主流的透射电镜镜筒是电子枪室和由6～8级成像透镜以及观察室等组成。阴极灯丝在灯丝加热电流作用下发射电子束，该电子束在阳极加速高压的加速下向下高速运动，经过第一聚光镜和第二聚光镜的会聚作用使电子束聚焦在样品上，透过样品的电子束再经过物镜、第一中间镜、第二中间镜和投影镜四级放大后在荧光屏上成像。电镜总的放大倍数是这四级放大透镜各级放大倍数的乘积，因此透射电镜有着更高的放大范围（200×～1000000×）。

3巨噬细胞吞噬细菌的电子显微镜图像图14三、透射电镜技术的样品制备1、超薄切片：将包埋块中的生物样品切成一定厚度的薄片，在透射电子显微镜下观察细胞的细微结构。以了解不同结构形态、不同功能的细胞内部结构和成分。2、冷冻复型：一种制备透射电子显微镜样品的方法。也可称为冷冻断裂或冷冻蚀刻技术。在生物、化学科学等领域，是一项重要的实验技术。5超薄切片技术主要包括取材、固定、包埋、切片、染色等步骤。6冷冻复型技术流程化学固定防冻保护

样品冷冻和断裂

冷冻蚀刻和冷冻复型复型膜剥离和捞膜图27光学显微镜与电子显微镜的区别项目电子显微镜光学显微镜照明光源电子束可见光照明波长加速电压80kV时，波长其中紫色光波长400nm

为0.0042nm

分辨率0.2nm0.2μm（肉眼分辨0.2mm）放大倍数100万倍1000倍成像透镜电磁透镜玻璃透镜照明介质1.33x10-4Pa以上真空度空气、玻璃、油焦距调整调整物镜电流，改变磁场改变物镜与样品之间距离

强度调整焦距

调焦样品50～100nm超薄切片厚切片样品载体具有支持膜载网载玻片8Thecomparisonpictureof

microscopeandtransmissionelectronmicroscope图3图49项目扫描电镜透射电镜分辨本领70～100Å2Å放大倍数20～40万倍100万倍加速电压1～50kV几十千伏～几百千伏图像特点景深长、三维立体结构景深小、两维平面结构样品制备固定－脱水－临界点干燥固定－脱水－包埋－超薄切

－喷涂金属片－重金属染色样品尺寸1cm²

50～100nm切片样品损伤光斑直径只有几十埃的电大约1μm直径电子束打到

子束在样品上扫描，对样样品上，造成一定程度损伤

品损伤极小样品成像信号

二次电子、背散射电子透射电子放大倍数调节用衰减器改变扫描线圈电调整中间镜电流改变放大率

流，进行放大率调节

决定分辨率因素

入射电子束直径决定图像

分辨率。加速电压、透镜缩小率

扫描电镜和透射电镜的比较

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