SNT 2309-2009进出口乳及乳制品中四环素类药物残留检测方法 放射受体分析法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2309—2009进出口乳及乳制品中四环素类药物残留检测方法放射受体分析法2009-07-07发布2010-01-16实施玉家质量监督检验检瘦总局I本标准的附录A为资料性附录。1进出口乳及乳制品中四环素类药物残留检测方法放射受体分析法本标准规定了进出口乳及乳制品中四环素类药物残留测定的制样和放射受体分析方法。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3试样制备和保存干粉样品室温密封保存，液体样品0℃~4℃冷藏可保存5d,—15℃以下冷冻可保存2个月。4检测方法4.1方法提要测定的基础是竞争性受体免疫反应。当样品中含有四环素类抗生素时，样品中四环素类抗生素残留物与受体上的结合位点结合，从而阻止了[3H]标记的四环素与受体试剂位点的结合。样品中的四环品中[³H]含量的cpm值(countperminute,即每分钟脉冲数)越低。样品中四环素类抗生素残留量与4.2.1牛奶中的四环素类抗生素CharmⅡ放射免疫试剂盒(MRLsCompetitiveAssay)¹):药片标识为T。4.2.3土霉素标准品，1)CharmⅡ牛奶中四环素类抗生素竞争性受体结合测试试剂盒是由Charm公司提供产品的商品名称。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。24.3.5恒温加热器：80℃±2℃,35℃±1℃。5.1阴性对照和阳性对照溶液的准备…置在0℃~4℃冰浴中待测。30μg/L的土霉素。放置在0℃-4℃冰浴中待测5.2.1液态奶：取20mL牛奶|3400r/min离心5min,除去上层脂肪层。冰浴至0℃~4℃待测。k样品，加水28mL溶解。冰浴至g℃~4℃待测。5.3.3将5mL牛奶样品，或的性对照溶液(5.1.1)或阻性对照溶液(5.1.2)加入试管中，在涡旋混合器上振荡10s,使之混匀。5.3.4加[3H]标记的四环素药片(4.2.1.26,在涡旋混合器上振荡h₀s,使之混匀。5.3.5置于恒温加热器中35℃士2℃保温3min。5.4控制点的确定5.4.2按方法5.3测定6个非重复的阳性对照溶液(5.1.2)(含土霉素30μg/kg)的计数值，求出平均值乘上系数1.23,即为筛选水平的控制点。3样品抗生素鲜奶/(pg/kg)奶粉、乳清粉/(μg/kg)四环素土霉素金霉素强力霉素4(资料性附录)仪器和试剂的日常监控A.1.1每一批新的试剂需测定零基准平均值，测定三次阴性对照液cpm值，其平均值即为零基准平均值。当遇到样品“初筛怀疑阳性”时，通过测定阴性对照液(5.1.1)和阳性对照液(5.1.2)cpm值与零基准平均值的cpm值比较，可确定试剂和液体闪烁计数仪是否正常。A.1.1.1正常情况下，阴性对照测定值一般在零基准平均值上下波动，幅度约±20%。A.1.1.2正常情况下，阳性对照测定值小于控制点。A.1.1.3如果A.1.1.1或A.1.1.2条件不符，应A.1.2新购试剂应首先检测阳性对照和阴性对照的比值，若比值小于0.7,表明试剂有效，可以进行检测；若比值大于0.7,表明试剂失效。取空的专用试管放入液体闪烁计数仪计数，计数值需小于50,否则需调零。如测得的计数值偏大，可能由液体闪烁计数仪有大量静电存在所引起，可用湿抹布将试管外壁湿润后放入液体闪烁计数仪进A.2.2[³H]通道校准A.3阴性样品的监控A.4.1测试的环境温度为4℃~35℃,湿度：<70%。A.4.2每次同时运行12个样品最佳。5ThisstandardwasproposedbyandwasunderchargeofNationalRegulatoryCommissionforCertifi-cationandAccreditation.6DeterminationoftetracyclinesresiduesinmilkanddiaryRadio-receptormethodThisstandardspecifiesthemethodofsamplepreparationanddetefminationoftetracyclinesantibiot-standardisapplicabletothedeterminationofTetracyclituteprovisionsofthisstandard.Fordatedreferences,Subseqferredtoapplies.3Samplepreparationsamples.Keepthepreparedsamplesintotwocleancontainers,sealandlabel.Inthecourseofsample7thesamplesbindtothebinding-sitesofreceptorandp4.2.1Charmlltestkitfordetectionoftetracyclinesinmilk”:t4.2.1.1Thereceptor4.2.2Negativecontrolmjkpowdel,Milkcertifiedtoteantini4.2.3Oxytetracyclinestandard.4.2.4Scintillationfluid.alentproductsmaybeusedforthisstandard,iftheyhavethesameeffect.84.3.3Centrifuger:≥3400r/min.4.3.4Vortexmixer.powder(4.2.2),Coolto0℃~4℃beforeuse.coolto0℃~4℃beforeuse.3400r/min,discardtheupperfatlayer.Chillwithiceto0℃~4℃foruse.dissolvewith28mLwater.Chillwithiceto0℃~4℃foruse.tube.9thepellet.5.3.9Add3.0mLScintillationfluid(4.2.4)tothetesttube,capandmixwell.plethreefoldusingthenegativecontrolsolution(5.1.1)asthediluent,retestaccordingtostep5.3,thencomparecpmofdilutedsamplewithcontrolpoint.tedrange(SeeannexA).IfDrugsSampleMilk/(rg/kg)MilkPowder,wheyPowder/(μg/kg)TetracyclineOxytetracyclineChlortetracyclineDoxycycline-200Undernormalconditions,thenegativecontrofthezerocontrolaverage.trolpoint.liquidscintillationcounterinseveraltimestillreac