T-SDYZXCP 003-2023 畜禽产品中硝基呋喃代谢物、氯霉素残留量的检测 微阵列生物芯片试剂盒法

学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载ICS

65.120学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载CCS

B

46团 体 标 准T/SDYZXCP

003—2023畜禽产品中硝基呋喃代谢物、氯霉素残留量的检测 发布学ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准兔兔ｗ下载学ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准兔兔ｗ下载学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SDYZXCP

003—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载 本文件按照

GB/T

—《标准化工作导则 第

1

起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由山东省优质畜产品协会提出并归口。本文件主要起草人：汤迪朋、张博文、王英英、李俊玲、李周敏、张坤、朱晓飞、智军海、李晴、吴立国、杨豪男、孟超、时川、许丹科、闫传琦、张超、周嘉明、徐海峰。Ⅰ学ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准兔兔ｗ下载学ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准兔兔ｗ下载学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SDYZXCP

003—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载1 范围本文件规定了畜禽产品中呋喃它酮代谢物、呋喃唑酮代谢物、呋喃西林代谢物、呋喃妥因代谢物、氯霉素残留量检测的微阵列生物芯片试剂盒法。谢物、氯霉素的检测。本文件硝基呋喃代谢物的检出限为

0.17

μg/kg

0.07

，定量限为

μg/kg。2 规范性引用文件文件。GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 原理标准曲线定量。5 试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。5.1 水：GB/T

，三级。5.2乙酸乙酯。5.3 正己烷。5.4 甲醇：优级纯。5.5 抗体溶液：含有抗呋喃它酮代谢物单克隆抗体、抗呋喃唑酮代谢物单克隆抗体、抗呋喃西林代谢物单克隆抗体、抗呋喃妥因代谢物单克隆抗体、抗氯霉素单克隆抗体。2

℃～8

℃避光保存，有效期

6个月，使用前摇匀。5.6 显色液

A：称取

0.17

g

100

的硝酸银溶液。2

℃～8

℃避光保存，有效期

6

个月，使用前摇匀。1学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SDYZXCP

003—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载5.7 显色液

B：称取

1.10

g

对苯二酚，用水溶解后定容至

100

，得到浓度为

的对苯二酚溶液。2

℃～8

℃

6

个月，使用前摇匀。5.8 混合显色液：临用前将显色液

A（5.6）和显色液

B（5.7）

混合均匀。5.9

2.68

g

NaHPO·12HO0.39

g

NaHPOOg

氯化钠（NaCl

1

000

。5.10 洗涤液：称取

2.68

g

磷酸氢二钠（NaHPO·12HO），0.39

g

磷酸二氢钠（NaHPOO），8.5

g

氯化钠（NaCl），2

吐温-20，加水溶解后稀释至

1000

。5.11

0.15

g

100

。2

℃～8

℃效期

6

个月，使用前摇匀。5.12 1

盐酸溶液：移取

100

。5.13 1

4.0

g

100

。5.14 磷酸盐缓冲溶液：称取

8

g

氯化钠（NaCl），0.2

g

氯化钾（KCl），3.63

g

磷酸氢二钠（NaHPO·12HO）,0.24

g

磷酸二氢钾（KHPO），溶于

900

7，加水定容至

1000

。5.15 硝基呋喃代谢物衍生物混合标准储备溶液（

）：分别准确称取适量的呋喃它酮代谢物

A执行）（准确至

0.000

1

g5.4

100

20

℃6

个月。5.16氯霉素标准储备溶液（

μg/mL）：准确称取适量的氯霉素标准品（按照附录

A

执行）

（准确至

0.000

1

g），用甲醇（5.4）溶解并定容至

100

。-20℃

6

个月。5.17 硝基呋喃代谢物混合标准储备溶液（100

）：分别准确称取适量的呋喃它酮代谢物、呋喃

A

执行）

（准确至

0.000

1

g用甲醇溶解并定容至

100

。-

℃以下避光保存，有效期

6

个月。5.18 硝基呋喃代谢物衍生物混合标准中间溶液（

）：准确量取

1

00

硝基呋喃代谢物衍生物混合标准储备溶液（5.15）于

100

容量瓶中，用水定容。2

℃～8

℃避光保存，有效期

6

个月。5.19 氯霉素标准中间溶液（

）：准确量取

5.16）于

100

容量瓶中，用水定容。2

℃～8

℃

6

个月。5.20100

备溶液（5.17）于

容量瓶中，用水定容。2

℃～8

℃

6

个月。5.215.185.195.20制成标准系列溶液，具体浓度见附录

B。2

℃～8

℃避光保存，有效期

6

个月。5.22 微阵列生物芯片：

微孔。固定有人工合成呋喃它酮代谢物抗原、人工合成呋喃唑酮代谢物抗2

℃～8

℃避光保存，有效期

℃～25

℃平衡

30

min

以上。6 仪器设备6.1

生物芯片分析仪，分辨率不低于

1200

ppi6.2

分析天平：精度为

0.01

g

和

0.000

1

g。6.3

芯片孵育仪：可调温度范围为室温～100℃。转速不低于

。6.4

离心机：转速不低于

4000

。2学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SDYZXCP

003—2023学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载6.5 氮吹仪。6.6 涡旋振荡器。6.7 水浴锅。7 样品取不少于

g

样品，去除皮、筋膜及脂肪，均质混匀，-18

℃下避光保存。取类型相同，均匀一致，且仪器响应值小于方法定量限

30%的样品，作为空白样品。8 试验步骤8.1 提取

g±0.05

g

50

4

），

1

5.12），100

），涡旋

3

80

℃水浴

5

5.14）、

1

5.13

6

5.2），涡旋

30

s。4000

离心

5

min

3

上层清液至

55

℃

复溶液（）和

1

正己烷（5.3），涡旋

30

s，4000

离心

5

min，取下层清液待测。8.2 加样分别取

50

µL

5.21）、

8.15.22

℃、600

反应

。8.3 洗板

250

5.10

10

s

3

纸上拍干。8.4显色加入

37

℃、

避光显色

12

min±1

min

内。甩干孔内液体，加入

µL

洗涤液（5.10

3

次，在吸水纸上拍干，待测。8.5 测定将显色后的芯片放入生物芯片分析仪中进行分析。以标准品百分比灰度值为纵坐标（%μg/L物、呋喃妥因代谢物、氯霉素的浓度。9试验数据处理mg/kg13学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载𝜔

=

𝑉学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载𝜔

=

𝑉

𝑐×…………………（1）𝑉12

式中：𝜔

——量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c——由标准曲线得到的试样溶液中呋喃它酮代谢物、呋喃唑酮代谢物、呋喃西林代谢物、呋喃妥因代谢物、氯霉素的质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；——提取溶液的体积，单位为毫升（）；

——）；——分取溶液的体积，单位为毫升（）；

——g）；1

000——单位换算。10 质量控制10.1 阴性对照称取空白试样，按照

8.1～8.5

操作。10.2 阳性对照准确称取空白试样

1.00

g（准确至

0.01

g），置于

50

离心管中，加入硝基呋喃代谢物混合标准中间溶液（5.20）5

µL，氯霉素标准中间溶液（5.19）2

µL，此质控样中的呋喃它酮代谢物、呋喃唑酮代谢物、呋喃西林代谢物和呋喃妥因代谢物的浓度为

μg/kg，氯霉素的浓度为

0.2

，按照

8.1～8.5

操作。11方法准确度和精密度11.1 准确度质控试验回收率为

80%～120%。11.2 精密度在重复性条件下，两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的

20%。4中文名称英文名称登记号分子式分子量纯度%呋喃它酮代谢物衍生物2-NP-AMOZ183193-59-115H18N4O5334.33≥95.0呋喃唑酮代谢物衍生物2-NP-AOZ19687-73-110H9N3O4235.20≥95.0呋喃西林代谢物衍生物2-NP-SEM16004-43-68H8N4O3208.17≥95.0呋喃妥因代谢物衍生物2-NP-AHD10H8N4O4248.19≥95.0呋喃它酮代谢物3-Amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone,

43056-63-98H15N3O3201.22≥95.0呋喃唑酮代谢物3-Amino-2-oxazolidinone,

3H6N2O2102.09≥95.0呋喃西林代谢物

SEM57-56-75N3O75.07≥95.0呋喃妥因代谢物1-Aminohydantoin

AHD2827-56-73H5N3O2151.55≥95.0氯霉素Chloramphenicol,

CAP56-75-711H12N2O5323.13≥95.0载．ｃｘｗｚｆ．ｂ学兔兔ｗｗｗｏｍ标准下T/SDYZXCP

003—2023载．ｃｘｗｚｆ．ｂ学兔兔ｗｗｗｏｍ标准下附 录 A（规范性）硝基呋喃代谢物和氯霉素中英文名称、CAS

号、分子式、分子量和纯度硝基呋喃代谢物和氯霉素中英文名称、CAS

号、分子式、分子量和纯度见表

A.1。表

表

硝基呋喃代谢物和氯霉素中英文名称、CAS

号、分子式、分子量和纯度标准品名称2-NP-AMOZμg/kg2-NP-AOZμg/kg2-NP-SEMμg/kg2-NP-AHDμg/kg氯霉素μg/kg标准工作溶液

100000标准工作溶液

20.150.150.150.150.06标准工作溶液

30.300.300.300.300.12标准工作溶液

4