《食用油中苯并a芘的测定酶联免疫吸附定量法》编制说明

2《食用油中苯并[α]芘的测定酶联免疫吸附定量法》编制说明主编单位和参编单位、人员及分工等。苯并[a]芘危害大、超标事件频发、亟需建立高灵芘污染范围广、程度重，严重影响食品安全及人民群众生命健康。食用油中苯并[a]芘61/T967-2015《植物油中苯并[a]芘的测定液相色谱-荧光检测法》、DB13/T低成本的检测需求。KJ201910是定性检测，且市场缺少相应产品。目前，市场亟需食品中苯并[a]芘的快速检测产品及相应标准。通过制定磁微粒化学发光法检测食品中苯并[a]芘，能帮助推动我国食用油、畜禽肉、乳制品等产品质量安全生产，有效保障食3李培武，中国农业科学院油料作物研究所，研究华权高，武汉华美维士康生物工程有限公司，董二、标准编制原则和确定标准的主要内容(如技术指标、参数公式、性能、要求、实验方法、检验规则等)的论据:4本标准规定了酶联免疫吸附定量法测定油脂中苯并[a]芘含量的原理、试剂、本标准适用于大豆油、菜籽油、花生油等食用取样量为1g时，3次重复检测结果的相对标准偏差（RSD%）分别为3.84%、表1食用植物油取样量对样品检测结样品取样量g检测结果，µg/kg平均值µg/kg相对标准偏差%123大豆油（8.0）0.24.348.86.416.5234.250.47.769.98.258.6412.988.368.318.98.523.845样品取样量g检测结果，µg/kg平均值µg/kg相对标准偏差%1239.588.539.418.642.08.769.429.477.72菜籽油（9.0）0.27.386.569.697.8820.610.47.459.566.947.9817.409.218.988.869.021.978.239.469.799.168.982.09.668.078.878.878.97花生油（6.0）0.24.233.285.664.3927.290.45.984.325.035.1116.306.036.415.706.055.886.026.225.796.013.582.06.555.415.995.989.53测定大豆油、菜籽油和花生油等食用植物油中苯并[a]芘，主要使用的提取溶表2提取溶剂量对样品检测结果重复性的影响标浓度正己烷用量1.0mL3.0mL5.0mL8mL10.0mLRSD%RSD%RSD%RSD%RSD%大豆油42.968.077.16.390.49.899.16.56（8.0）菜籽油（9.0）50.225.472.878.67.282.781.48.7花生油（6.0）45.920.470.176.45.981.86.683.99.8取越完全，正己烷超过8.0mL后检测结果无显著差异，考虑绿色环保及节约试剂，因表3不同提取方式、不同提取时间条件下提取效果比较提取方式提取时间样品（加标浓度µg/kg）大豆油（8.0）菜籽油（9.0）花生油（6.0）旋涡提取方式(测试回收率%)0.5min86.191.282.182.387.788.75min90.184.389.310min87.798.390.320min85.280.989.6振摇提取方式(测试回收率%)0.5min81.194.687.689.098.275min88.888.990.910min82.589.720min83.980.525℃超声波提取方式(测试回收率%)0.5min72.370.978.379.670.779.55min74.580.980.410min81.290.988.220min87.986.389.640℃超声波提取方式(测试回收率%)0.5min83.382.080.285.281.379.65min87.689.680.510min99.880.383.420min90.187.650℃超声波提取方式(测试回收率%)0.5min82.389.080.482.480.988.65min81.688.589.110min83.986.890.920min90.994.0692.770℃超声波提取方式(测试回收率%)0.5min83.580.580.380.885.088.75min84.994.086.510min91.094.384.220min97.288.4且测试结果的相对标准偏差为3.14%,低于另外几种净化柱，因此选择净化柱3#为最优8样品净化柱流速检测结果µg/kg平均值µg/kg相对标准偏差%重复3大豆油慢澄清净化柱2#快浑浊8.908.509.789.067.23净化柱3#快澄清净化柱4#慢澄清5.22净化柱5#快浑浊4.363.924.8124.46常用的分子印迹柱是6mL规格，为了尽可能洗去分子模板残留，将活化阶段分别样品加标浓度(µg/kg)测试回收率%3mL5mL7mL大豆油8.095.694.5菜籽油9.090.693.3花生油6.089.990.09测试回收率满足要求。考虑试剂成本等因素，最终选用6mL正己烷作为净化时样品加标浓度(µg/kg)测试回收率%3mL6mL10mL大豆油8.095.990.5菜籽油9.094.595.3花生油6.096.694.3脱不完全，回收率低，当二氯甲烷的用量加大到6mL时，测试回收率样品加标浓度(µg/kg)测试回收率%3mL6mL大豆油8.070.775.286.885.4菜籽油9.070.076.590.389.7花生油6.069.678.889.690.6样品名称(µg/kg)氮吹装置，40℃恒温装置，40℃常温静置（%）RSD%耗时minRSD%耗时minRSD%耗时min大豆油8.086.69.03-591.59.53-580.26.6菜籽油9.083.39.93-57.53-57.9花生油6.082.23-589.49.33-589.99.62.4.5挥干后重新溶解溶剂选择杂质进去，1.0mL水样为未检出，这是样品名称（加标浓1mL二甲基亚砜RSD%RSD%RSD%RSD%大豆油（8.0）8856.981.0未检出/菜籽油（9.0）90.27.790.49.2未检出/花生油92.59.286.99.0未检/（6.0）出样品名称（加标浓度µg/kg）10%DMSO亲试剂缓释液测定平均值RSD%测定平均值RSD%测定平均值RSD%测定平均值RSD%大豆油（8.0）9.2822.067.49.288.065.25菜籽油（9.0）23.578.679.489.788.894.32花生油（6.0）7.345.27.836.018.65苯并[a]芘酶联免疫吸附试剂盒中抗体对提取溶液35%，且在反应中，基质效应对检测效果和结果的重复性均有影µg/kg）稀释比例测定平均值RSD%测定平均值RSD%测定平均值RSD%测定平均值RSD%测定平均值RSD%大豆油（8.0）4.97.37.126.222.0菜籽油（9.0）7.78.29.26.48.527.527.5花生油（6.0）20.25.68.85.844.921.6警告———苯并[a]芘是一种已知的致癌物质，测定时应特别注意安全防护！测定4.1.3苯并[a]芘标准工作液及标曲的标，绘制标准曲线。标准曲线如下图所示，y=-2.63x+1.X=pVf1000X——试样中苯并[a]芘的含量，单位为微克每千克(μg/kgV——样品测定液体积的数值,单位为毫升(mL);ƒ——在前处理过程中的稀释倍数；m——试样的称样量，单位为克（g苯并(α)芘测试样品共计8个：标准起草小组将苯并(α)芘测试样品进行测定，测定结果与参考浓度进行比较，样品名称测定值/µg/kg（3次重复）平均值/µg/kg相对标准偏差（RSD）%DDY1未检出未检出未检出未检出/DDY24.393.983.874.086.7DDY38.528.889.17DDY47.0CZY1未检出未检出未检出未检出/CZY25.285.064.364.909.8CZY39.239.049.639.0CZY45.0HSY1未检出未检出未检出未检出/HSY26.036.236.556.274.18HSY39.189.159.389.24HSY420.2221.1920.095.80假阴性和假阳性，表明方法重复性好，能满足食用油中苯并[a样品名称测量值/µg/kg平均值/µg/kg相对标准偏差（RSD）重复1重复2重复3重复4重复5DDY1未检出未检出未检出未检出未检出//DDY37.917.067.027.177.657.365.4%法重复性好，能满足食用油中苯并[a]芘样品重复1重复2重复3重复4重复5平均值(µg/kg）RSD%DDY39.439.139.249.589.029.282.43CZY32.20HSY39.289.219.159.049.364.68样品平均值(µg/kg）RSD%DDY39.439.369.428.788.999.203.20CZY39.59.487.19HSY39.289.25 检测对象回收率（%）不同样品、不同人、不同地点批间CV（%）批内CV（%）累计人次苯并[α]芘81.91%-116.64%7.30%-14.7%2.61%-6.36%29为检验本标准测定食品中苯并[a]芘含量的实验室验室对大豆油、菜籽油和花生油等食品样品中苯并[a]芘进行了验证汇总结果表明，制定的食品中苯并[a]芘的测定重复性检测对象回收率（%）不同样品、不同人、不同地点，批间CV（%